Una composición terapéutica de cartílago para su uso en un procedimiento para trasplantar un condrocito inyectable para trasplante de condrocitos autólogos,

obtenible: colocando 1 ml de un cultivo de condrocitos contenido en el frasco número 1 (rojo) en una jeringa estéril de 1 ml e inyectando el cultivo celular en el frasco número 2 (azul) que contiene fibrinógeno en polvo liofilizado blanco o amarillo claro insertando la jeringa en el frasco número 2 en dirección vertical, de modo que la concentración de fibrinógenos esté en el intervalo de 10 mg/ml a 200 mg/ml; inyectando 1 ml de un cultivo celular contenido en el frasco número 1 (rojo) en el frasco número 3 (rojo, pequeño) que contiene trombina en polvo liofilizado blanco insertando la jeringa en el frasco número 3 en dirección vertical, inyectando de este modo gradualmente líquido rojo; recogiendo 0,1 cm 3 de un contenido de 1 ml del frasco número 3 (rojo, pequeño) usando una jeringa de 1 ml, seguido de inyección en un fondo del frasco número 4 (amarillo) de modo que la concentración de trombina esté en el intervalo de 1 UI/ml a 200 UI/ml; añadiendo los contenidos completos de dos frascos que contienen suspensión de condrocitos al frasco número 4 (amarillo) usando una jeringa estéril de 1 ml, seguido de mezclar los contenidos dos o tres veces usando la jeringa; confirmando la disolución completa de los contenidos del frasco número 2 (azul) y después inyectando la totalidad del material disuelto en una jeringa de 1 ml; inyectando el agente terapéutico celular bien mezclado del frasco número 4 (amarillo) en una jeringa de 1 ml; y montando dos jeringas de 1 ml rellenas con los contenidos del frasco número 2 (azul) y el frasco número 4 (amarillo) en un soporte de reposo seguido de montaje de una punta de rosca en las jeringas y mezclando los contenidos de las jeringas usando la punta de mezcla del extremo frontal de las mismas en las que la mezcla resultante va a trasplantarse en una región de cartílago dañada de un animal

Campo técnico

La presente invención se refiere a una composición terapéutica de cartílago para su uso en un procedimiento para trasplantar un agente terapéutico de cartílago (Chondron: condrocitos cultivados in vitro para trasplante de condrocitos autólogos) mediante inyección. Más específicamente, la presente invención se refiere a una composición terapéutica de cartílago para su uso en un procedimiento para trasplantar un agente terapéutico de cartílago que implica mezclar y trasplantar matrices, que incluyen fibrina, ácido hialurónico y colágeno, que constituyen los ingredientes principales del cartílago, por el que se resuelven los inconvenientes del injerto osteoperióstico convencional, es posible el tratamiento de una amplia serie de defectos y osteoartritis agravada y se alivia la carga de los pacientes a tratar mediante un procedimiento de operación quirúrgica simplificado, promoviendo de este modo de forma más rápida y eficaz la generación de cartílago y mejorando la satisfacción del cliente.

Antecedentes de la técnica

Recientemente, la biología molecular, biología celular, biología del desarrollo e ingeniería de tejidos, como se conoce bien, han contribuido a mejoras en la salud y calidad de vida mediante el desarrollo de procedimientos para mejorar, mantener y restaurar la función de tejidos y órganos dañados.

La ingeniería de tejidos produce sustitutos tisulares por control de la adhesión, crecimiento y diferenciación celulares y la actividad de citocinas y factores de crecimiento mediante la interacción con una matriz de base celular como un reemplazo de tejido para secretar de este modo sustancias señalizadoras intracelulares. El trabajo temprano en ingeniería de tejidos se ha centrado principalmente en la utilización de células solas o terapia celular utilizando un complejo de matriz producido por células, limitando de este modo en gran medida las aplicaciones del mismo lo que conduce a una necesidad urgente para el desarrollo de sustitutos de tejido más avanzados y por lo tanto ha conducido al desarrollo de agentes terapéuticos de cartílago utilizando condrocitos y mezclas de matriz.

Se ha demostrado que la inestabilidad de las articulaciones y deficiencia parcial de los meniscos aceleran la abrasión y el daño de las superficies articulares. Además, el cartílago articular, una vez que se ha dañado, no puede regenerarse completamente in vivo. La estimulación crónica aplicada al cartílago articular dañado provoca dolor articular y limitación progresiva del movimiento articular, dando como resultado artritis degenerativa letal. Los condrocitos que no pueden proliferar in vivo pueden usarse eficazmente en la regeneración de las articulaciones por inducción de la diferenciación y proliferación de condrocitos mediante el ajuste de las condiciones de cultivo in vitro. Como resultado, los condrocitos trasplantados adquieren propiedades histológicas y mecánicas similares a las del cartílago de las articulaciones normales y por lo tanto no se observa rechazo de trasplantes o destrucción de tejido con buenos resultados en más del 90 % de los pacientes.

Al mismo tiempo, el trasplante de condrocitos autólogos (ACT) es una terapia eficaz para el tratamiento de cartílago articular dañado. Otras terapias tales como artroplastia de abrasión, perforación de microfractura, auto injerto del periostio y pericondrio implican el reemplazo de cartílago articular dañado con fibrocartílago o tejidos fibrocartilaginosos sin producción sustancial de cartílago hialino. Sin embargo, en comparación con cualquier otra técnica convencional, la ventaja más importante de ACT consiste en la producción de cartílago hialino.

A pesar de tan excelente ventaja, el trasplante de condrocitos autólogos (ACT) padece algunas dificultades técnicas y teóricas como se muestra en la figura 1.

Es decir, en primero lugar, esta técnica de trasplante de condrocitos autólogos requiere una gran incisión en el sitio quirúrgico para la recogida del periostio. Dicha gran incisión da como resultado dolor grave después de la cirugía y motilidad de la rodilla reducida.

En segundo lugar, la sutura del parche de periostio en el límite de un área defectuosa de cartílago requiere una técnica quirúrgica muy complicada que se ha indicado que en ocasiones está acompañada de hipertrofia del periostio y adhesión intra-articular. La sutura del periostio es el procedimiento que consume más tiempo entre los procedimientos quirúrgicos para realizar trasplante de condrocitos autólogos.

Además, el trasplante de condrocitos autólogos tiene la desventaja de que en ocasiones se produce filtración de condrocitos desde los sitios transplantados durante el procedimiento de rehabilitación tal como ejercicio terapéutico de las rodillas después de la operación quirúrgica y los condrocitos trasplantados, que están presentes en una fase liquida en los sitios transplantados, se localizan hacia un lado por acción de la gravedad, dando como resultado de este modo una distribución desigual y crecimiento heterogéneo del cartílago.

Para resolver los problemas anteriormente mencionados, una gran parte de la investigación se ha centrado en la utilización de polímeros biodegradables y biocompatibles como un vehículo o armazón. Por ejemplo, se ha emprendido una gran cantidad de investigación sobre la ingeniería de tejidos para cartílago in vivo e in vitro, utilizando polímeros de origen natural tales como colágeno, ácido hialurónico y fibrina como biomateriales o utilizando polímeros sintéticos tales como ácido poliláctico o ácido poliglicólico.

El armazón desempeña un papel importante en el mantenimiento de una estructura porosa necesaria para el crecimiento y proliferación de células y fenotipos de condrocitos. La fibrina y el acido hialurónico son polímeros adecuados que satisfacen las necesidades para su uso como armazón, como se ha mencionado anteriormente. La fibrina es una sustancia de origen natural y es un vehículo biológico muy adecuado para el trasplante de condrocitos. Además, ya se ha indicado que la fibrina tiene ventajas tales como biocompatibilidad, biodegradabilidad y capacidad de unión a huesos subcondrales (huesos que están estructuralmente adyacentes a, es decir debajo o inferiores al cartílago). Además, las estructuras de fibrina pueden modificarse fácilmente en forma deseadas y se usan fácilmente para inyección. Al mismo tiempo el ácido hialurónico es una agente lubricante, hallado en el fluido sinovial de articulaciones y sirve para controlar el contenido de humedad en las articulaciones.

El documento US 2001/0014475 A1 desvela un procedimiento para cultivar células en partículas de micro vehículo biodegradables y más específicamente cultivar condrocitos durante un periodo prologando de tiempo hasta que se agregan. Estas células agregadas pueden inyectarse directamente o modelarse para implantación en el cuerpo.

El documento US 2002/008220 A1 se refiere a un procedimiento y composición de polímero para reparar un tejido de un paciente en el que a la composición de polímero preferentemente comprende al menos un componente sanguíneo. El componente sanguíneo también puede comprender fibrinógeno y trombina.

El documento WO 2005/060987 A1 se refiere a una composición terapéutica de cartílago para reparar tejido de cartílago dañado. Comprende una mezcla de componentes de condrocitos y trombina y una matriz de fibrinógeno que contiene fibrinógeno.

Sin embargo, persiste un problema. Puesto que la mayoría de los armazones para ingeniería de tejidos son de tipo sólido tales como parches, esponjas y láminas, los agentes terapéuticos de cartílago para ingeniería de tejido son difíciles de unir a cartílago nativo adyacente. Este hecho es importante en tanto que los agentes terapéuticos de cartílago transplantados en regiones defectuosas de cartílago ejercen una cura incompleta de la región límite entre ellos.

Divulgación de la invención

Problema técnico

La presente invención se ha realizado a la vista de los anteriores problemas y proporciona una composición terapéutica de cartílago para su uso en un procedimiento para el trasplante de un agente terapéutico de cartílago mediante inyección.

Por lo tanto, es un primer objeto de la presente invención resolver la inconveniencia del injerto osteoperióstico convencional por mezcla y trasplante de matrices que incluyen colágeno, ácido hialurónico... [Seguir leyendo]

1. Una composición terapéutica de cartílago para su uso en un procedimiento para trasplantar un condrocito inyectable para trasplante de condrocitos autólogos, obtenible:

colocando 1 ml de un cultivo de condrocitos contenido en el frasco número 1 (rojo) en una jeringa estéril de 1 ml e inyectando el cultivo celular en el frasco número 2 (azul) que contiene fibrinógeno en polvo liofilizado blanco o amarillo claro insertando la jeringa en el frasco número 2 en dirección vertical, de modo que la concentración de fibrinógenos esté en el intervalo de 10 mg/ml a 200 mg/ml; inyectando 1 ml de un cultivo celular contenido en el frasco número 1 (rojo) en el frasco número 3 (rojo, pequeño) que contiene trombina en polvo liofilizado blanco insertando la jeringa en el frasco número 3 en dirección vertical, inyectando de este modo gradualmente líquido rojo; recogiendo 0,1 cm3 de un contenido de 1 ml del frasco número 3 (rojo, pequeño) usando una jeringa de 1 ml, seguido de inyección en un fondo del frasco número 4 (amarillo) de modo que la concentración de trombina esté en el intervalo de 1 UI/ml a 200 UI/ml; añadiendo los contenidos completos de dos frascos que contienen suspensión de condrocitos al frasco número 4 (amarillo) usando una jeringa estéril de 1 ml, seguido de mezclar los contenidos dos o tres veces usando la jeringa; confirmando la disolución completa de los contenidos del frasco número 2 (azul) y después inyectando la totalidad del material disuelto en una jeringa de 1 ml; inyectando el agente terapéutico celular bien mezclado del frasco número 4 (amarillo) en una jeringa de 1 ml; y montando dos jeringas de 1 ml rellenas con los contenidos del frasco número 2 (azul) y el frasco número 4 (amarillo) en un soporte de reposo seguido de montaje de una punta de rosca en las jeringas y mezclando los contenidos de las jeringas usando la punta de mezcla del extremo frontal de las mismas en las que la mezcla resultante va a trasplantarse en una región de cartílago dañada de un animal.

2. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en la que la etapa de inyección mediante inserción de una aguja de jeringa se lleva a cabo inyectando directamente los contenidos de la jeringa sobre el liofilizado, sin inyectar a lo largo de la pared interior del frasco, mientras se evita cuidadosamente que una punta de aguja entre en conectad con el liofilizado.