Un complejo de lipoproteína que comprende una fracción de la apolipoproteína ApoA-1 y una fracción lipídica,

en el que dicha fracción lipídica consiste esencialmente en esfingomielina y aproximadamente 3 % en peso de un fosfolípido cargado negativamente, y la relación molar de la fracción lipídica respecto de la fracción de la apolipoproteína ApoA-1 está en el intervalo de aproximadamente 200: 1 a 2: 1.

Complejos de lipoproteínas cargadas y sus usos.

2. CAMPO TÉCNICO

La presente divulgación proporciona complejos de lipoproteínas cargadas, composiciones farmacéuticas que comprenden los complejos y los procedimientos de uso de los complejos para tratar o evitar una variedad de dolencias y trastornos, entre los que se incluyen dislipidemia y/o las enfermedades y/o dolencias asociadas a la misma.

3. ANTECEDENTES

El colesterol circulante se transporta mediante las lipoproteínas del plasma - partículas complejas compuestas por lípidos y proteínas que transportan lípidos en la sangre. Cuatro tipos principales de partículas de lipoproteínas circulan en plasma y están implicadas en el sistema de transporte de las grasas: quilomicrones, lipoproteína de muy baja densidad (VLDL) , lipoproteína de baja densidad (LDL) y lipoproteína de alta densidad (HDL) . Los quilomicrones constituyen un producto de vida corta de la absorción de las grasas intestinales. VLDL y particularmente, LDL, son responsables de la liberación de colesterol desde el hígado (en donde se sintetiza u obtiene de las fuentes de la dieta) , hasta los tejidos extrahepáticos, incluyendo las paredes arteriales. HDL, en contraste, media en el transporte inverso del colesterol (TIC) , la eliminación de lípidos del colesterol, en particular desde los tejidos extrahepáticos hasta el hígado, en el que se almacena, cataboliza, elimina o recircula. HDL juega también un papel en la inflamación, transportando lípidos oxidados e interleucina.

Las partículas de lipoproteínas tienen un núcleo hidrófobo que comprende colesterol (normalmente en la forma de un éster de colesterilo) y triglicéridos. El núcleo está rodeado por un revestimiento superficial que comprende fosfolípidos, colesterol sin esterificar y apolipoproteínas. Las apolipoproteínas median en el transporte de lípidos, y algunas pueden interactuar con las enzimas implicadas en el metabolismo de los lípidos. Se han identificado al menos diez apolipoproteínas, incluyendo: ApoA-I, ApoA-II, ApoA-IV, ApoA-V, ApoB, ApoC-I, ApoC-II, ApoC-III, ApoD, ApoE, ApoJ y ApoH. Se encuentran también asociadas con las lipoproteínas otras proteínas tales como LCAT (lecitina: colesterol aciltransferasa) , CETP (proteína de transferencia de ésteres de colesterilo) , PLTP (proteína de transferencia de fosfolípidos) y PON (paraoxonasa) .

Enfermedades vasculares tales como cardiopatías, enfermedad de las arterias coronarias y ateroesclerosis están abrumadoramente relacionadas con elevados niveles de colesterol en suero. Por ejemplo, la ateroesclerosis es una enfermedad de progresión lenta caracterizada por la acumulación de colesterol en el interior de la pared arterial. Evidencias convincentes apoyan la teoría de que los lípidos depositados en las lesiones ateroescleróticas se derivan principalmente de las LDL plasmáticas; de esta manera, las LDL se han conocido popularmente como el colesterol "malo". En contraste, los niveles de HDL en suero están correlacionados inversamente con las cardiopatías. A su vez, altos niveles de HDL séricos se consideran como un factor de riesgo negativo. Se ha teorizado que altos niveles de HDL en plasma no son solo protectores frente a la enfermedad de las arterias coronarias, sino que realmente inducen la regresión de la placa ateroesclerótica (véase, por ejemplo, Badimon y col., 1992, Circulation 86 (Suppl. III) : 86 - 94; Dansky y Fisher, 1999, Circulation 100: 1762 - 63; Tangirala y col., 1999, Circulation 100 (17) : 1816 - 22; Fan y col., 1999, Atherosclerosis 147 (1) : 139 - 45; Deckert y col., 1999, Circulation 100 (11) : 1230 - 35; Boisvert y col., 1999, Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 19 (3) : 525 - 30; Benoit y col., 1999, Circulation 99 (1) : 105 - 10; Holvoet y col., 1998, J. Clin. Invest. 102 (2) : 379 - 85; Duverger y col., 1996, Circulation 94 (4) : 713 - 17; Miyazaki y col., 1995, Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 15 (11) : 1882 - 88; Mezdour y col., 1995, Atherosclerosis 113 (2) : 237 - 46; Liu y col., 1994, J. Lipid Res. 35 (12) : 2263 - 67; Plump y col., 1994, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 91 (20) : 9607 - 11; Paszty y col., 1994, J. Clin. Invest. 94 (2) : 899 - 903; She y col., 1992, Chin. Med. J. (Engl) . 105 (5) : 369 - 73; Rubin y col., 1991, Nature 353 (6341) : 265 - 67; She y col., 1990, Ann. NY Acad. Sci. 598: 339 - 51; Ran, 1989, Chung Hua Ping Li Hsueh Tsa Chih (traducido también como: Zhonghua Bing Li Xue Za Zhi) 18 (4) : 257 - 61; Quezado y col., 1995, J. Pharmacol. Exp. Ther. 272 (2) : 604 - 11; Duverger y col., 1996, Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 16 (12) : 1424 - 29; Kopfler y col., 1994, Circulation; 90 (3) : 1319 - 27; Miller y col., 1985, Nature 314 (6006) : 109 - 11; Ha y col., 1992, Biochim. Biophys. Acta 1125 (2) : 223 - 29; Beitz y col., 1992, Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids 47 (2) : 149 - 52) . Como consecuencia, los HDL se han conocido popularmente como el colesterol "bueno", (véase, por ejemplo, Zhang, y col., 2003 Circulation 108: 661 - 663) .

El papel protector de HDL se ha confirmado en numerosos estudios (por ejemplo, Miller et al., 1977, Lancet 1 (8019) : 965 - 68; Whayne y col., 1981, Atherosclerosis 39: 411 - 19) . En estos estudios, niveles elevados de LDL parecen estar asociados con un riesgo cardiovascular creciente, mientras que niveles altos de HDL parecen conferir protección cardiovascular. Los estudios in vivo han demostrado además el papel protector de HDL mostrando que infusiones de HDL en conejos pueden impedir el desarrollo de lesiones arteriales inducidas por el colesterol (Badimon y col., 1989, Lab. Invest. 60: 455 - 61) y/o inducen su regresión (Badimon et al., 1990, J. Clin.

Invest. 85: 1234 - 41) .

3.1 Transporte inverso de Colesterol, HDL y Apolipoproteína A-I

La ruta del transporte inverso del colesterol (TIC) actúa para eliminar el colesterol de los tejidos más extrahepáticos y es crucial para mantener la estructura y la función de la mayoría de las células en el cuerpo. La TIC consiste principalmente en tres etapas: (a) la salida de colesterol, es decir, la eliminación inicial de colesterol procedente de diversos grupos de células periféricas; (b) la esterificación del colesterol por la acción de la lecitina: colesterol aciltransferasa (LCAT) , evitando una reentrada en las células del colesterol que ha salido previamente; y (c) captación del colesterol HDL y de los ésteres de colesterilo en los hepatocitos para la hidrólisis, a continuación la recirculación, el almacenamiento, la excreción en la bilis o el catabolismo en los ácidos biliares.

LCAT, la enzima clave en el TIC, se produce en el hígado y circula en el plasma asociada a la fracción de HDL. LCAT convierte el colesterol procedente de las células en ésteres de colesterilo, que están secuestrados en HDL destinados a la eliminación (véase Jonas 2000, Biochim. Biophys. Acta 1529 (1-3) : 245 - 56) . La proteína de transferencia de ésteres de colesterilo (CETP) y la proteína de transferencia de fosfolípidos (PLTP) contribuyen a remodelar adicionalmente la población de HDL circulante. CETP mueve los ésteres de colesterilo fabricados por LCAT a otras lipoproteínas, particularmente a las lipoproteínas que comprenden ApoB, tales como VLDL y LDL. PLTP suministra lecitina a HDL. Los triglicéridos HDL están catabolizados por la triglicérido lipasa hepática extracelular, y el colesterol de la lipoproteína se elimina por diversos mecanismos vía hígado.

Las características funcionales de las partículas de HDL vienen determinadas principalmente por sus componentes principales de apolipoproteínas tales como ApoA-I y ApoA-II. Se han observado también cantidades menores de ApoC-I, ApoC-II, ApoC-III, ApoD, ApoA-IV, ApoE, ApoJ asociadas con HDL. HDL existe en una amplia variedad de tamaños diferentes y mezclas diferentes de los constituyentes anteriormente mencionados, dependiendo del estado de remodelación durante la cascada o ruta metabólica del TIC.

Cada partícula de HDL comprende normalmente al menos 1 molécula, y usualmente de dos a 4 moléculas, de ApoA-I. Las partículas de HDL pueden comprender también solo ApoE (partículas gamma-LpE) , que se sabe que son también responsables de la salida del colesterol, tal como describe el Prof. Gerd Assmann (véase, por ejemplo, von Eckardstein y col., 1994, Curr Opin Lipidol. 5 (6) : 404 - 16) . ApoA-I se sintetiza por el hígado y el intestino delgado como preapolipoproteína A-I, que se segrega como preapolipoproteína A-I (proApoA-I) y se escinde rápidamente para generar la forma plasmática de ApoA-I, una única cadena polipeptídica de 243 aminoácidos (Brewer y col., 1978, Biochem.... [Seguir leyendo]

1. Un complejo de lipoproteína que comprende una fracción de la apolipoproteína ApoA-1 y una fracción lipídica, en el que dicha fracción lipídica consiste esencialmente en esfingomielina y aproximadamente 3 % en peso de un fosfolípido cargado negativamente, y la relación molar de la fracción lipídica respecto de la fracción de la apolipoproteína ApoA-1 está en el intervalo de aproximadamente 200: 1 a 2: 1.

2. El complejo de lipoproteína de la reivindicación 1 en el que el fosfolípido cargado negativamente se selecciona entre un fosfatidilinositol, una fosfatidilserina, un fosfatidilglicerol, un ácido fosfatídico y sus mezclas.

3. El complejo de lipoproteína de la reivindicación 1 en el que el fosfolípido cargado negativamente es fosfatidilglicerol.

4. El complejo de lipoproteína de la reivindicación 1 en el que la esfingomielina comprende D-eritro-N-16: 0-esfingomielina y/o D-eritro-N-16: 0-dihidroesfingomielina.

5. El complejo de lipoproteína de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en el que las cadenas de acilo de la esfingomielina y/o el fosfolípido cargado negativamente, se seleccionan cada uno, independientemente entre sí, de entre un hidrocarburo saturado, uno monoinsaturado y uno poliinsaturado que contiene de 6 a 24 átomos de carbono.

6. El complejo de lipoproteína de la reivindicación 5 en el que cada cadena de acilo de la esfingomielina y o del fosfolípido cargado negativamente es igual a la otra.

7. El complejo de lipoproteína de la reivindicación 5 en el que las cadenas de acilo de la esfingomielina y el fosfolípido cargado negativamente contienen igual número de átomos de carbono.

8. El complejo de lipoproteína de la reivindicación 5 en el que las cadenas de acilo de la esfingomielina y el fosfolípido cargado negativamente tienen diferentes grados de saturación.

9. El complejo de lipoproteína de la reivindicación 1 en el que la apolipoproteína ApoA-1 se selecciona entre ApoA-I humano maduro, ApoA-IMilano maduro, ApoA-IParis maduro y sus mezclas.

10. El complejo de lipoproteína de la reivindicación 1 o 9 en el que la apolipoproteína ApoA-1 está en forma de un monómero.

11. El complejo de lipoproteína de la reivindicación 1 en el que la apolipoproteína ApoA-1 es una apolipoproteína Apo-1 humana madura y el fosfolípido cargado negativamente es fosfatidilglicerol.

12. El complejo de lipoproteína de la reivindicación 1 en el que la relación molar de la fracción lipídica a la fracción de la apolipoproteína ApoA-I está en el intervalo de aproximadamente 200: 1 a 100: 1.

13. El complejo de lipoproteína de la reivindicación 1 en el que la relación molar de la fracción lipídica a la fracción de la apolipoproteína ApoA-1 está en el intervalo de aproximadamente 100: 1 a 30: 1.

14. El complejo de lipoproteína de la reivindicación en el que la apolipoproteína ApoA-I es una apolipoproteína ApoA-I, la esfingomielina es esfingomielina de huevo, el fosfolípido cargado negativamente es fosfatidilglicerol, y la relación molar de la fracción lipídica a la fracción de la apolipoproteína ApoA-I está en el intervalo de aproximadamente 200.1 a 100: 1.

15. El complejo de lipoproteína de la reivindicación 1 en el que la apolipoproteína ApoA-1 es una apolipoproteína ApoA-1 humana madura, la esfingomielina es esfingomielina de huevo, el fosfolípido cargado negativamente es fosfatidilglicerol, y la relación molar de la fracción lipídica a la fracción de la apolipoproteína ApoA-I está en el intervalo de aproximadamente 100: 1 a 30: 1.

16. Una composición farmacéutica que comprende un complejo de lipoproteína de acuerdo a una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 y un vehículo, diluyente y/o excipiente farmacéuticamente aceptable.

17. Un complejo de lipoproteína de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 para uso en un procedimiento de tratamiento de un sujeto con dislipidemia, comprendiendo el procedimiento administrar al sujeto una cantidad eficaz de dicho complejo de lipoproteína.

18. El complejo de lipoproteína para uso de acuerdo con la reivindicación 17 en el que la cantidad de complejo de lipoproteína administrado es eficaz para aumentar el nivel en suero del sujeto de apolipoproteína ApoA

1 complejada en aproximadamente 10-300 mg/dl en comparación con un nivel de criterio inicial.

19. El complejo de lipoproteína para uso de acuerdo con la reivindicación 17 o 18 en el que la cantidad de complejo de lipoproteína administrado es suficiente para liberar aproximadamente 1 a 100 mg/kg de apolipoproteína ApoA-I.

20. El complejo de lipoproteína para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 19 en el que el complejo de lipoproteína se administra por vía intravenosa.

21. El complejo de lipoproteína para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 20 en el que el complejo de lipoproteína se administra conjuntamente con una resina de ácidos biliares, niacina, una estatina, un fibrato y/o un inhibidor de la absorción del colesterol,

22. El complejo de lipoproteína para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 21 en el que el complejo de lipoproteína se administra en forma de una composición farmacéutica que comprende el complejo y un vehículo, diluyente y/o excipiente farmacéuticamente aceptable.

23. El complejo de lipoproteína para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 22, en el que el sujeto tiene una o más dolencias asociadas a dislipidemia seleccionadas entre inflamación, enfermedad de Alzheimer, ictus, ictus isquémico, ataque isquémico transitorio, infarto de miocardio, angina de pecho, hipertensión renovascular, insuficiencia renovascular, cojera intermitente, isquemia crítica de extremidades, dolor en reposo, gangrena, cardiopatía coronaria, enfermedad de la arteria coronaria, síndrome coronario agudo, enfermedad cardiovascular, hipertensión, restenosis, enfermedad vascular, enfermedad perivascular, dislipoproteinemia, elevados niveles de colesterol de lipoproteína de baja densidad, elevados niveles de colesterol de lipoproteína de muy baja densidad, bajos niveles de lipoproteínas de alta densidad, elevados niveles de colesterol Lp (a) de lipoproteína, elevados niveles de apolipoproteína B, ateroesclerosis, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, hipercolesterolemia familiar, hiperlipidemia familiar combinada, y deficiencia de lipoproteína lipasa.

24. El complejo de lipoproteína para uso de acuerdo con la reivindicación 23, en el que la deficiencia de lipoproteína lipasa es hipertrigliceridemia, hipoalfalipoproteinemia, o lipoproteína hipercolesterolémica.

25. El complejo de lipoproteína para uso de acuerdo con la reivindicación 23, en el que la dolencia asociada con dislipidemia es ateroesclerosis, síndrome coronario agudo, infarto de miocardio, angina, o ictus.

26. Uso de un complejo de lipoproteína de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un sujeto con dislipidemia.

27. El uso de la reivindicación 26 en el que la cantidad de complejo de lipoproteína para la administración es eficaz para aumentar el nivel en suero del sujeto de la apolipoproteína ApoA-1 libre o complejada en aproximadamente 10-300 mg/dl en comparación con el nivel criterio inicial.

28. El uso de la reivindicación 26 o la reivindicación 27 en el que la cantidad del complejo de lipoproteína para la administración es suficiente para liberar aproximadamente 1 a 100 mg/kg de apolipoproteína ApoA-I.

29. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 28 en el que el complejo de lipoproteína es para la administración intravenosa.

30. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 29 en el que el complejo de lipoproteína es para la administración complementaria con una resina de ácidos biliares, niacina, una estatina, un fibrato y/o un inhibidor de la absorción del colesterol.

31. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 30 en el que el complejo de lipoproteína es para la administración en la forma de una composición farmacéutica que comprende el complejo y un vehículo, diluyente y/o excipiente farmacéuticamente aceptable

32. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 31 en el que el sujeto tiene una o más dolencias asociadas a dislipidemia seleccionadas entre inflamación, enfermedad de Alzheimer, ictus, ictus isquémico, ataque isquémico transitorio, infarto de miocardio, angina de pecho, hipertensión renovascular, insuficiencia renovascular, cojera intermitente, isquemia crítica de extremidades, dolor en reposo, gangrena, cardiopatía coronaria, enfermedad de la arteria coronaria, síndrome coronario agudo, enfermedad cardiovascular, hipertensión, restenosis, enfermedad vascular, enfermedad perivascular, dislipoproteinemia, elevados niveles de colesterol de lipoproteína de baja densidad, elevados niveles de colesterol de lipoproteína de muy baja densidad, bajos niveles de lipoproteínas de alta densidad, elevados niveles de colesterol Lp (a) de lipoproteína, elevados niveles de apolipoproteína B, ateroesclerosis, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, hipercolesterolemia familiar, hiperlipidemia familiar combinada, y

deficiencia de lipoproteína lipasa.

33. El uso de la reivindicación 32 en el que la deficiencia de la lipoproteína lipasa es hipertrigliceridemia, hipoalfalipoproteinemia, o lipoproteína colesterolémica.

34. El uso de la reivindicación 32, en el que la dolencia asociada a dislipidemia es ateroesclerosis, síndrome coronario agudo, infarto d miocardio, angina, o ictus.