Agentes para el tratamiento de enfermedades inflamatorias y métodos para usar los mismos.

Uso de CXCL11 de acuerdo con la SEC ID Nº 2 expuesta en el Nº de acceso a GenBank AAH05292 para la fabricación de un medicamento para tratar una enfermedad autoinmune.

Agentes para el tratamiento de enfermedades inflamatorias y métodos para usar los mismos La presente invención se refiere al uso de CXCL11 para el tratamiento de enfermedades inflamatorias en general y esclerosis múltiple en particular.

Las quimioquinas constituyen una familia de proteínas secretadas de tipo citoquina estructuralmente pequeñas que regulan el tráfico celular. Se producen y secretan por una amplia diversidad de tipos celulares en respuesta a 10 mediadores inflamatorios tempranos, tales como IL-11 o TNF-a, y en respuesta a infección bacteriana o vírica. Las quimioquinas funcionan principalmente como quimio-atrayentes para leucocitos, monocitos de reclutamiento, neutrófilos y otras células efectoras de la sangre a sitios de infección o daño. Pueden liberarse por muchos tipos celulares diferentes (por ejemplo, macrófagos) y pueden mediar un intervalo de efectos pro-inflamatorios sobre leucocitos, tales como activación de la quimiotaxis, desgranulación, síntesis de mediadores lipídicos, y activación de integrina.

Las quimioquinas pueden subdividirse en cuatro clases, las quimioquinas C, C-C, C-X-C y C-X3-C, dependiendo de la cantidad y disposición de motivos de cisteína amino-terminales conservados, donde "X" es un resto aminoacídico no conservado. La interacción de estas proteínas solubles con sus receptores específicos, que pertenecen a la súper-familia de receptores acoplados a proteína G con siete dominios transmembrana (GPCR) , median sus efectos biológicos provocando, entre otras respuestas, un aumento rápido en la concentración de calcio intracelular, cambios en la forma de la célula, expresión aumentada de moléculas de adhesión celular, desgranulación y promoción de la migración celular.

El receptor de quimioquinas CXCR3, también conocido como receptor nueve acoplado a proteína G (GPR9) y CD 183, se expresa predominantemente en células T efectoras inflamatorias, incluyendo células Th1 [Qin et al., J Clin Invest (1998) 101:746-54; Sallusto et al., J Exp Med (1998) 187:875-83] así como las células Th17 que producen IL17 definidas recientemente [Nakae et al., J Leukoc Biol (2007) 81:1258-68], pero también se expresa en otros linfocitos, incluyendo células B y células NK [Sallusto et al., supra]. CXCR3 se induce mucho después de activación celular. Tres ligandos de quimioquina compiten por la unión a este receptor: CXCL9 (MIG) , CXCL10 (IP-10) y CXCL11 (I-TAC) [Colvin et al., J Biol Chem (2004) 279:30219-27]. Estos ligandos se unen a diferentes epítopos en CXCR3, aunque CXCL11 se une a CXCR3 con mayor afinidad que CXCL9 y CXCL10 [Cole et al., supra; Tensen et al., J. Invest. Derm. (1999) 112:716-722]. CXCL11 puede antagonizar la función de los otros dos ligandos de CXCR3 ya que conduce rápidamente a la internalización del receptor, que por tanto llega a estar inaccesible a los otros ligandos de CXCR3 [Colvin et al., supra].

La esclerosis múltiple (EM) es una enfermedad inflamatoria desmielinizante del sistema nervioso central (SNC) . La MS y su modelo animal, encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) , se cree que están provocados por células inmunes activadas mediadas de forma autoinmune, tales como linfocitos T y B así como macrófagos y microglía, y 40 se considera que es una enfermedad neurodegenerativa inflamatoria. Patológicamente, la EM se caracteriza por infiltración perivenosa de linfocitos y macrófagos en el parénquima del SNC, provocando lesiones desmielinizantes llamadas placas. Estas placas, que son la característica distintiva de EM, están asociadas con muerte de oligodendrocitos, daño axonal y pérdida neuronal. El reclutamiento de células inflamatorias desde el lecho vascular al espacio perivascular, y desde allí al parénquima del SNC, es resultado de un proceso de múltiples etapas, que 45 está orquestado en parte por las quimioquinas.

CXCR3 se ha implicado previamente en la patogénesis de EM [Sorensen et al., J Clin Invest. (1999) 103 (6) :807-15]. Se ha demostrado que CXCR3 se expresa en células linfocíticas en casi cualquier infiltrado inflamatorio perivascular en lesiones activas de EM [Sorensen et al., supra]. Además, se encontraron niveles elevados de los dos ligandos de 50 CXCR3, CXCL9 y CXCL10, en el fluido cefalorraquídeo (CSF) de sujetos durante ataque de EM que probablemente son responsables de la quimio-atracción de células que expresan CXCR3 (por ejemplo, células T CD4+) desde la circulación sanguínea en el sitio de inflamación [Balashov et al. Proc Natl Acad Sci USA (1999) 96:6873-8; Sorensen et al., supra]. Además, en ratones con EAE inducida, la administración de anticuerpos anti-CXCL10 disminuyó la incidencia de enfermedad clínica e histológica, la gravedad, así como la infiltración de células mononucleares y las 55 células en el SNC [Fife et al, J Immunol (2001) 166:7617-24]. Tomados en conjunto, estos hallazgos proporcionan fuertes evidencias cumulativas que apoyan un papel central para el eje CXCR3/CXCL10/CXCL9 en el reclutamiento de células T al cerebro en EM. Aunque que el papel del eje CXCR3/CXCL11 desempeña en EM aún es impreciso.

Existen evidencias sustanciales que apoyan la hipótesis de que CXCL11 está implicado en la patogénesis de EM.

Por ejemplo, Hamilton et al. han mostrado niveles elevados de ARNm de I-TAC murino en SNC de ratones con EAE inducida [Hamilton et al., Scand J Immunol. (2002) 55 (2) :171-7].

Lazzeri y Romagnani han propuesto la quimioquina CXCL11 como una posible diana terapéutica en esclerosis múltiple, sin embargo, de hecho se distancian del uso de CXCL11 para el tratamiento de EM ya que proponen el tratamiento de EM usando fármacos que bloquean la actividad de CXCL11 [Lazzeri E. and Romagnani P., Curr Drug Targets Immune Endocr Metabol Disord. (2005) 5 (1) : 109-18].

Clark-Lewis et al. construyeron un potente antagonista para el receptor CXCR3 que les posibilitaba explorar la relación estructura-función de CXCR3 con sus ligandos, en particular I-TAC. El antagonista se obtuvo por truncamiento NH (2) -terminal de I-TAC. Esta molécula (I-TAC (4-73) ) , carecía de los primeros tres restos y demostró que no comprender actividad agonista. En lugar de ello demostró competir con I-TAC por la unión a células que albergan CXCR3, inhibiendo la migración celular e inhibiendo los cambios de calcio en las células que expresan CXCR3 en respuesta a estimulación con quimioquinas de CXCR3. El antagonista de I-TAC no se contempló para fines terapéuticos [Clark-Lewis et al., J Biol Chem. (2003) 278 (1) :289-95].

La patente de Estados Unidos Nº 6.869.606 describe complejos I-TAC biotinilados que mantienen su funcionalidad (por ejemplo, unión a CXCR3 e inducción de quimiotaxis) . La patente de Estados Unidos Nº 6.869.606 no menciona la esclerosis múltiple como enfermedad diana potencial para dichos complejos.

La publicación de Estados Unidos Nº 20060257359 describe medios para modular los fenotipos de células relacionadas con macrófagos para el tratamiento de enfermedades, tales como esclerosis múltiple. La publicación de Estados Unidos Nº 20060257359 muestra que la modulación del fenotipo celular puede conseguirse introduciendo efectores (por ejemplo, proteínas, anticuerpos o moléculas de ARN) en células relacionadas con macrófagos alterando de este modo la expresión génica y fenotipo celular (por ejemplo, secreción de citoquinas o migración celular) . Entre una larga lista de efectores potenciales, se especifica I-TAC en la misma. La publicación de Estados Unidos Nº 20060257359 describe el tratamiento de una gran cantidad de enfermedades autoinmunes aunque no especifica qué enfermedades pueden aliviarse por regulación positiva o regulación negativa de I-TAC. Además, la publicación de Estados Unidos Nº 20060257359 no proporciona ningún soporte experimental que indique el

tratamiento de EM con I-TAC.

La publicación PCT Nº WO06125077 describe un ligando del receptor polipeptídico CXCR3 no natural donde el dominio N-bucle es de I-TAC para el tratamiento trastornos fibróticos, trastornos angiogénicos y cáncer. No se contempló el tratamiento de EM.

La publicación PCT Nº WO05016241 describe un ligando polipeptídico sintético para CXCR3 para el tratamiento de trastornos fibróticos, trastornos angiogénicos, cáncer e infecciones bacterianas. Esta invención describe el uso de la secuencia consenso de I-TAC (restos aminoacídicos que existen en I-TAC) que incluye o carecen de una secuencia de señalización. Por tanto, dichos polipéptidos de CXCR3 pueden funcionar como agonistas o antagonistas de CXCR3. No se contempló el tratamiento de EM.

Por tanto existe la ampliamente reconocida necesidad de, y sería muy ventajoso tener, polipéptidos CXCL11 que puedan usarse en el tratamiento de... [Seguir leyendo]

1. Uso de CXCL11 de acuerdo con la SEC ID Nº 2 expuesta en el Nº de acceso a GenBank AAH05292 para la fabricación de un medicamento para tratar una enfermedad autoinmune. 5

2. Uso de células T ex vivo cultivadas con CXCL11 de acuerdo con la SEC ID Nº 2 expuesta en el Nº de acceso a GenBank AAH05292 para la fabricación de un medicamento para tratar una enfermedad autoinmune.

3. El uso de la reivindicación 2, en el que dichas células T son células T CD4+. 10

4. Un artículo de fabricación que comprende CXCL11 de acuerdo con la SEC ID Nº 2 expuesta en el Nº de acceso a GenBank AAH05292 y una agente anti-esclerosis múltiple que se envasan en un material de envasado y de forma impresa, en o sobre dicho material de envasado para su uso en el tratamiento de esclerosis múltiple.

5. Un polipéptido aislado que comprende una secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID Nº 6.

6. Una composición farmacéutica que comprende como ingrediente activo el polipéptido aislado de la reivindicación 5 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

7. El uso o artículo de fabricación de la reivindicación 1, 2, ó 4, en el que dicho CXCL11 es capaz de regular positivamente la secreción de IL-10 y/o IL-4 desde macrófagos y células T.

8. El uso o artículo de fabricación de la reivindicación 1, 2, ó 4, en el que dicho CXCL11 es capaz de regular

negativamente la secreción de una citoquina desde macrófagos y células T, en el que dicha citoquina se selecciona 25 entre el grupo que consiste en TNF-a, IFN-y, IL-2 e IL-12.

9. El uso de la reivindicación 1 ó 2, en el que dicha enfermedad autoinmune se selecciona entre el grupo que consiste en artritis reumatoide, espondilitis reumatoide, osteoartritis, artritis gotosa, afecciones artríticas, articulaciones inflamadas, eccema, afecciones cutáneas inflamatorias, afecciones oculares inflamatorias, 30 conjuntivitis, pirexia, necrosis tisular resultante de inflamación, rechazo de tejidos después de cirugía de transplante, enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa, inflamación de las vías respiratorias, asma, bronquitis, lupus sistémico eritematoso, esclerosis múltiple, miastenia grave, esclerosis sistémica progresiva, dermatitis atópica, hiperinmunoglobina E, hepatitis activa crónica negativa a antígeno de hepatitis B, tiroiditis de Hashimoto, fiebre mediterránea familiar, enfermedad de Grave, anemia hemolítica autoinmune, cirrosis biliar primaria, enfermedad

inflamatoria del intestino, pénfigo vulgar, enfermedad de injerto contra hospedador, diabetes, diabetes de tipo I, granulomatosis de Wegener, glomerulonefritis, esclerosis múltiple de Marburg, infecciones víricas, infecciones por VIH y SIDA.

10. El uso de la reivindicación 1 ó 2, en el que dicha enfermedad autoinmune es esclerosis múltiple. 40

11. El uso o artículo de fabricación de la reivindicación 1, 2 ó 4, en el que una secuencia de aminoácidos de dicho CXCL11 se une a una secuencia heteróloga de aminoácidos.

12. El uso o artículo de fabricación de la reivindicación 11, en el que dicho CXCL11 unido a dicha secuencia 45 heteróloga de aminoácidos se expone en la SEC ID Nº 6.