Anticuerpos humanos con alta afinidad para el receptor IL-4 humano.

Un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo, que se une específicamente al hIL-4R (SEC ID Nº 1) con una KD de aproximadamente 200 pM o menos,

cuando se mide por resonancia de plasmones superficiales, que comprende las CDR de unas secuencias HCVR y LCVR, en donde las secuencias HCVR/LCVR se seleccionan de las secuencias SEC ID Nos 579/59 y 581/59.

Anticuerpos humanos con alta afinidad para el receptor IL-4 humano

Antecedente La interleucina (IL-4, también conocida como factor estimulante de células B o BSF-1) se caracterizó originalmente por su capacidad para estimular la proliferación de células B en respuesta a bajas concentraciones de anticuerpos inmunoglobulina dirigidos a la superficie celular. Se ha demostrado que la IL-4 posee un amplio espectro de actividades biológicas, incluyendo la estimulación del crecimiento de células T, mastocitos, granulocitos, megacariocitos y eritrocitos. La IL-4 induce la expresión de moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad clase II en células B en reposo, y potencia la secreción de isotipos IgE e IgG1por células B estimuladas.

Las actividades biológicas del IL-4 están mediadas por receptores de superficie específicos para la IL-4. El receptor

alfa de la IL-4 humana (hIL-4R) (SEC ID Nº 1) se describe, por ejemplo, en las Patentes de EE. UU Nos 5.599.905, 5.767.065, y 5.840.869. Se han descrito anticuerpos para el hIL-4R en la Patente de EE. UU Nº 5.717.072.

Las actividades biológicas de la IL-4 están mediadas por receptores de superficie específicos para la IL-4. El receptor alfa de la IL-4 humana (hIL-4R) (SEC ID Nº 1) se describe, por ejemplo, en la Patente de EE. UU Nos 5.599.905, 5.767.065, y 5.840.869. Se han descrito anticuerpos para el hIL-4R en la Patente de EE. UU Nos

5.717.072 y 7.186.809.

Los métodos para producir anticuerpos útiles como agentes terapéuticos para el ser humano incluyen la generación de anticuerpos quiméricos y anticuerpos humanizados (véase, por ejemplo el documento US 6.949.245) . Véase por

ejemplo, el documento WO 94/02602 (Abgenix) y US 6.596.541 (Regeneron Pharmaceuticals) que describen métodos para generar ratones transgénicos no humanos capaces de producir anticuerpos humanos.

Los métodos para utilizar anticuerpos contra el hIL-4R se describen en las Patentes de EE. UU Nos 5.714.146; 5.985.280; y 6.716.587.

Breve sumario de la invención La invención proporciona:

! Un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo, que se une específicamente al hIL-4R (SEC ID Nº 1) con una KD de aproximadamente 200 pM o menos, medida por resonancia de plasmones superficiales, que comprende las CDR de una secuencia HCVR y una LCVR, en donde las secuencias HCVR/LCVR se seleccionan de entre las SEC ID Nos 579/59 y 581/59. ! Una molécula de ácido nucleico aislada que codifica un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno de la invención. ! Un vector que comprende tal secuencia de ácido nucleico. ! Un sistema huésped -vector para la producción de un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno de un anticuerpo que se une específicamente al receptor de la IL-4, que comprende tal vector, en una célula huésped adecuada.

! Un método de producción de un anticuerpo anti IL-4R o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende el cultivo de células de un sistema huésped -vector de la invención bajo condiciones que permitan la producción del anticuerpo o fragmento del mismo y la recuperación del anticuerpo o el fragmento que se expresa de esta manera. ! El uso de un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno de un anticuerpo de la invención en la fabricación de un medicamento para utilizarlo para atenuar o inhibir una enfermedad o un trastorno mediados por la IL-4 en un ser humano. ! Un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno de la invención para su uso en un método de tratamiento de una enfermedad o trastorno en un ser humano, en donde la enfermedad o el trastorno se mejora, tiene una mejoría o se inhibe por eliminación, inhibición o reducción de la actividad de la interleucina-4 humana (hIL-4) .

Se desvelan en el presente documento anticuerpos humanos, preferentemente anticuerpos recombinantes humanos, que se unen específicamente al receptor humano de la interleucina -4 (hIL-4R) . Los anticuerpos humanos se caracterizan por la unión al hIL-4R con alta afinidad y por la capacidad de neutralizar la actividad del hIL-4R. En casos específicos, los anticuerpos humanos son capaces de bloquear la unión del complejo hIL-13/ hIL-13R1 al hIL4R, y así inhibe la señal de la hIL-13. Los anticuerpos pueden tener una longitud completa (por ejemplo un anticuerpo IgG1 o IgG4) o pueden comprender solo una parte de unión al antígeno (por ejemplo un fragmento Fab, F (ab’) 2 o scFv) , y se pueden modificar para ejercer una funcionalidad, por ejemplo, para eliminar funciones de efector residuales (Reddy y col. (2000) J. Immunol. 164:1925-1933) .

También se desvela en el presente documento un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que se une específicamente al hIL-4R (SEC ID Nº 1) con una KD de aproximadamente 200 pM o menos, medida por resonancia de plasmones superficiales. En una realización más específica, el anticuerpo o la parte de unión al antígeno del mismo presenta una KD de menos de aproximadamente 150 pM, o menos de aproximadamente 50 pM,

o menos de aproximadamente 20 pM. En varias realizaciones, el anticuerpo o el fragmento de unión al antígeno bloquea la actividad de hIL-4R con una CI50 de aproximadamente 200 pM o menos, medida por el bioensayo STAT6 luciferasa. En realizaciones más específicas, el anticuerpo o el fragmento de unión al antígeno presenta una CI50 de aproximadamente 150 pM o menos, o aproximadamente 100 pM o menos, o incluso aproximadamente 50 pM o menos al medirse por el bioensayo de luciferasa. En varias realizaciones, el anticuerpo o el fragmento de unión al antígeno bloquea la actividad de la hIL-13 con una CI50 de aproximadamente 100 pM o menos, como se mide por el bioensayo de STAT6 luciferasa. En realizaciones más específicas el anticuerpo o el fragmento de unión al antígeno presenta una CI50 de aproximadamente 75 pM o menos, o aproximadamente 50 pM o menos, o incluso de aproximadamente 20 pM o menos.

En un segundo aspecto, el anticuerpo de la invención comprende una región variable de cadena pesada (HCVR) que se selecciona de entre el grupo que consiste en las SEC ID Nº 579 y 581, o una secuencia sustancialmente similar a las mismas.

En un tercer aspecto, el anticuerpo de la invención comprende una región variable de cadena ligera (LCVR) con la SEC ID Nº 59 o una secuencia sustancialmente similar a la misma.

En una realización, el anticuerpo o el fragmento de anticuerpo de la invención comprende una HCVR y una LCVR (HCVR/LCVR) seleccionadas de entre el grupo que consiste en la SEC ID Nº 579/59 y 581/59.

También se hace referencia a una molécula de ácido nucleico que codifica una HCVR, en donde la molécula de ácido nucleico es una secuencia de nucleótidos seleccionada de entre el grupo que consiste en las SEC ID Nº 578 y 580, o una secuencia sustancialmente idéntica que tenga al menos un 95% de homología con las mismas.

También se hace referencia a una molécula de ácido nucleico que codifica una LCVR, donde la molécula de ácido nucleico tiene la SEC ID Nº 58, o una secuencia sustancialmente idéntica que tenga al menos un 95% de homología con la misma.

En una realización, el anticuerpo de la invención comprende una HCVR y una LCVR codificadas por pares de secuencias de nucleótidos seleccionados de entre el grupo que consiste en las SEC ID Nº 578/58 y 580/58.

El anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende una CDR1 de cadena ligera con la SEC ID Nº 61, un dominio CDR2 de cadena ligera con la SEC ID Nº 63; y un dominio CDR3 de cadena ligera con la SEC ID Nº 65.

En una realización más, la invención caracteriza un anticuerpo humano o un fragmento de anticuerpo que comprende un dominio CDR1 de cadena ligera codificado por una secuencia de nucleótidos seleccionada de entre el grupo que consiste en la SEC ID Nº 60; un dominio CDR2 de cadena ligera codificada por una secuencia de nucleótidos SEC ID Nº 62; y un dominio CDR3 de cadena ligera codificada por una secuencia de nucleótidos seleccionada SEC ID Nº 64.

La invención engloba anticuerpos anti-hIL-4R que tienen un patrón de glucosilación modificado. En algunas aplicaciones, puede ser útil la modificación para eliminar sitios de glucosilación no deseables, o un anticuerpo que carece de un resto fucosa presente en la cadena de oligosacáridos, por ejemplo, para aumentar la función de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo (ADCC) (véase Shield y col. (2002) JBC 277: 26733) . En otras aplicaciones, se puede hacer una modificación de la galactosilación con el fin de modificar la citotoxicidad dependiente de complemento (CDC) .

Adicionalmente se describen en el presente documento los vectores de expresión recombinante que... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo, que se une específicamente al hIL-4R (SEC ID Nº 1) con una KD de aproximadamente 200 pM o menos, cuando se mide por resonancia de plasmones superficiales, que comprende las CDR de unas secuencias HCVR y LCVR, en donde las secuencias HCVR/LCVR se seleccionan de las secuencias SEC ID Nos 579/59 y 581/59.

2. Un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno de la reivindicación 1, que muestra una KD para hIL-4R (SEC ID Nº 1) de menos de 150 pM.

3. Un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno de la reivindicación 1, que muestra una KD para hIL-4R (SEC ID Nº 1) de menos de 50 pM.

4. Una molécula de ácido nucleico aislada que codifica un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes.

5. Un vector que comprende la secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 4.

6. Un sistema vector-huésped para la producción de un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno de un anticuerpo que se une específicamente al receptor IL-4, que comprende un vector de acuerdo con la reivindicación 5, en una célula huésped adecuada.

7. Un sistema huésped -vector de acuerdo con la reivindicación 6, en donde la célula huésped es una célula procariota o eucariota seleccionada entre una de E. coli o una célula CHO.

8. Un método de producción de un anticuerpo anti-hIL-4R o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende el cultivo de células de un sistema huésped -vector de acuerdo con la reivindicación 6 o 7 bajo condiciones que permitan la producción del anticuerpo o el fragmento del mismo y la recuperación del anticuerpo o fragmento así expresado.

9. El uso de un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en la fabricación de un medicamento para su uso para atenuar o inhibir una enfermedad o trastorno mediado por la IL-4 en un ser humano.

10. Un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para su uso en un método de tratamiento de una enfermedad o trastorno en un ser humano, en donde la enfermedad o el trastorno se mejora, tiene una mejoría o se inhibe por eliminación, inhibición o reducción de la actividad de la interleucina-4 humana (hIL-4) .

11. El uso de acuerdo con la reivindicación 9, en donde la enfermedad o trastorno se selecciona de entre artritis, herpetiformis, urticaria idiopática crónica, escleroderma, cicatrización hipertrófica, Enfermedad de Whipple, hiperplasia prostática benigna, trastornos pulmonares, trastornos inflamatorios, reacciones alérgicas, enfermedad de Kawasaki, enfermedad de células falciformes, síndrome de Churg-Strauss, enfermedad de Grave, pre-eclampsia, síndrome de Sjogren, síndrome linfoproliferativo autoinmune, anemia hemolítica autoinmune, esófago de Barrett, uveítis autoinmune, tuberculosis, dermatitis atópica, colitis ulcerativa, fibrosis y nefrosis.

12. El uso de acuerdo con la reivindicación 11, en donde dicho trastorno pulmonar es el asma, dicho trastorno inflamatorio es la enfermedad inflamatoria del intestino grueso, o dicha artritis es la artritis séptica.

13. Un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno de acuerdo con la reivindicación 10 para su uso de acuerdo con la reivindicación 10, en donde la enfermedad o trastorno se selecciona de entre artritis, herpetiformis, urticaria idiopática crónica, escleroderma, cicatrización hipertrófica, Enfermedad de Whipple, hiperplasia prostática benigna, trastornos pulmonares, trastornos inflamatorios, reacciones alérgicas, enfermedad de Kawasaki, enfermedad de células falciformes, síndrome de Churg-Strauss, enfermedad de Grave, pre-eclampsia, síndrome de Sjogren, síndrome linfoproliferativo autoinmune, anemia hemolítica autoinmune, esófago de Barrett, uveítis autoinmune, tuberculosis, dermatitis atópica, colitis ulcerativa, fibrosis y nefrosis.

14. Un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno de acuerdo con la reivindicación 13 para su uso de acuerdo con la reivindicación 13, en donde dicho trastorno pulmonar es el asma, dicho trastorno inflamatorio es la enfermedad inflamatoria de intestino grueso, o dicha artritis es la artritis séptica.

15. Una composición que comprende un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y un vehículo aceptable.