Uso de 7-cloro-N,N,5-trimetil-4-oxo-3-fenil-3,5-dihidro-4H-piridazino[4,5-b]indol-1-acetamida como un biomarcador de los niveles de los receptores periféricos de las benzodiazepinas.

Uso de 7-cloro-N,N,5-trimetil-4-oxo-3-fenil-3,5-dihidro-4H-piridazino[4,

5-b]indol-1-acetamida radiomarcada comobiomarcador para la detección, en un individuo, de los niveles del receptor periférico de benzodiazepina (PBR)asociados con estados normales y patológicos, en el que la radiomarca se elige entre carbono-11, radiohalógenos yradiometales.

Uso de 7-cloro-N, N, 5-trimetil-4-oxo-3-fenil-3, 5-dihidro-4H-piridazino[4, 5-b]indol-1-acetamida como un biomarcador de los niveles de los receptores periféricos de las benzodiazepinas La presente invención se refiere al uso de 7-cloro-N, N, 5-trimetil-4-oxo-3-fenil-3, 5-dihidro-4H-piridazino[4, 5-b]indol-1acetamida como biomarcador para la detección, en un individuo, de los niveles de PBR (receptor periférico de benzodiazepinas) asociados con estados normales y patológicos. La presente invención también se ocupa de un método de detección de los niveles de PBR para los propósitos anteriores.

Bajo estados fisiológicos normales, el PBR, también conocido como proteína translocadora 18 kDa (TSPO) (Papadopoulos, B. et al. (2006) Trends Pharmacol. Sci. 27: 402-409) , se expresa en bajos niveles en el cerebro, principalmente en las células microgliales, y se expresa en gran medida en varios tejidos periféricos, tales como las glándulas adrenales, glándula pineal, glándulas salivares, gónadas, riñón, pulmón, corazón y músculo esquelético (Chen, M-K. y Guilarte, T. (2008) Pharmacology and Therapeutics 118: 1-17; Venneti, S. et al. (2006) Progress in Neurobiol. 80: 308-322) . Estudios de localización subcelular con el ligando de referencia del PBR, el [3H]PK11195, han demostrado que el PBR está localizado en la membrana exterior de las mitocondrias (Anholt, R.R. et al. (1986)

J. Biol. Chem. 261: 576-583; Antkiewicz-Michaluk, L. et al. (1988) Mol. Pharmacol. 34: 272-278) . Sin embargo, estudios inmunohistoquímicos también han mostrado que el PBR se expresa en células sanguíneas (desprovistas de mitocondrias) (Olson, J.M. et al. (1988) Eur. J. Pharmacol. 152: 47-53) y puede estar localizado en la membrana plasmática (O’Beirne, G. et al. (1990) Eur. J. Biochem. 188: 131-138; Woods, M.J. et al. (1996) Biochem. Pharmacol.

51: 1283-1292) . También se ha observado una localización nuclear o perinuclear del PBR en el cáncer de mama (Hardwick, M. et al. (1999) Cancer Res. 59: 831-842) , células de glioma humanas (Brown, R.C. et al. (2000) Cancer Lett. 156: 125-132) , células de tumor hepático (Corsi, L. et al. (2005) Life Sci. 76: 2523-2533) y células gliales (Kuhlmann, A.C. y Guilarte, T.R. (2000) J. Neurochem. 74: 1694 - 1704) .

Se observa un notable aumento en los niveles de PBR después de un daño celular, inflamación o proliferación, y está asociado con varios estados patológicos agudos y crónicos (Chen, M-K. y Guilarte, T. (2008) Pharmacology and Therapeutics 118: 1-17; Venneti, S. et al. (2006) Progress in Neurobiology 80: 308-322) . Estas incluyen: lesiones cerebrales, tales como ictus y daño por isquemia-reperfusión (Gerhard, A. et al. (2000) Neuroreport 11: 2957-2960; Gerhard, A. et al. (2005) Neuroimage 24: 404-412) , daño cerebral traumático (Raghavendra, R. et al. (2000) Exp. Neurol. 161: 102-114) ; infecciones cerebrales, tales como encefalitis (Banati, R.B. et al. (1999) Neurology 53: 21992203; Cagin, A. et al. (2001) Brain 124: 2014-2027) ; enfermedades neurológicas, tales como esclerosis múltiple (Banati, R.B. et al. (2000) Brain 123: 2321-2337) , enfermedad de Alzheimer y demencia (Cagnin, A. et al. (2001) Lancet 358: 461-467; Versijpt, J.J. et al. (2003) Eur. Neurol. 50: 39-47) , enfermedad de Parkinson (Ouchi, Y. et al. (2005) Ann. Neurol. 57: 168-175; Gerhard, A. et al. (2006) Neurobiol. Dis. 21: 404-412) , esclerosis lateral amiotrófica (Turner, M.R. et al. (2004) Neurobiol. Dis. 15: 601-609) , degeneración cortico-basal (Gerhard A. et al. (2004) Mov. Disord. 19: 1221-1226; Henkel, K. et al. (2004) Mov. Disord. 19: 817-821) , enfermedad de Huntington (Messmer, K. y Reynolds, G.P. (1998) Neurosci. Lett. 241: 53-56; Pavese, N. et al. (2006) Neurology 66: 1638-1643) y epilepsia (Sauvageau, A. et al. (2002) Metab. Brain Dis. 17: 3-11) . El aumento de los niveles de PBR en patologías del SNC se observa principalmente en las células microgliales (Chen, M-K. y Guilarte, T. (2008) Pharmacology and Therapeutics 118: 1-17; Venneti, S. et al. (2006) Progress in Neurobiology 80: 308-322) .

También se observan grandes aumentos en el PBR en el cáncer (Cornu, P. et al. (1992) Acta. Neurichir. 119: 146152; Hardwick, M. et al. (1999) Cancer Res. 59: 831-842; Maaser, K. et al. (2002) Cancer Res. 8: 3205-3209) , inflamación pulmonar (Audi, S.H. et al. (2002) Lung. 180: 241-250; Hardwick, M.J. et al. (2005) Mol. Imaging. 4: 432438) , isquemia cardíaca (Mazzone, A. et al. (2000) J. Am. Coll. Cardiol. 36: 746-750) , isquemia renal (Zhang, K. et al. (2006) J. Am. Coll. Surg. 203: 353-364) , reumatismo (fibromialgia) (Faggioli, P. et al. (2004) Rheumatology (Oxford) 43: 1224-1225) , degeneración del nervio ciático (Mills, C.D. et al. (2005) Mol. Cell. Neurosci. 30: 228-237) , artritis psoriática (Guisti, L. et al. (2004) Clin. Biochem. 37: 61-66) y aterosclerosis (Fujimura, Y. et al. (2008) Atherosclerosis, 201: 108-111; Laitinen, I. et al. (2008) Eur. J. Nuc. Med. Mol. Imaging 36: 73-80) .

Por contraste, se observa una disminución en los niveles de PBR en el cerebro de los pacientes de esquizofrenia (Kurumaji, A. et al. (1997) J. Neural. Transm. 104: 1361-1370; Wodarz, N. et al. (1998) Psychiatr y Res. 14: 363-369) y en la artritis reumatoide (Bribes, E. et al. (2002) Eur. J. Pharmacol. 452: 111-122) y osteoartritis (Bazzichi, L. et al. (2003) Clin. Biochem. 36: 57-60) .

La capacidad de tomar imágenes de los niveles de PBR in vivo en el cerebro y otros tejidos podría servir, por lo tanto, como un importante biomarcador de la progresión de la enfermedad, para determinar y evaluar la eficacia de un tratamiento terapéutico y para evaluar la ocupación del receptor PBR in vivo.

El ligando PET de referencia para PBR, [11C]PK11195, ha sido usado de manera extensa para la toma de imágenes in vivo de los niveles de PBR en varios estados neuropatológicos (Chen, M-K y Guilarte, T. (2008) Pharmacology and Therapeutics 118: 1-17; Venneti, S. et al. (2006) Progress in Neurobiology 80: 308-322) . Sin embargo, el [11C]PK11195 muestra una absorción en el cerebro relativamente baja, una alta unión no específica y una pobre relación señal a ruido. Estas propiedades limitan la sensibilidad del [11C]PK11195 para la toma de imágenes PET de los niveles de PBR y estudios de ocupación en el SNC. El desarrollo de ligandos PET para PBR mejorados, con una

unión específica más alta y mayor sensibilidad que el [11C]PK11195 proporcionaría, por lo tanto, un importante avance para la toma de imágenes de los niveles de PBR en el cerebro y otros tejidos.

Entre los compuestos descritos y reivindicados en los documentos WO 99/06406 y WO 00/44384, un derivado de piridazino[4, 5-b]indol, la 7-cloro-N, N, 5-trimetil-4-oxo-3-fenil-3, 5-dihidro-4H-piridazino[4, 5-b]indol-1-acetamida, fue identificado como particularmente interesante para el uso como ligando PET (o SPECT) para el PBR. Este compuesto tiene una alta afinidad por el PBR in vitro e in vivo (Ferzaz, B. et al. (2002) J. Pharm. Exp. Therap. 301: 1067-1078) .

Compendio de la invención La presente invención se ocupa del uso de una forma radiomarcada de 7-cloro-N, N, 5-trimetil-4-oxo-3-fenil-3, 5dihidro-4H-piridazino[4, 5-b]indol-1-acetamida como biomarcador para la detección de niveles de PBR asociados con estados normales y niveles de PBR asociados con estados patológicos.

La presente invención también se ocupa de un método para la detección de niveles de PBR asociados con estados normales y niveles de PBR asociados con estados patológicos usando una forma radiomarcada de 7-cloro-N, N, 5trimetil-4-oxo-3-fenil-3, 5-dihidro-4H-piridazino[4, 5-b]indol-1-acetamida.

Definiciones Por razones de conveniencia y para facilitar la lectura, el compuesto 7-cloro-N, N, 5-trimetil-4-oxo-3-fenil-3, 5-dihidro4H-piridazino[4, 5-b]indol-1-acetamida se ha renombrado como “A” en algunos capítulos de la presente solicitud.

Para la presente invención, las siguientes palabras se deben entender de la manera que sigue.

! Biomarcador: una característica que puede ser medida objetivamente (es decir, con precisión y reproducibilidad aceptables) y usada como indicador de un proceso fisiológico normal o patológico y para evaluar la acción de terapias médicas. Un biomarcador puede ser un parámetro biológico, anatómico, fisiológico, bioquímico o molecular que puede ser detectado en un tejido o en un fluido biológico.

! Inflamación: respuesta al daño o la destrucción de los tejidos. En la periferia, la inflamación aguda consiste en infiltrados leucocíticos caracterizados por células polimorfonucleares (neutrófilos) y la inflamación crónica consiste en células mononucleares (macrófagos, linfocitos, células del plasma) . En el cerebro, la inflamación incorpora un amplio espectro de... [Seguir leyendo]

1. Uso de 7-cloro-N, N, 5-trimetil-4-oxo-3-fenil-3, 5-dihidro-4H-piridazino[4, 5-b]indol-1-acetamida radiomarcada como biomarcador para la detección, en un individuo, de los niveles del receptor periférico de benzodiazepina (PBR) asociados con estados normales y patológicos, en el que la radiomarca se elige entre carbono-11, radiohalógenos y radiometales.

2. Uso según la reivindicación 1, en el que la 7-cloro-N, N, 5-trimetil-4-oxo-3-fenil-3, 5-dihidro-4H-piridazino[4, 5-b]indol1-acetamida está radiomarcada con carbono-11.

3. Uso según las reivindicaciones 1 y 2, en el que la 7-cloro-N, N, 5-trimetil-4-oxo-3-fenil-3, 5-dihidro-4H-piridazino[4, 5b]indol-1-acetamida está radiomarcada con carbono-11 sobre el carbono del grupo metilo situado en la posición 5 del núcleo de indol.

4. Uso según la reivindicación 1, en el que la 7-cloro-N, N, 5-trimetil-4-oxo-3-fenil-3, 5-dihidro-4H-piridazino[4, 5-b]indol1-acetamida está radiomarcada con radiohalógenos.

5. Uso según las reivindicaciones 1 ó 4, en el que la 7-cloro-N, N, 5-trimetil-4-oxo-3-fenil-3, 5-dihidro-4H-piridazino[4, 5b]indol-1-acetamida está radiomarcada con el radiohalógeno flúor-18.

6. Uso según las reivindicaciones 1 ó 5, en el que la 7-cloro-N, N, 5-trimetil-4-oxo-3-fenil-3, 5-dihidro-4H-piridazino[4, 5b]indol-1-acetamida está radiomarcada con flúor-18 en la posición para del anillo de 3-fenilo.

7. Uso según las reivindicaciones 1-6, en el que la detección de los niveles de PBR se realiza por adquisición de imágenes PET (tomografía de emisión de positrones) o adquisición de imágenes SPECT (tomografía computerizada de emisión de fotones individuales) .

8. Uso según las reivindicaciones 1-7, en el que la detección de los niveles de PBR se realiza por adquisición de imágenes PET (tomografía de emisión de positrones) .

9. Uso según las reivindicaciones 1-8, en el que los estados patológicos relacionados con cambios en los niveles de PBR se seleccionan entre daños cerebrales, infecciones cerebrales y enfermedades neurológicas.

10. Uso según las reivindicaciones 1-8, en el que los estados patológicos relacionados con cambios en los niveles de PBR se seleccionan entre enfermedades psiquiátricas.

11. Uso según las reivindicaciones 1-8, en el que los estados patológicos relacionados con cambios en los niveles de PBR se seleccionan entre enfermedades proliferativas.

12. Uso según las reivindicaciones 1-8, en el que los estados patológicos relacionados con cambios en los niveles de PBR se seleccionan entre procesos inflamatorios periféricos.

13. Uso según las reivindicaciones 1-8, en el que la detección de los niveles de PBR se realiza para estudios de ocupación.

14. Uso según las reivindicaciones 1-8, en el que la detección de los niveles de PBR se realiza para evaluar la eficacia de un tratamiento terapéutico.

15. Método para la detección de niveles de PBR asociados con estados normales y cambios en los niveles de PBR asociados con estados patológicos, en los que la detección se realiza usando una forma radiomarcada de 7-cloroN, N, 5-trimetil-4-oxo-3-fenil-3, 5-dihidro-4H-piridazino[4, 5-b]indol-1-acetamida, en donde la radiomarca se elige entre carbono-11, radiohalógenos y radiometales.

16. Método según la reivindicación 15, en el que la forma radiomarcada de 7-cloro-N, N, 5-trimetil-4-oxo-3-fenil-3, 5dihidro-4H-piridazino[4, 5-b]indol-1-acetamida contiene carbono-11.

17. Método según las reivindicaciones 15-16, en el que la 7-cloro-N, N, 5-trimetil-4-oxo-3-fenil-3, 5-dihidro-4Hpiridazino[4, 5-b]indol-1-acetamida está radiomarcada con carbono-11 sobre el carbono del grupo metilo situado en la posición 5 del núcleo de indol.

18. Método según la reivindicación 15, en el que la 7-cloro-N, N, 5-trimetil-4-oxo-3-fenil-3, 5-dihidro-4H-piridazino[4, 5b]indol-1-acetamida está radiomarcada con flúor-18.

19. Método según la reivindicación 15, en el que la 7-cloro-N, N, 5-trimetil-4-oxo-3-fenil-3, 5-dihidro-4H-piridazino[4, 5b]indol-1-acetamida está radiomarcada con flúor-18 en la posición para del anillo de 3-fenilo.

20. Método según las reivindicaciones 15-19, en el que los estados patológicos relacionados con cambios en los niveles de PBR se seleccionan entre daños cerebrales, infecciones cerebrales y enfermedades neurológicas.

21. Método según las reivindicaciones 15-19, en el que los estados patológicos relacionados con cambios en los niveles de PBR se seleccionan entre enfermedades psiquiátricas.

22. Método según las reivindicaciones 15-19, en el que los estados patológicos relacionados con cambios en los niveles de PBR se seleccionan entre enfermedades proliferativas.

23. Método según las reivindicaciones 15-19, en el que los estados patológicos relacionados con cambios en los niveles de PBR se seleccionan entre procesos inflamatorios periféricos.

24. Método según las reivindicaciones 15-19, en el que la detección de los niveles de PBR se realiza para estudios de ocupación.

25. Método según las reivindicaciones 15-19, en el que la detección de los niveles de PBR se realiza para evaluar la 10 eficacia de un tratamiento terapéutico.