Complejos de lipoproteínas cargados y sus usos.

Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido para utilizar en un método de tratamiento de dislipidemia en un sujeto,

comprendiendo el complejo de lipoproteínas una fracción de apolipoproteína y una fracción lipídica, en el que dicha fracción lipídica consiste esencialmente en (i) una esfingomielina, (ii) aproximadamente del 0,2 al 6% en peso de uno o más fosfolípidos cargados negativamente, y, opcionalmente (iii) lecitina, comprendiendo el tratamiento administrar al sujeto una cantidad eficaz de dicho complejo de lipoproteínas.

Complejos de lipoproteínas cargados y sus usos 5 1. REFERENCIA CRUZADA CON SOLICITUDES RELACIONADAS

[0001] Esta solicitud reivindica el beneficio bajo las disposiciones de 35 U.S.C. § 119(e) de la solicitud provisional de los Estados Unidos No. 60/665,180, presentada el 24 de marzo de 2005.

2. CAMPO TÉCNICO

[0002] La presente divulgación proporciona complejos de lipoproteínas cargados, composiciones farmacéuticas que comprenden los complejos y los procedimientos de uso de los complejos para tratar o evitar una variedad de dolencias y trastornos, entre los que se incluyen dislipidemia y/o las enfermedades y/o dolencias

asociadas a la misma.

3. ANTECEDENTES

[0003] El colesterol circulante se transporta mediante las lipoproteínas del plasma - partículas complejas 20 compuestas por lípidos y proteínas que transportan lípidos en la sangre. Cuatro tipos principales de partículas de

lipoproteínas circulan en plasma y están implicadas en el sistema de transporte de las grasas: quilomicrones, lipoproteína de muy baja densidad (VLDL), lipoproteína de baja densidad (LDL) y lipoproteína de alta densidad (HDL). Los quilomicrones constituyen un producto de vida corta de la absorción de las grasas intestinales. VLDL y particularmente, LDL, son responsables de la liberación de colesterol desde el hígado (en donde se sintetiza u 25 obtiene de las fuentes de la dieta), hasta los tejidos extrahepáticos, incluyendo las paredes arteriales. HDL, en contraste, media en el transporte Inverso del colesterol (TIC), la eliminación de lípidos del colesterol, en particular desde los tejidos extra he páticos hasta el hígado, en el que se almacena, cataboliza, elimina o recircula. HDL juega también un papel en la Inflamación, transportando lípidos oxidados e interleucina.

[0004] Las partículas de lipoproteínas tienen un núcleo hidrófobo que comprende colesterol (normalmente en la forma de un éster de colesterilo) y triglicérldos. El núcleo está rodeado por un revestimiento superficial que comprende fosfolípidos, colesterol sin esterificary apolipoproteínas. Las apolipoproteínas median en el transporte de lípidos, y algunas pueden interactuar con las enzimas Implicadas en el metabolismo de los lípidos. Se han identificado al menos diez apolipoproteínas, incluyendo: ApoA-l, ApoA-ll, ApoA-IV, ApoA-V, ApoB, ApoC-l, ApoC-ll, 35 ApoC-lll, ApoD, ApoE, ApoJ y ApoH. Se encuentran también asociadas con las lipoproteínas otras proteínas tales como LCAT (lecitina: colesterol aciltransferasa), CETP (proteína de transferencia de ásteres de colesterilo), PLTP (proteína de transferencia de fosfolípidos) y PON (paraoxonasa).

[0005] Enfermedades vasculares tales como cardlopatías, enfermedad de las arterias coronarias y 40 ateroesclerosis están abrumadoramente relacionadas con elevados niveles de colesterol en suero. Por ejemplo, la ateroesclerosis es una enfermedad de progresión lenta caracterizada por la acumulación de colesterol en el interior de la pared arterial. Evidencias convincentes apoyan la teoría de que los lípidos depositados en las lesiones ateroescleróticas se derivan principalmente de las LDL plasmáticas; de esta manera, las LDL se han conocido popularmente como el colesterol "malo". En contraste, los niveles de HDL en suero están correlacionados 45 inversamente con las cardiopatías. A su vez, altos niveles de HDL séricos se consideran como un factor de riesgo negativo. Se ha teorizado que altos niveles de HDL en plasma no son solo protectores frente a la enfermedad de las arterias coronarias, sino que realmente inducen la regresión de la placa ateroesclerótica (véase, por ejemplo, Badlmon y col., 1992, Circulation 86(Suppl. III): 86 - 94; Dansky y Fisher, 1999, Clrculatlon 100: 1762 - 63; Tanglrala y col., 1999, Circulation 100(17): 1816 - 22; Fan y col., 1999, Atherosclerosis 147(1): 139 - 45; Deckert y 50 col., 1999, Circulation 100(11): 1230 - 35; Boisvert y col., 1999, Arterioscler. Thromb. Vaso. Blol. 19(3): 525 - 30; Benolt y col., 1999, Circulation 99 (1): 105 - 10; Holvoet y col., 1998, J. Clin. Invest. 102(2): 379 - 85; Duverger y col., 1996, Circulation 94(4): 713 - 17; Miyazaki y col., 1995, Arterioscler. Thromb. Vaso. Blol. 15(11): 1882 - 88; Mezdour y col., 1995, Atherosclerosis 113(2): 237 - 46; Llu y col., 1994, J. Lipid Res. 35(12): 2263 - 67; Plump y col., 1994, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 91(20): 9607 - 11; Paszty y col., 1994, J. Clin. Invest. 94(2): 899 - 903; She y 55 col., 1992, Chin. Med. J. (Engl). 105(5): 369 - 73; Rubin y col., 1991, Nature 353(6341): 265 - 67; She y col., 1990, Ann. NY Acad. Sci. 598: 339 - 51; Ran, 1989, Chung Hua Ping L¡ Hsueh Tsa Chih (traducido también como: Zhonghua Bing L¡ Xue Za Zhi) 18(4): 257 - 61; Quezado y col., 1995, J. Pharmacol. Exp. Ther. 272 (2): 604 - 11; Duverger y col., 1996, Arterioscler. Thromb. Vasc. Blol. 16(12): 1424 - 29; Kopfler y col., 1994, Circulation; 90 (3): 1319 - 27; Miller y col., 1985, Nature 314(6006): 109 - 11; Ha y col., 1992, Biochim. Biophys. Acta 1125(2): 223 -

29; Beitz y col., 1992, Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids 47(2): 149 - 52). Como consecuencia, los HDL se han conocido popularmente como el colesterol "bueno", (véase, por ejemplo, Zhang, y col., 2003 Circulation 108: 661 -663).

[0006] El papel protector de HDL se ha confirmado en numerosos estudios (por ejemplo, Miller et al., 1977, Lancet 1 (8019): 965 - 68; Whayne y col., 1981, Atherosclerosis 39: 411 - 19). En estos estudios, niveles elevados de LDL parecen estar asociados con un riesgo cardiovascular creciente, mientras que niveles altos de HDL parecen conferir protección cardiovascular. Los estudios ¡n vivo han demostrado además el papel protector de HDL mostrando que infusiones de HDL en conejos pueden Impedir el desarrollo de lesiones arteriales inducidas por el 10 colesterol (Badimon y col., 1989, Lab. Invest. 60: 455 - 61) y/o inducen su regresión (Badimon et al., 1990, J. Clin. Invest. 85: 1234-41).

3.1 Transporte inverso de Colesterol, HDL y Apolipoproteína A-I

[0007] La ruta del transporte Inverso del colesterol (TIC) actúa para eliminar el colesterol de los tejidos más extrahepáticos y es crucial para mantener la estructura y la función de la mayoría de las células en el cuerpo. La TIC consiste principalmente en tres etapas: (a) la salida de colesterol, es decir, la eliminación inicial de colesterol procedente de diversos grupos de células periféricas; (b) la esteriflcaclón del colesterol por la acción de la lecitina: colesterol aclltransferasa (LCAT), evitando una reentrada en las células del colesterol que ha salido previamente; y 20 (c) captación del colesterol HDL y de los ásteres de colesterllo en los hepatocltos para la hidrólisis, a continuación la recirculación, el almacenamiento, la excreción en la bilis o el catabolismo en los ácidos billares.

[0008] LCAT, la enzima clave en el TIC, se produce en el hígado y circula en el plasma asociada a la fracción de HDL. LCAT convierte el colesterol procedente de las células en ásteres de colesterllo, que están secuestrados en

HDL destinados a la eliminación (véase Joñas 2000, Blochlm. Biophys. Acta 1529(1-3): 245 - 56). La proteína de transferencia de ásteres de colesterllo (CETP) y la proteína de transferencia de fosfolípídos (PLTP) contribuyen a remodelar adlclonalmente la población de HDL circulante. CETP mueve los ésteres de colesterílo fabricados por LCAT a otras lipoproteínas, particularmente a las llpoproteínas que comprenden ApoB, tales como VLDL y LDL. PLTP suministra lecitina a HDL. Los triglicéridos HDL están catabolizados por la triglicérido lipasa hepática 30 extracelular, y el colesterol de la lipoproteína se elimina por diversos mecanismos vía hígado.

[0009] Las características funcionales de las partículas de HDL vienen determinadas principalmente por sus componentes principales de apolipoproteínas tales como ApoA-l y ApoA-ll. Se han observado también cantidades menores de ApoC-l, ApoC-ll, ApoC-lll, ApoD, ApoA-IV, ApoE, ApoJ asociadas con HDL. HDL existe en una amplia

variedad de tamaños diferentes y mezclas diferentes de los constituyentes anteriormente mencionados, dependiendo del estado de remodelación durante la cascada o ruta metabólica del TIC.

[0010] Cada partícula de HDL comprende normalmente al menos 1 molécula, y usualmente de dos a 4 moléculas, de ApoA-l. Las partículas de HDL pueden comprender también solo ApoE (partículas gamma-LpE), que se sabe que

son también responsables de la salida del colesterol, tal como describe el Prof. Gerd Assmann (véase, por ejemplo, von Eckardstein y col., 1994, Curr Opin Lipidol. 5(6): 404 - 16). ApoA-l se sintetiza por el hígado y el intestino delgado como preapolipoproteína A-I, que se segrega como preapolipoproteína... [Seguir leyendo]

1. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido para utilizar en un método de tratamiento de dislipidemia en un sujeto, comprendiendo el complejo de lipoproteínas una fracción de apolipoproteína y una fracción lipídica, en el que dicha fracción lipídica consiste esencialmente en (i) una esfingomielina, (ii) aproximadamente del 0, 2 al 6% en peso de uno o más fosfolípidos cargados negativamente, y, opcionalmente (iii) lecitina, comprendiendo el tratamiento administrar al sujeto una cantidad eficaz de dicho complejo de lipoproteínas.

2. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según la reivindicación 1, para utilizar en un método de tratamiento de dislipidemia, según la reivindicación 1, en el que la fracción lipídica incluye lecitina y la lecitina y esfingomielina están presentes en una relación molar que varía de 1:20 a 3:10.

3. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según la reivindicación 1 ó 2, para utilizar en un método de tratamiento de dislipidemia, según la reivindicación 1 ó 2, en el que dicho uno o más fosfolípidos cargados 15 negativamente del complejo de lipoproteínas son (a) aproximadamente del 1 al 6% en peso de la fracción lipídica, (b) aproximadamente del 1 al 4% en peso de la fracción lipídica, (c) aproximadamente del 1 al 3% en peso de la fracción lipídica, o (d) aproximadamente del 1 al 2% en peso de la fracción lipídica.

4. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para utilizar en un método de tratamiento de dislipidemia, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el fosfolípido cargado negativamente del complejo de lipoproteínas (i) comprende (a) fosfatidilinositol; (b) fosfatidilserina; (c) ácido fosfatídico; o (d) fosfatidilglicerol, o (ii) se selecciona entre fosfatidilinositol, fosfatidilserina, ácido fosfatídico, fosfatidilglicerol y mezclas de los mismos.

5. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para utilizar en un método de tratamiento de dislipidemia, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la relación molar lípido:apolipoproteína del complejo de lipoproteínas (a) varía de aproximadamente 2:1 a 200:1 o (b) es de aproximadamente 50:1, en el que el valor para la apolipoproteína se expresa en equivalentes de ApoA-I.

6. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según la reivindicación 5, para utilizar en un método de tratamiento de dislipidemia, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la apolipoproteína del complejo de lipoproteínas (i) se selecciona entre preproapolipoproteína, preproApoA-I, proApoA-I, ApoA-I, preproApoA-II, proApoA-II, ApoA-II, preproApoA-IV, proApoA-IV, ApoA-IV, ApoA-V, preproApoE, proApoE, ApoE, preproApoA-IMilano, proApoA-IMilano, ApoA-IMilano, preproApoA-IParis, proApoA-IParis, ApoA-IParis y mezclas de las mismas,

o (ii) comprende un mimético de ApoA-I.

7. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según la reivindicación 6, para utilizar en un método de tratamiento de dislipidemia, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la apolipoproteína del complejo de lipoproteínas es (a) un homodímero y/o un heterodímero o (b) un monómero.

8. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según la reivindicación 7, para utilizar en un método de tratamiento de dislipidemia, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la relación molar lípido:apolipoproteína del complejo de lipoproteínas es aproximadamente 200:1 y el complejo de lipoproteínas contiene 2-4 equivalentes de ApoA-I, 1 molécula de fosfolípido cargado negativamente y 200 ó 400 moléculas de 45 fosfolípidos neutros totales.

9. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según la reivindicación 8, para utilizar en un método de tratamiento de dislipidemia, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que los 2-4 equivalentes de ApoA-I en el complejo de lipoproteínas son (a) 2-4 moléculas de ApoA-I; (b) 1-2 moléculas de un dímero ApoA-IM; o 50 (c) 12-40 moléculas de un péptido mimético de ApoA-I de hélice única.

10. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para utilizar en un método de tratamiento de dislipidemia, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la esfingomielina en el complejo de lipoproteínas se selecciona entre D-eritrosa-esfingomielina, D-eritrosa

dihidroesfingomielina y mezclas de las mismas.

11. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para utilizar en un método de tratamiento de dislipidemia, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que las cadenas de acilo de la esfingomielina, y/o los fosfolípidos cargados negativamente en el complejo de

lipoproteínas se seleccionan cada uno, independientemente entre sí, entre un hidrocarburo saturado, monoinsaturado y poliinsaturado que contiene de 6 a 24 átomos de carbono.

12. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para utilizar en un método de tratamiento de dislipidemia, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la fracción lipídica incluye lecitina y las cadenas acilo de la lecitina se seleccionan entre un hidrocarburo saturado, monoinsaturado y poliinsaturado que contiene de 6 a 24 átomos de carbono.

13. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para utilizar en un método de tratamiento de dislipidemia, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la fracción lipídica incluye lecitina y la lecitina se selecciona entre 1-palmitoil-2-oleoil-fosfatidilcolina (POPC) , dipalmitoilfosfatidilcolina (DP-PC) y mezclas de las mismas.

14. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para 15 utilizar en un método de tratamiento de dislipidemia, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que:

(i) la cantidad de complejo de lipoproteínas cargado administrado (a) es eficaz para aumentar el nivel en suero del sujeto de apolipoproteína libre o complejada en aproximadamente 10-300 mg/dl en comparación con el nivel basal o

(b) varía de aproximadamente 1 a 100 mg/kg de equivalentes de ApoA-I por inyección; o (ii) el complejo de lipoproteínas cargado (a) se administra intravenosamente, (b) se administra auxiliarmente con una resina de ácidos

biliares, niacina, una estatina, un fibrato y/o un inhibidor de la absorción del colesterol, o (c) se administra en forma de una composición farmacéutica que comprende el complejo de lipoproteínas y un vehículo, diluyente y/o excipiente farmacéuticamente aceptable.

15. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para utilizar en un método de tratamiento de dislipidemia, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la dislipidemia en el sujeto se caracteriza por una o más dolencias seleccionadas entre inflamación, enfermedad de Alzheimer, ictus, ictus isquémico, ataque isquémico transitorio, infarto de miocardio, angina de pecho, hipertensión renovascular, insuficiencia renovascular, cojera intermitente, isquemia crítica de extremidades, dolor en reposo, gangrena, cardiopatía coronaria, enfermedad de la arteria coronaria, síndrome coronario agudo, enfermedad cardiovascular, hipertensión, restenosis, enfermedad vascular, enfermedad perivascular, dislipoproteinemia, elevados niveles de colesterol de lipoproteína de baja densidad, elevados niveles de colesterol de lipoproteína de muy baja densidad, bajos niveles de lipoproteínas de alta densidad, elevados niveles de colesterol Lp (a) de lipoproteína, elevados niveles de apolipoproteína B, ateroesclerosis, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, hipercolesterolemia familiar, hiperlipidemia familiar combinada, y deficiencia de lipoproteína lipasa.

16. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para utilizar en un método de tratamiento de dislipidemia, según la reivindicación 15, en el que la deficiencia de lipoproteína lipasa es hipertrigliceridemia, hipoalfalipoproteinemia, o hipercolesterolemia.

17. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para utilizar en un método de tratamiento de dislipidemia, según la reivindicación 15, en el que la dislipidemia en el sujeto se caracteriza por aterosclerosis, síndrome coronario agudo, infarto de miocardio, angina, o ictus.

18. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido que comprende una fracción de apolipoproteína y una fracción 45 lipídica, en el que dicha fracción lipídica consiste esencialmente en (i) una esfingomielina, (ii) uno o más fosfolípidos cargados negativamente y, opcionalmente (iii) lecitina, en el que (a) la fracción lipídica incluye lecitina y la lecitina y la esfingomielina están presentes en una relación molar que varía de 1:20 a 3:10 y dicho uno o más fosfolípidos cargados negativamente son aproximadamente del 0, 2 al 6% en peso de dicha fracción lipídica, o (b) dicho uno o más fosfolípidos cargados negativamente son aproximadamente del 0, 2 al 3% en peso de dicha fracción lipídica.

19. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según la reivindicación 18 (a) , en el que dicha fracción lipídica contiene (a) aproximadamente del 1 al 6% en peso; (b) aproximadamente del 1 al 4% en peso de uno o más fosfolípidos cargados negativamente; (c) aproximadamente del 1 al 3% en peso de uno o más fosfolípidos cargados negativamente; o (d) aproximadamente del 1 al 2% en peso de uno o más fosfolípidos cargados negativamente.

20. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según la reivindicación 18 (b) , en el que dicha fracción lipídica contiene aproximadamente del 1 al 3% en peso o aproximadamente del 1 al 2% en peso de uno o más fosfolípidos cargados negativamente.

21. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según cualquiera de las reivindicaciones 18 a 20, en el que el fosfolípido cargado negativamente (i) comprende (a) fosfatidilinositol; (b) fosfatidilserina; (c) ácido fosfatídico; o (d) fosfatidilglicerol, o (ii) se selecciona entre fosfatidilinositol, fosfatidilserina, ácido fosfatídico, fosfatidilglicerol y mezclas de los mismos.

22. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según cualquiera de las reivindicaciones 18 a 21, en el que la relación molar lípido:apolipoproteína (a) varía de aproximadamente 2:1 a 200:1 o (b) es de aproximadamente 50:1, en el que el valor para la apolipoproteína se expresa en equivalentes de ApoA-I.

23. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según la reivindicación 22, en el que la apolipoproteína (i) se selecciona entre preproapolipoproteína, preproApoA-I, proApoA-I, ApoA-I, preproApoA-II, proApoA-II, ApoA-II, preproApoA-IV, proApoA-IV, ApoA-IV, ApoA-V, preproApoE, proApoE, ApoE, preproApoA-IMilano, proApoA-IMilano, ApoA-IMilano, preproApoA-IParis, proApoA-IParis, ApoA-IParis y mezclas de las mismas, o (ii) comprende un mimético de ApoA-I.

24. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según la reivindicación 23, en el que la apolipoproteína es (a) un homodímero y/o un heterodímero o (b) un monómero.

25. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según la reivindicación 24, en el que la relación molar

lípido:apolipoproteína es aproximadamente 200:1 y el complejo de lipoproteínas contiene 2-4 equivalentes de ApoA-I, 1 molécula de fosfolípido cargado negativamente y 200 ó 400 moléculas de fosfolípidos neutros totales.

26. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según la reivindicación 25, en el que los 2-4 equivalentes de ApoA-I son (a) 2-4 moléculas de ApoA-I; (b) 1-2 moléculas de un dímero ApoA-IM; o (c) 12-40 moléculas de un 25 péptido mimético de ApoA-I de hélice única.

27. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según cualquiera de las reivindicaciones 18 a 26, en el que la esfingomielina se selecciona entre D-eritrosa-esfingomielina, D-eritrosa-dihidroesfingomielina y mezclas de las mismas.

28. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según cualquiera de las reivindicaciones 18 a 27, en el que las cadenas de acilo de la esfingomielina, y/o los fosfolípidos cargados negativamente se seleccionan cada uno, independientemente entre sí, entre un hidrocarburo saturado, monoinsaturado y poliinsaturado que contiene de 6 a 24 átomos de carbono.

29. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según cualquiera de las reivindicaciones 18 a 28, en el que la fracción lipídica incluye lecitina y las cadenas acilo de la lecitina se seleccionan entre un hidrocarburo saturado, monoinsaturado y poliinsaturado que contiene de 6 a 24 átomos de carbono.

30. Complejo de lipoproteínas cargado reconstituido, según cualquiera de las reivindicaciones 18 a 29, en el que la fracción lipídica incluye lecitina y la lecitina se selecciona entre 1-palmitoil-2-oleoil-fosfatidilcolina (POPC) , dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC) y mezclas de las mismas.

31. Composición farmacéutica que comprende un complejo de lipoproteínas cargado, según cualquiera de las 45 reivindicaciones 18 a 30, y un vehículo, diluyente y/o excipiente farmacéuticamente aceptable.