METODO PARA DETERMINAR UN RIESGO DE QUE LOS PACIENTES HIPERGLUCEMICOS DESARROLLEN ENFERMEDAD CARDIOVASCULAR.

Un método in vitro para evaluar un riesgo de que un paciente diabético desarrolle enfermedad cardiovascular (CVD) aterosclerótica,

comprendiendo el método determinar un fenotipo de haptoglobina del paciente diabético y evaluar de ese modo el riesgo de que el paciente diabético desarrolle la enfermedad cardiovascular (CVD) aterosclerótica, en el que el riesgo se disminuye en pacientes diabéticos con fenotipo de haptoglobina 1-1 en comparación con pacientes con fenotipos de haptoglobina 1-2 o haptoglobina 2-2

Método para determinar un riesgo de que los pacientes hiperglucémicos desarrollen enfermedad cardiovascular.

La presente invención se refiere a un método para evaluar un riesgo de un paciente diabético de acuerdo con la reivindicación 1.

La presente invención se refiere a un método para determinar un riesgo de que los pacientes hiperglucémicos desarrollen enfermedad cardiovascular.

La enfermedad cardiovascular (CVD) es la complicación más frecuente, grave y costosa de la 2 diabetes tipo 2.¹ Es la principal causa de muerte entre pacientes con diabetes tipo 2 independientemente de la duración de la diabetes.² Varios estudios basados en la población han mostrado de forma consecuente que el riesgo relativo de CVD en individuos diabéticos es varias veces superior en comparación con aquellos sin diabetes.^3-7 Este riesgo incrementado parece ser aún más evidente en las mujeres.^4,5,8 Factores de riesgo tales como hipertensión, hiperlipidemia y tabaquismo incrementan todos independientemente el riesgo relativo de que el paciente diabético desarrolle CVD, pero el efecto de la diabetes parece ser independiente de los factores de riesgo convencionales.⁹

Aunque la incidencia de la CVD es superior en pacientes diabéticos en comparación con no diabéticos en todas las poblaciones estudiadas, existen claras diferencias geográficas y étnicas en el riesgo relativo de CVD entre pacientes diabéticos que no pueden explicarse totalmente por diferencias en factores de riesgo cardíacos convencionales entre esos grupos.^10-20 Por ejemplo, el análisis del riesgo relativo de CVD en diferentes grupos étnicos que viven en el Reino Unido ha mostrado que los pacientes diabéticos de origen sudasiático tienen un riesgo notablemente incrementado^12,15, mientras que los pacientes diabéticos afrocaribeños tienen un riesgo notablemente disminuido^14,16 de CVD en comparación con los pacientes diabéticos de origen europeo.

Estos estudios sugieren que las diferencias genéticas podrían contribuir a diferencias en la susceptibilidad a CVD en el paciente diabético.

Mientras se concebía la presente invención se estableció como hipótesis que una posibilidad es un polimorfismo alélico funcional en el gen de haptoglobina.

La haptoglobina (Hp) es una proteína sérica que se une a hemoglobina que representa un papel fundamental en la protección contra estrés oxidativo conducido por heme.^23,24 Ratones que carecían del gen de Hp demuestran un incremento drástico en el estrés oxidativo y el daño tisular oxidativo particularmente en el riñón. En el hombre, hay dos alelos comunes para Hp (1 y 2) que se manifiestan como tres fenotipos fundamentales 1-1, 2-1 y 2-2.^21-23

Se han demostrado diferencias funcionales en la capacidad de unión a hemoglobina de los tres fenotipos. La Hp en pacientes con el fenotipo Hp 1-1 es capaz de unirse a más hemoglobina en una base por gramo que Hp que contienen productos del alelo 2 de haptoglobina.²³ La moléculas de haptoglobina en pacientes con el fenotipo de haptoglobina 1-1 también son antioxidantes más eficaces, ya que el menor tamaño de la haptoglobina 1-1 facilita su entrada en sitios extravasculares de lesión tisular oxidativa en comparación con producto del alelo 2 de haptoglobina. Esto también incluye un tamizado glomerular significativamente mayor de haptoglobina en pacientes con haptoglobina 1-1.²²

El alelo 2 de haptoglobina parece haber surgido a partir del alelo 1 a través de un episodio de duplicación génica parcial hace aproximadamente 20 millones de años y haberse propagado en la población mundial como resultado de presiones selectivas relacionadas con la resistencia a agentes infecciosos.^24,25 Actualmente, los alelos de haptoglobina difieren drásticamente en su frecuencia relativa entre diferentes grupos étnicos.²⁶ El episodio de duplicación génica ha dado como resultado un cambio drástico en las propiedades biofísicas y bioquímicas de la proteína de haptoglobina codificada por cada uno de los 2 alelos. Por ejemplo, el producto proteínico del alelo 1 parece ser un antioxidante superior en comparación con el producido por el alelo 2.²³ El fenotipo de haptoglobina de cualquier individuo, 1-1, 2-1 ó 2-2, se determina fácilmente a partir de 10 microlitros de plasma mediante electroforesis en gel.

Se ha demostrado recientemente que el fenotipo de haptoglobina es predictor del desarrollo de un número de complicaciones microvasculares en el paciente diabético.^27-29 Específicamente, se mostró que pacientes que son homocigóticos para el alelo 1 de haptoglobina tienen un riesgo disminuido de desarrollar retinopatía y nefropatía. Este efecto, al menos para la nefropatía, se ha observado en pacientes diabéticos tanto de tipo 1 como de tipo 2 y la pertinencia se ha reforzado por el hallazgo de un efecto gradiente con respecto al número de alelos 2 de haptoglobina y el desarrollo de nefropatía.²⁹ Por otra parte, se observó que el fenotipo de haptoglobina puede ser predictor del desarrollo de complicaciones macrovasculares en el paciente diabético. Los presentes inventores han mostrado que el desarrollo de reestenosis después de angioplastia coronaria percutánea se disminuye significativamente en pacientes diabéticos con el fenotipo de haptoglobina 1-1.^27,30 Estudios retrospectivos y transversales previos que examinan el fenotipo de haptoglobina y la enfermedad de las arterias coronarias en la población general han dado resultados conflictivos.^31-38 No se ha estudiado el papel del fenotipo de haptoglobina en el desarrollo de la enfermedad aterosclerótica de las arterias coronarias en el estado diabético.

Los indios americanos, que se pensó previamente que eran resistentes a desarrollar enfermedad de las arterias coronarias, actualmente están experimentando CDV en proporciones epidémicas.²⁰ Esta incidencia incrementada de CVD se ha atribuido al incremento brusco en la diabetes tipo 2 en esta población.^1,2 The Strong Heart Study ha examinado la incidencia, la frecuencia y los factores de riesgo de la enfermedad cardiovascular en poblaciones de indios americanos en tres áreas geográficas desde 1988 con una vigilancia continuada hasta la actualidad. ²⁰ La homogeneidad genética relativa de esta población de pacientes puede permitir la identificación de factores genéticos específicos que contribuyen a la enfermedad CVD en el estado diabético.

De acuerdo con esto, aunque reduciendo la presente invención a la práctica, se realizó un intento de determinar el riesgo relativo de CVD en pacientes diabéticos de acuerdo con el fenotipo de haptoglobina en un caso/una muestra de control procedente de the Strong Heart Study.

WO98/37419 muestra un método y un estuche para determinar un fenotipo de haptoglobina y se refiere específicamente a aplicaciones que implican haptoglobina humana. Las enseñanzas de esta solicitud se centran en el uso del fenotipo de haptoglobina 2-2 como un factor de riesgo independiente, específicamente en relación con un daño a órganos diana en la hipertensión esencial refractaria, en relación con la aterosclerosis (en la población general) y el infarto de miocardio agudo y en relación con la mortalidad por infección con VIH. Esta solicitud no muestra el uso del fenotipo de haptoglobina como un factor de riesgo en la enfermedad cardiovascular en la DM. Debido a la tendencia de un fenotipo de haptoglobina 2-2 para hacer a los pacientes más propensos al estrés oxidativo, podría sostenerse que el uso de un fenotipo 2-2 como un predictor negativo para la enfermedad cardiovascular en la DM está sobreentendido indirectamente en esta patente. Sin embargo, las enseñanzas de esta patente no incluyen la idea de que el fenotipo de haptoglobina 1-1 sea un predictor positivo para la tendencia reducida a la enfermedad cardiovascular en la DM. Las enseñanzas de PCT WO98/37419 incluyen el uso de un socio de unión a haptoglobina.

En otras palabras, se sabe que el estrés oxidativo que se origina a partir del fenotipo Hp 2-1 ó 2-2 conduce a complicaciones vasculares en la población general. También se sabe que ciertas complicaciones vasculares están asociadas con el estrés oxidativo asociado con la DM. Por lo tanto, es plausible que el estrés oxidativo que se origina a partir del fenotipo Hp bien 2-1 o bien 2-2 combinado con el que se origina de la DM dé como resultado complicaciones vasculares asociadas con la diabetes. Sin embargo, en la actualidad...

1. Un método in vitro para evaluar un riesgo de que un paciente diabético desarrolle enfermedad cardiovascular (CVD) aterosclerótica, comprendiendo el método determinar un fenotipo de haptoglobina del paciente diabético y evaluar de ese modo el riesgo de que el paciente diabético desarrolle la enfermedad cardiovascular (CVD) aterosclerótica, en el que el riesgo se disminuye en pacientes diabéticos con fenotipo de haptoglobina 1-1 en comparación con pacientes con fenotipos de haptoglobina 1-2 o haptoglobina 2-2.

2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicha etapa de determinar dicho fenotipo de haptoglobina comprende determinar un genotipo de haptoglobina del paciente diabético.

3. El método de acuerdo con la reivindicación 2, en el que dicha etapa de determinar dicho genotipo de haptoglobina del paciente diabético comprende un método seleccionado del grupo que consiste en un método de amplificación de la señal, un método de detección directa y la detección de al menos un cambio de secuencia.

4. El método de acuerdo con la reivindicación 3, en el que dicho método de amplificación amplifica una molécula seleccionada del grupo que consiste en una molécula de DNA y una molécula de RNA.

5. El método de acuerdo con la reivindicación 3, en el que dicho método de amplificación de la señal se selecciona del grupo que consiste en PCR, LCR (LAR), reacción sintética automantenida (3SR/NASBA) y reacción de QBeta (Qb) replicasa.

6. El método de acuerdo con la reivindicación 3, en el que dicho método de detección directa se selecciona del grupo que consiste en una reacción cíclica con sonda (CPR) y un análisis de DNA ramificado.

7. El método de acuerdo con la reivindicación 3, en el que dicha detección de al menos un cambio de secuencia emplea un método seleccionado del grupo que consiste en polimorfismo de la longitud de fragmentos de restricción (análisis de RPLP), análisis de oligonucleótidos específicos de alelos (ASO), electroforesis en gel con gradiente de desnaturalización/temperatura (DGGE/TGGE), análisis de polimorfismo de la conformación de hebras individuales (SSCP) y huella dactilar disesoxi (ddF).

8. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicha etapa de determinar dicho fenotipo de haptoglobina comprende determinar directamente el fenotipo de haptoglobina del paciente diabético.

9. El método de acuerdo con la reivindicación 8, en el que dicha etapa de determinar el fenotipo de haptoglobina se efectúa mediante un método de detección inmunológica.

10. El método de acuerdo con la reivindicación 9, en el que dicho método de detección inmunológica se selecciona del grupo que consiste en un radioinmunoensayo (RNA), un ensayo de inmunoabsorción con enzimas ligadas (ELISA), una transferencia western, un análisis inmunohistoquímico y clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS).

11. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el riesgo de que un paciente diabético desarrolle la enfermedad cardiovascular aterosclerótica se disminuye en pacientes diabéticos con fenotipo de haptoglobina 1-1 en comparación con fenotipo de haptoglobina 1-2, y se disminuye adicionalmente en pacientes diabéticos con fenotipo de haptoglobina 1-1 en comparación con pacientes con fenotipo de haptoglobina 2-2.