Anticuerpo humanizado anti-integrina-alfa9 humana mejorado.
Un anticuerpo humanizado anti-integrina α9 humana, que comprende una región variable de la cadena pesada y una región variable de la cadena ligera seleccionadas de lo siguiente:
(a) una región variable de la cadena pesada que consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID Nº:11 y una región variable de la cadena ligera que consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID Nº:17
(b) una región variable de la cadena pesada que consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID Nº:13 y una región variable de la cadena ligera que consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID Nº:17, y
(c) una región variable de la cadena pesada que consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID Nº:15 y una región variable de la cadena ligera que consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID Nº:9.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/JP2009/050187.
Solicitante: ASTELLAS PHARMA INC..
Nacionalidad solicitante: Japón.
Dirección: 5-1, Nihonbashi-honcho 2-chome, Chuo-ku Tokyo 103-8411 JAPON.
Inventor/es: HIGUCHI, HIROFUMI, YAMAMOTO,Nobuchika, SAKAI,Fumihiko, NAKASHIMA,Toshihiro, UEHARA,KENJI, ISHIKAWA,DAISUKE, FUJITA,HIROTADA.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- A61K39/395 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario.
- A61P29/00 A61 […] › A61P ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS O DE PREPARACIONES MEDICINALES. › Agentes analgésicos, antipiréticos o antiinflamatorios que no actúan sobre el sistema nervioso central, p. ej. agentes antirreumáticos; Antiinflamatorios no esteroideos (AINEs).
- C07K16/28 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra receptores, antígenos celulares de superficie o determinantes celulares de superficie.
- C07K16/46 C07K 16/00 […] › Inmoglobulinas híbridas (híbridos de una inmunoglobulina con un péptido distinto de una inmunoglobulina C07K 19/00).
- C12N1/15 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 1/00 Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que los contienen (preparaciones de uso médico que contienen material de protozoos, bacterias o virus A61K 35/66, de algas A61K 36/02, de hongos A61K 36/06; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos bacterianos, p. ej. vacunas bacterianas, A61K 39/00 ); Procesos de cultivo o conservación de microorganismos, o de composiciones que los contienen; Procesos de preparación o aislamiento de una composición que contiene un microorganismo; Sus medios de cultivo. › modificados por la introducción de material genético extraño.
- C12N1/19 C12N 1/00 […] › modificados por la introducción de material genético extraño.
- C12N1/21 C12N 1/00 […] › modificados por la introducción de material genético extraño.
- C12N15/00 C12N […] › Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K).
- C12N15/09 C12N […] › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Tecnología del ADN recombinante.
- C12N5/10 C12N […] › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células modificadas por introducción de material genético extraño, p. ej. células transformadas por virus.
- C12P21/08 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA. › C12P 21/00 Preparación de péptidos o de proteínas (proteína monocelular C12N 1/00). › Anticuerpos monoclonales.
PDF original: ES-2519047_T3.pdf
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Fragmento de la descripción:
Anticuerpo humanizado anti-integrina-α9 humana mejorado La presente invención se refiere a un anticuerpo humanizado anti-integrina α9 humana mejorado como se define mediante las reivindicaciones adjuntas. Más en particular, se refiere a un anticuerpo Y9A2 humanizado mejorado que tiene actividad de unión a una proteína integrina α9 humana para inhibir la adhesión celular dependiente de integrina α9, y actividad y/o propiedades mejoradas en comparación con el anticuerpo Y9A2 anti-integrina α9 humana de ratón. Se espera que el anticuerpo humanizado sea un fármaco para el diagnóstico, la prevención o el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias tales como artritis reumatoide, enfermedades inmunitarias tales como alergias y rechazos de injertos, y otras enfermedades diversas implicadas con la integrina α9 en sus patogénesis.
Técnica antecedente La integrina, una glicoproteína de la superficie celular, es una molécula de adhesión que funciona principalmente como receptor para la adhesión celular a las matrices extracelulares (colágeno, laminina y similares) y miembros de la familia de inmunoglobulinas (ICAM-1, VCAM-1 y similares) , y actúa como mediador en la transducción de señales desde las matrices extracelulares. De ese modo, las células reciben señales desde las matrices extracelulares, y se induce la diferenciación, proliferación, muerte celular, y similares. La integrina es un heterodímero que consiste en dos subunidades, la cadena α y la cadena β; existen diferentes cadenas α y cadenas β que se dan en una gran diversidad de combinaciones, y existen 24 miembros de la superfamilia de integrinas. Los ratones con inactivación génica de las integrinas son inviables o enfermos independientemente de qué subunidad falte, lo que sugiere que las integrinas individuales son necesarias para el mantenimiento de la vida. Por lo tanto, se cree que la integrina, que transmite información en condiciones ambientales a las células para estimular sus respuestas, funciona en todas las situaciones de los fenómenos biológicos, y actúan como mediadores en una gran variedad de estados patológicos.
Como tal, la integrina es indispensable para la supervivencia de los organismos, y se cree que desempeña un papel incluso en estados patológicos; se ha informado de ciertos casos en los que su inhibición ayuda a mejorar estados patológicos. Por ejemplo, se ha aprobado un inhibidor de la integrina αIIbβ3 específica de plaquetas como fármaco terapéutico para la reestenosis tras PCTA conocido como abciximab (nombre comercial: ReoPro; Eli Lilly) . Natalizumab (nombre comercial: Antegren; empresa ELAN) , un inhibidor de α4β1 (VLA4) , se ha aprobado como fármaco terapéutico para esclerosis múltiple. El inhibidor de αvβ3 Vitaxin (empresa MEDIMMUNE) está en desarrollo en estudios clínicos por su acción inhibitoria de la neovascularización, acción inhibitoria de la activación de osteoclastos, y similares.
La integrina α9β1 se expresa en macrófagos, células NKT, células dendríticas, y neutrófilos, y supuestamente desempeña papeles importantes en la infiltración y adhesión de estas células inflamatorias, la resorción ósea y similares. Recientemente se ha informado que la integrina α9β1 está implicada en la formación de osteoclastos, y se ha propuesto su implicación en la destrucción ósea (Documento no patente 1) . Los ligandos conocidos de la misma incluyen la osteopontina truncada (OPN N-terminal) , VCAM-1, Tenascina-C y similares. Clínicamente, se han observado niveles significativamente elevados de integrina α9β1 en los tejidos sinoviales de pacientes con artritis reumatoide (Documento no patente 2) .
Por lo tanto, si se desarrollase un anticuerpo monoclonal que se uniese de manera específica a la proteína integrina α9 para actuar inhibiendo la adhesión celular dependiente de integrina α9 sería útil en el diagnóstico, la prevención o el tratamiento de diversas enfermedades implicadas con la integrina α9 en sus patogénesis.
Los anticuerpos que se ha informado que exhiben una acción inhibitoria de la función en la integrina α9 humana son el anticuerpo monoclonal de ratón Y9A2 (Documento no patente 3) , y 1K11, 24I11, 21C5 y 25B6 (Documento de patente 1) y 28S1 (Documento de patente 2) . Los resultados experimentales in vitro han demostrado que estos anticuerpos son capaces de inhibir la adhesión celular dependiente de integrina α9 humana. Entre ellos, debido a que Y9A2 inhibe la adhesión celular a osteopontina y Tenascina-C, se considera muy prometedor como candidato a fármaco de anticuerpos contra la integrina α9.
Se debería indicar, sin embargo, que Y9A2 es un anticuerpo derivado de ratón preparado mediante la inmunización de un ratón con un antígeno, y, por lo tanto, la administración directa del mismo a un ser humano es prácticamente imposible desde el punto de vista de la seguridad (inducción de antigenicidad) y eficacia (semivida reducida) . Por lo tanto, es necesario llevar a cabo una modificación para convertir el anticuerpo en una molécula que tenga una secuencia de aminoácidos de un anticuerpo humano a la vez que se mantiene la actividad de Y9A2, es decir, una humanización.
En la actualidad, como método de producción de un anticuerpo humanizado, lo más general es un método basado en el método que incluye injertar aminoácidos de la región determinante de la complementariedad (a veces indicada más adelante en la presente memoria como CDR) como diseñó Winter et al. (documento no patente 4) . También es muy conocido que el injerto simultáneo de aminoácidos no solamente de CDR, sino también de aminoácidos de regiones distintas de CDR implicados en el mantenimiento estructural de CDR o de la unión a un antígeno, es decir, una región estructural (a veces indicada más adelante en la presente memoria como FR) , de un anticuerpo exógeno que es el donante de aminoácidos de la CDR a un anticuerpo humano que es el aceptor de la CDR, es importante 2 10
para la reproducción de la actividad inherente del anticuerpo donante (documentos no patentes 4 y 5) .
Sin embargo, la producción de un anticuerpo humanizado basada en el injerto de CDR incluye varios problemas. En primer lugar, el problema más general es que incluso una selección adecuada de los aminoácidos de FR necesarios para la reproducción de la actividad de un anticuerpo donante no puede eliminar la dificultad de obtener un anticuerpo humanizado que tenga una afinidad hacia un antígeno y una actividad biológica que supere la del anticuerpo donante.
En años recientes, se ha comercializado un gran número de anticuerpos quiméricos, anticuerpos humanizados y anticuerpos humanos como productos farmacéuticos monoclonales. La dosis eficaz de cualquiera de ellos es extremadamente elevada, y es de varios mg por kg de peso corporal. Por lo tanto, los anticuerpos farmacéuticos son inevitablemente caros, lo que a su vez incrementa la carga económica de los pacientes y los costes médicos. Los factores principales que definen la dosis eficaz de un fármaco de anticuerpo incluyen la afinidad del anticuerpo hacia un antígeno y la cantidad del antígeno presente en el organismo. A partir de tales aspectos, en particular, una mejora de la afinidad de un anticuerpo hacia un antígeno conduce a una reducción de la dosis, y es una mejora extremadamente útil que también da como resultado la reducción de la carga económica de los pacientes y los costes médicos.
Para llevar a cabo una afinidad mejorada de un anticuerpo hacia un antígeno, a menudo se adopta un método que incluye la introducción de la sustitución de aminoácidos en una región variable del anticuerpo. Sin embargo, cuando el anticuerpo y el antígeno son diferentes, también varía la secuencia y la estructura estérica de los aminoácidos de CDR, así como la posición de los aminoácidos implicados en las interacciones antígeno-anticuerpo. Por lo tanto, es prácticamente imposible definir que la posición de los aminoácidos de FR a injertar junto con la CDR sea aplicable a cualquier anticuerpo.
Otro problema es que, aunque los aminoácidos de una CDR completa de un anticuerpo de ratón donante se injerten en general en un anticuerpo humano molde en la preparación de un anticuerpo humanizado basado en el injerto de CDR, una secuencia de aminoácidos de CDR derivada de un anticuerpo de ratón, que es importante para la unión a un antígeno, a veces muestra antigenicidad contra el ser humano, lo que a menudo provoca la generación de un anticuerpo anti-idiotipo.
Es decir, para la producción de un anticuerpo humanizado, la selección de un anticuerpo aceptor... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Un anticuerpo humanizado anti-integrina α9 humana, que comprende una región variable de la cadena pesada y una región variable de la cadena ligera seleccionadas de lo siguiente:
(a) una región variable de la cadena pesada que consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID Nº :11 y una región variable de la cadena ligera que consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID Nº :17
(b) una región variable de la cadena pesada que consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID Nº :13 y una región variable de la cadena ligera que consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID Nº :17, y
(c) una región variable de la cadena pesada que consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID Nº :15 y una región variable de la cadena ligera que consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID Nº :9.
2. El anticuerpo humanizado anti-integrina α9 humana según la reivindicación 1, en el que la región constante de la cadena pesada del anticuerpo es Igγ1 humano.
3. El anticuerpo humanizado anti-integrina α9 humana según la reivindicación 1, en el que la región constante de la cadena ligera del anticuerpo es Igκ humano.
4. El anticuerpo humanizado anti-integrina α9 humana según la reivindicación 1, en el que la región constante de la cadena pesada del anticuerpo es Igγ1 humano y la región constante de la cadena ligera del anticuerpo es Igκ humano.
5. El anticuerpo humanizado anti-integrina α9 humana según la reivindicación 1, en el que la cadena pesada consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID Nº :19 y la cadena ligera consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID Nº :25.
6. El anticuerpo humanizado anti-integrina α9 humana según la reivindicación 1, en el que la cadena pesada consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID Nº :21 y la cadena ligera consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID Nº :25.
7. El anticuerpo humanizado anti-integrina α9 humana según la reivindicación 1, en el que la cadena pesada consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID Nº :23 y la cadena ligera consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID Nº :27.
8. Un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica la región variable de la cadena pesada del anticuerpo humanizado anti-integrina α9 humana según la reivindicación 1 y una secuencia que codifica la región variable de la cadena ligera del anticuerpo humanizado anti-integrina α9 humana según la reivindicación 1.
9. Un vector de expresión que comprende un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica la región variable de la cadena pesada del anticuerpo humanizado anti-integrina α9 humana según la reivindicación 1 y un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica la región variable de la cadena ligera del anticuerpo humanizado anti-integrina α9 humana según la reivindicación 1.
10. Una célula hospedadora que se selecciona del grupo que consiste en los siguientes (a) y (b) ,
(a) una célula hospedadora transformada con un vector de expresión que comprende un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica la región variable de la cadena pesada del anticuerpo humanizado antiintegrina α9 humana según la reivindicación 1 y un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica la región variable de la cadena ligera del anticuerpo humanizado anti-integrina α9 humana según la reivindicación 1; y
(b) una célula hospedadora transformada con un vector de expresión que comprende un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica la región variable de la cadena pesada del anticuerpo humanizado antiintegrina α9 humana según la reivindicación 1 y con un vector de expresión que comprende un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica la región variable de la cadena ligera del anticuerpo humanizado antiintegrina α9 humana según la reivindicación 1.
11. Un método para producir un anticuerpo humanizado anti-integrina α9 humana, que comprende una etapa de cultivo de la célula hospedadora según la reivindicación 10 para permitir la expresión del anticuerpo humanizado anti-integrina α9 humana.
12. Un anticuerpo humanizado anti-integrina α9 humana producido mediante el método según la reivindicación 11.
13. Una preparación farmacéutica para la artritis reumatoide, que comprende el anticuerpo humanizado antiintegrina α9 humana según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y 12.
14. Un anticuerpo humanizado anti-integrina α9 humana según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y 12 para el uso como un medicamento.
15. El anticuerpo humanizado anti-integrina α9 humana según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y 12 para el uso en un método para prevenir o tratar la artritis reumatoide.
concentración de anticuerpo (ng/mL)
concentración de anticuerpo (ng/mL)
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