Anticuerpo anti-FGF23 y composición farmacéutica que comprende el mismo.

Anticuerpo frente a FGF23 humano o un fragmento funcional del mismo frente a FGF23 humano,

que comprende una secuencia de aminoácidos de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos desde Q en la posición 20 hasta S en la posición 136 de SEC ID Nº 12 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos desde A en la posición 23 hasta K en la posición 128 de SEC ID Nº 14.

Anticuerpo anti-FGF23 y composición farmacéutica que comprende el mismo Antecedentes de la invención Campo de la invención

La presente invención se refiere a un anticuerpo anti-FGF23 que se une específicamente a un antigeno FGF23. Además, la presente invención se refiere a una composición para la prevención o el tratamiento de trastornos metabólicos minerales debido a la producción excesiva de FGF23 u otras causas que comprende como ingrediente activo el anticuerpo anti-FGF23. En particular, la presente Invención se refiere a un agente para el tratamiento de raquitismo y osteomalacia hipofosfatémicos.

Antecedentes en la técnica

El factor de crecimiento de fibroblastos se purificó por primera vez a partir de glándula pituitaria bovina como una sustancia que estimulaba el crecimiento en la línea celular de fibroblastos NIH3T3. Desde entonces, se han identificado proteínas similares en diversos tejidos, y un grupo de las sustancias componen una familia de polipéptidos (familia FGF). Hasta la fecha, se han identificado en vertebrados 22 proteínas que pertenecen a la familia FGF. Con respecto a la actividad biológica de estas proteínas, no solo poseen actividad de crecimiento de fibroblastos, sino que estas proteínas también se conocen por poseer acciones divergentes tales como crecimiento del mesoblasto y el neuroectodermo, y acción de angiogénesis, y formación de la excrecencia celómica en el estadio de desarrollo. FGF también varía en el sitio de expresión génica y el momento de la expresión. A menudo se expresan solo en ciertos sitios únicamente en el estadio de desarrollo o en adultos. Se conocen al menos 4 genes que codifican el receptor de FGF, FGFR1, FGFR2, FGFR3, y FGFR4. Además, con respecto a FGFR1, FGFR2, y FGFR3, se conoce que hay proteínas receptoras para cada uno con dominios extracelulares diferentes debido a diferencias en el corte y empalme. Además, se conoce que la heparina y el proteglicano sulfato de heparán controlan la acción mediante interacción con el FGF y los receptores de FGF. Además, hay muchas que, debido a similitudes estructurales, pertenecen a la familia FGF, pero cuyas actividades biológicas y propiedades de unión a receptores y similares no se conocen. Las características de esta familia FGF se han resumido en una revisión (véase Ornltz, D. et al., Genome biology, 2: 35.1-35.12, 21).

FGF23 (en general, también se puede representar como FGF-23) se clonó ¡nlclalmente a partir de ratón mediante una búsqueda de base de datos usando homología con FGF15 y el método de PCR. Además, el FGF23 humano se clonó usando homología de secuencia con el FGF23 de ratón. El FGF23 humano es un polipéptido con 251 restos de aminoácido. Además, como secuencia de señal secretoria, se predice que se escinde una secuencia de aminoácidos de hasta 24 aminoácidos en el extremo amino terminal en el momento de la secreción (véase Yamashita, T. ef al., Biochem. Biophy. Res. Commun., 277; 494-498, 2). A continuación, en la investigación de osteomalacia/raquitismo hipofosfatémico dominante autosómico (denominado en lo sucesivo ADHR), se redujo la región génica mutada en pacientes con ADHR y con antelación en la identificación del gen responsable, se descubrió una mutación en sentido erróneo en el gen FGF23 de forma característica en pacientes con ADHR (véase, K.E. et al., Nature Gene!, 26: 345-348, 2). Con este descubrimiento, había una fuerte sugerencia de que el FGF23 era fisiológicamente importante en el cuerpo. Por otra parte, lo que determinó la actividad biológica del FGF23 fue la investigación en osteomalacia neoplásica, que es una de las enfermedades de raquitismo y osteomalacia hipofosfatémicos. En estas enfermedades, la neoplasia responsable de la enfermedad produce y segrega un factor de iniciación de enfermedad líquido, y se piensa que patologías tales como hipofosfatemia, osteomalacia y similares están causadas por el factor de iniciación de la enfermedad. El documento de Patente WO2/88358 se refiere a polipéptidos FGF23 y métodos para el uso de los polipéptidos, agonistas y antagonistas para el tratamiento de enfermedades.

En la investigación del factor de iniciación de enfermedad producido por esta neoplasia responsable, se clonó FGF23 como un gen que se sobreexpresa en el tumor. Además, por administración de este factor, se mostró que se reprodujeron la hipofosfatemia y la osteomalacia (véase Shimada, T. et al., Proc. Nati. Acad. Sci., 98: 65-655, 21 y el documento de Publicación Internacional Número W2/1454). Basándose en esta investigación, se ha descubierto que FGF23 está relacionado con el control metabólico relacionado con el fósforo y calcio en el cuerpo. Además, se sugirió que este actúa como factor sistémico que expresa su acción por circulación en el cuerpo. Además, las investigaciones posteriores también mostraron que la sangre de pacientes con osteomalacia neoplásica real tenía un mayor valor de concentración de FGF23 en comparación con los sujetos sanos (véase Yamazaki, Y. et al., J. Clin. Endocrinol. Metab., 87: 4957-496, 22 y Jonsson, K. B., etai, N. Engl. J. Med., 348: 1656-1663, 23).

Además, el raquitismo hipofosfatémico ligado al cromosoma X (denominado en lo sucesivo XLH) es una enfermedad que se conoce que tiene una presentación similar al ADHR y la osteomalacia neoplásica en términos de hallazgos clínicos. En esta enfermedad, también se mostró que la concentración de FGF23 en la sangre tenía un valor elevado (véase Yamazaki, Y. et al., J. Clin. Endocrinol. Metab., 87: 4957-496, 22 y Jonsson, K. B. et al., N. Engl. J. Med., 348; 1656-1663, 23).

En otras palabras, las causas del raquitismo y la osteomalacia resistentes a la vitamina D que se habían observado en osteomalacia neoplásica, XLH, y similares eran previamente desconocidas, pero se mostró que el factor causante de la enfermedad segregado era FGF23. Además, con respecto a otras enfermedades metabólicas minerales tales como displasia fibrosa, síndrome de McCune-Albright, raquitismo hipofosfatémico recesivo autosómico, y similares, se había informado que estaban asociadas altas concentraciones de FGF23 en la sangre con la hipofosfatemia y el raquitismo y la osteomalacia (véase Riminucci, M. et al., J. Clin. Invest., 112: 683-692, 23; Yamamoto, T. et al., J. Bone Miner. Metab., 23: 231-237; 25; Lorenz-Depiereux, E. et al., Nat. Genet, 38: 1248-125, 26). El documento de Patente W2/8271 se refiere a nuevos ácidos nucleicos y proteínas de FGF23, así como a métodos de diagnóstico y tratamiento de trastornos hipofosfatémicos e hiperfosfatémicos.

A partir del informe anterior, se ha mostrado que la afección de tener FGF23 excesivo en el cuerpo induce hipofosfatemia y el raquitismo y la osteomalacia acompañantes y similares. Además, para hiperfosfatemia con insuficiencia renal crónica, se han informado valores de FGF23 en suero anormalmente altos. Se ha sugerido que el FGF23 excesivo está posiblemente relacionado con una parte de las enfermedades metabólicas renales durante insuficiencia renal (véase Gupta, A. et al., J. Clin. Endocrinol. Metab., 89: 4489-4492, 24 y Larsson, T. et al., Kidney Int., 64: 2272-2279, 23). Con respecto a estas enfermedades inducidas debido a FGF23 excesivo, se piensa que la supresión de la acción de FGF23 o la retirada de FGF23 es una posible forma de tratar las enfermedades. Shimada et al. (25, Clin Ped Endocrin, 14:33-37) informan de diversos anticuerpos anti-FGF23 de ratón que se dice que neutralizan la acción del FGF23 endógeno en ratón y rata. Plasta la fecha, se ha informado que los anticuerpos monoclonales anti-FGF23 de ratón son una forma de suprimir la acción de FGF23 (véase Yamashita, T. ef al., Biochem. Biophy. Res. Commun., 277; 494-498, 2). Cuando los anticuerpos monoclonales anti-FGF23 de ratón 2C3B y 3C1E usados en este informe se administraron a ratones normales, se inhibió la función del FGF23 de ratón endógeno, y se suprimió la excreción de fósforo del riñón. Al fluctuar la expresión de la enzima que metaboliza la vitamina D en el riñón, esto mostró resultar en el aumento de las concentraciones de fósforo y 1a,25 dihidroxi vitamina D (denominada en lo sucesivo 1,25D) en el suero. Además, se realizó la administración repetida de anticuerpo monoclonal anti-FGF23 de ratón en ratón Hyp, que es un ratón modelo para XUH que tiene una alta concentración en suero de FGF23 y tiene hipofosfatemia y tiene disfunción de elongación ósea y disfunción de calcificación. En consecuencia, en el ratón Hyp, se observó un aumento en la concentración de fósforo en la sangre y, además, hubo mejoras en la disfunción de elongación ósea y la disfunción de calcificación. A partir de estos resultados, se pensó que el uso de un anticuerpo supresor de la acción de FGF23... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo frente a FGF23 humano o un fragmento funcional del mismo frente a FGF23 humano, que comprende una secuencia de aminoácidos de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos desde Q en la posición 2 hasta S en la posición 136 de SEC ID N° 12 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos desde A en la posición 23 hasta K en la posición 128 de SEC ID N° 14.

2. El anticuerpo frente a FGF23 o un fragmento funcional del mismo frente a FGF23 humano de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende una secuencia de aminoácidos de cadena pesada mostrada por una secuencia de aminoácidos desde Q en la posición 2 hasta S en la posición 136 de SEC ID N° 12 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera mostrada por una secuencia de aminoácidos desde A en la posición 23 hasta K en la

posición 128 de SEC ID N° 14.

3. El anticuerpo frente a FGF23 o un fragmento funcional del mismo frente a FGF23 humano de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en el que dicho fragmento funcional es un fragmento de péptido seleccionado entre el grupo que consiste en Fab, Fab', F(ab')2, Fv estabilizado con disulfuro (dsFv), región V dimerizada (dianticuerpo) y Fv de cadena individual (scFv).

4. El anticuerpo frente a FGF23 humano de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que la clase del anticuerpo es IgG, IgA, IgE, o IgM.

5. El anticuerpo frente a FGF23 humano de acuerdo con la reivindicación 4, en el que la subclase del anticuerpo es lgG1, lgG2, lgG3, o lgG4.

6. Composición farmacéutica, que comprende como ingrediente activo, el anticuerpo frente a FGF23 humano o un fragmento funcional del mismo frente a FGF23 humano de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-5.

7. Composición farmacéutica para su uso en un método de control del metabolismo del fósforo y/o el metabolismo de la vitamina D mediante FGF23, que comprende, como ingrediente activo, el anticuerpo frente a FGF23 humano o un fragmento funcional del mismo frente a FGF23 humano de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-5.

8. Composición farmacéutica para su uso en la prevención o el tratamiento de enfermedades que están asociadas con trastornos del metabolismo mineral que comprende como ingrediente activo, el anticuerpo frente a FGF23 humano o un fragmento funcional del mismo frente a FGF23 humano de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en la que la enfermedad que está asociada con los trastornos del metabolismo mineral se selecciona entre el grupo que consiste en osteomalacia neoplásica, ADHR, XLH, displasia fibrosa, síndrome de McCune-Albright, e hipofosfatemia recesiva autosómica.

9. Composición farmacéutica para su uso en la prevención o el tratamiento de una enfermedad seleccionada entre el grupo que consiste en osteoporosis, raquitismo, hipocalcemia, calcificación heterotrópica, osteoesclerosis, enfermedad de Paget, hiperparatiroidismo, y prurito, comprendiendo la composición como ingrediente activo, el anticuerpo frente a FGF23 humano o un fragmento funcional del mismo frente a FGF23 humano como se describe en una cualquiera de las reivindicaciones 1-5.

1. Ácido nucleico que codifica el anticuerpo de la reivindicación 1 o 2, que comprende un ácido nucleico que codifica una secuencia de aminoácidos de una región variable de cadena pesada codificada por una secuencia de bases desde C en la posición 58 hasta A en la posición 48 representada por SEC ID N° 11, y un ácido nucleico que codifica una secuencia de aminoácidos de una región variable de cadena ligera codificada por una secuencia de bases desde G en la posición 67 hasta A en la posición 384 representada por SEC ID N° 13.

11. Vector que comprende el ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 1.

12. Célula huésped aislada que comprende el vector de acuerdo con la reivindicación 11.

13. Método para producir un anticuerpo frente a FGF23 humano o un fragmento funcional del mismo frente a FGF23 humano, que comprende la etapa de cultivar la célula huésped de acuerdo con la reivindicación 12 para expresar un anticuerpo frente a FGF23 humano o un fragmento funcional del mismo frente a FGF23 humano.