Una preparación de liposomas catiónicos que comprende un taxano.

Una preparación de liposomas catiónicos que comprende al menos un lípido catiónico en una cantidad de al menos aproximadamente 30% molar,

opcionalmente al menos un compuesto anfifílico adicional en una cantidad de hasta 69,9% molar, un taxano en una cantidad de al menos 2% molar y un agente estabilizador en una cantidad de 0,1% (m/v) a 20% (m/v), caracterizada porque dicha preparación de liposomas es física y químicamente estable en solución acuosa durante al menos 12 horas a 2 hasta 8°C y al menos 4 horas a la temperatura ambiente, y caracterizada por tener un pH de entre 3 y 6, 5.

Una preparación de liposomas catiónicos que comprende un taxano.

La presente invención se refiere a una preparación de liposomas catiónicos que contiene un compuesto lipófilo activo, que es un taxano, que tiene estabilidad alta y que es adecuada para aplicaciones terapéuticas.

Los liposomas son pequeñas vesículas esféricas compuestas fundamentalmente de diversos tipos de lípidos, fosfolípidos y otros componentes lipófilos. Los componentes lipídicos forman normalmente una bicapa, donde el extremo polar del compuesto anfifílico está en contacto con la solución circundante, que es típicamente una solución acuosa. El extremo no polar hidrófobo del compuesto anfifílico está en contacto con otro extremo no polar hidrófobo de otro compuesto anfifílico, formando de este modo la bicapa lipídica. Dependiendo del tipo de compuestos anfifílicos utilizados, la membrana liposómica puede clasificarse de acuerdo con su carga externa en membranas netas neutras, y membranas cargadas negativa y positivamente.

Se han desarrollado liposomas para muchas aplicaciones terapéuticas y diagnósticas. Entre otras aplicaciones, se utilizan para suministrar moléculas que no son suficientemente solubles en agua. Estas moléculas lipófilas se incorporan en la bicapa del liposoma o están unidas químicamente a la bicapa lipídica.

El paclitaxel, el representante más importante de la familia de los taxanos, es un compuesto altamente lipófilo de este tipo. El paclitaxel se conoce como Taxol que es el fármaco formulado en aceite de ricino polietoxilado (Cremophor® EL) y etanol absoluto. Adicionalmente, el paclitaxel ha sido formulado en liposomas.

Antes de aplicar Taxol® a los humanos, el portador farmacéutico con el compuesto terapéutico se diluye en una solución acuosa adecuada. Sin embargo, se ha observado que el portador causa reacciones anafilácticas graves, que ponen en riesgo la vida en animales y humanos, y es físicamente incompatible con algunos sistemas de infusión intravenosa. Por esta razón, se han realizado varios intentos a fin de eliminar el Cremophor® EL por reformulación del fármaco en un vehículo mejor tolerado. Los liposomas se han caracterizado clínicamente durante las últimas décadas y se ha comprobado que son un sistema de suministro de fármacos seguro y bien tolerado. Los liposomas pueden estar constituidos por lípidos existentes naturalmente que llevan un grupo de cabeza polar que es neutro o está cargado negativamente. En la naturaleza no existen lípidos de diacilglicéridos cargados positivamente.

Sharma et al. [1] fabricaron liposomas neutros de paclitaxel de acuerdo con el denominado método de película. Los lípidos, fosfatidilcolina (PC) y fosfatidilglicerol (PG) se disolvían junto con paclitaxel en cloroformo. El cloroformo se evaporaba a 40ºC y la película paclitaxel-lípido se disolvía en terc-butanol. La solución se dividía en partes alícuotas y se liofilizaba. El polvo se hidrataba con tampón (NaCl/Tes/EDTA: 140 mM/10 mM/0, 1 mM) dando una suspensión bruta de liposomas, que se procesaba ulteriormente en un baño de ultrasonidos a 20ºC. Se ha demostrado la estabilidad química del fármaco en estas formulaciones durante más de dos meses a 4ºC y temperatura ambiente. El pH se especifica dentro del intervalo fisiológico de pH 7-7, 5.

En la Patente U.S. 6.090.955 Rezska et al. describieron la fabricación de liposomas neutros de paclitaxel a partir de fosfatidilcolina de huevo de acuerdo con el método de película. La suspensión bruta de liposomas, pH 7, 2-7, 4, constituida por vesículas de capas múltiples (MLV) se homogeneizaba con un homogeneizador de alta presión. Para almacenamiento a más largo plazo se sugiere formación de gel o liofilización. Sin embargo, no se presentaba dato alguno acerca de la estabilidad, v.g. no se abordaba la estabilidad química del paclitaxel.

Recientemente se ha comunicado que los liposomas catiónicos representan no sólo otra variedad de un sistema con portador liposómico sino que exhiben también un efecto específico de direccionamiento a áreas neoangiogénicas en los vasos sanguíneos [2]. Se han utilizado frecuentemente liposomas catiónicos para el suministro de genes, pero se sabe poco acerca de sus características de formulación para otros compuestos en comparación con los liposomas neutros o aniónicos.

Campbell et al. [3] formularon liposomas de paclitaxel con contenido variable de lípido catiónico, encontrando una estabilidad física incrementada de los liposomas que contenían paclitaxel. Los liposomas se fabricaban de acuerdo con el método de película. La película se hidrataba con agua, que se calentaba a una temperatura de 5-10ºC por encima de la temperatura de transición de fase del fosfolípido respectivo que se utilizaba. La suspensión de liposomas se trataba luego por ultrasonidos en un aparato de ultrasonidos de tipo baño. El diámetro de los liposomas resultantes estaba comprendido en el intervalo de 500-800 nm. Se indicó que la estabilidad física de estos liposomas alcanzaba un máximo de tres días. Las condiciones como temperatura y pH en las que se mantenían estos liposomas no se describían. Sin embargo, una estabilidad de pocos días no es suficiente para una formulación farmacéutica si se aplica para propósitos clínicos.

Otra clase de moléculas altamente lipófilas son las epotilonas, específicamente las epotilonas A y B. Para ambos compuestos, se ha descrito la falta de estabilidad a pH bajo y se atribuye a reacciones de apertura de anillo del resto epóxido catalizadas por ácidos. Esto conduce a productos de reacción que habían perdido sus excepcionales propiedades citotóxicas [9]. La aparente inestabilidad de las epotilonas A y B no permite el desarrollo de formulaciones orales de epotilona A o B, dado que el pH del estómago es aproximadamente 1-3 y degradaría rápidamente la epotilona citostática A o B [10].

Se ha publicado que la semivida en plasma, especialmente de la epotilona B, es extremadamente baja debido a su degradación metabólica por las esterasas [11, 12]. Esto es cierto también para otras epotilonas; en el plasma de murino, se encontró que la semivida aproximada in vitro de la desoxi-epotilona B (epotilona D) es 20 min, y en el plasma humano la semivida era aproximadamente 3 h [13]. Esto no permite una exposición continua de alto nivel del tumor al fármaco y la insatisfactoria actividad antitumoral in vivo de las epotilonas A y B se ha atribuido a su deficiente estabilidad metabólica [12].

Se han descrito composiciones liposómicas de las epotilonas A o B. [WO 01/10412 A1]. En este caso, se hace referencia a la inestabilidad general de estas epotilonas, y se considera esto como una base racional para la carga de liposomas. Sin embargo, no se presenta dato alguno para respaldar que la estabilidad de las epotilonas liposómicas es mayor que la de las epotilonas no liposómicas.

La mayoría de los pasos de preparación para la fabricación de liposomas se realizan en un ambiente acuoso (formación de las vesículas, homogeneización y/o eliminación de componentes indeseables, reconstitución de las formulaciones liofilizadas) . Durante estos pasos, los componentes liposómicos, así como los ingredientes activos que se cargan en la membrana del liposoma son propensos a la degradación.

La estabilidad fisicoquímica de los liposomas que contienen fármacos es un factor limitante para el desarrollo de un producto farmacéutico con una vida útil suficiente para almacenamiento, distribución y aplicación a humanos después de su fabricación.

Un enfoque para aumentar la estabilidad fisicoquímica de los liposomas cargados con fármaco consiste en eliminar cuantitativamente el agua de la suspensión de liposomas. Métodos que se han aplicado con éxito para eliminar el agua de los liposomas son liofilización, secado por pulverización o evaporación. Típicamente, una suspensión de liposomas se fabrica dispersando los compuestos anfifílicos en un entorno acuoso. Inmediatamente después de la fabricación del material acuoso a granel, se deshidrata la suspensión por cualquier método adecuado y se guarda hasta su aplicación en estado desecado. Durante el proceso de secado puede utilizarse un agente estabilizador para mantener la estructura del liposoma. El agua que está asociada usualmente con la superficie polar del liposoma se reemplaza por el agente estabilizador durante el secado para mantener las características fisicoquímicas del liposoma. El fármaco se mantiene cargado o fuertemente asociado en/con la membrana del liposoma. La liberación de los compuestos está bien controlada. En un caso óptimo, el tamaño y la distribución de tamaños del liposoma no se ven afectados por el proceso y los compuestos... [Seguir leyendo]

1. Una preparación de liposomas catiónicos que comprende al menos un lípido catiónico en una cantidad de al menos aproximadamente 30% molar, opcionalmente al menos un compuesto anfifílico adicional en una cantidad de hasta 69, 9% molar, un taxano en una cantidad de al menos 2% molar y un agente estabilizador en una cantidad de 0, 1% (m/v) a 20% (m/v) , caracterizada porque dicha preparación de liposomas es física y químicamente estable en solución acuosa durante al menos 12 horas a 2 hasta 8°C y al menos 4 horas a la temperatura ambiente, y caracterizada por tener un pH de entre 3 y 6, 5.

2. La preparación de la reivindicación 1, en donde el taxano se selecciona de docetaxel o cualquier derivado lipófilo del mismo.

3. La preparación de la reivindicación 1, en donde el taxano se selecciona de paclitaxel o cualquier derivado lipófilo del mismo.

4. La preparación de la reivindicación 1, en donde el taxano es succinil-paclitaxel en una proporción de al menos 3% molar.

5. La preparación de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 que comprende menos de 5% de productos de degradación de dicho compuesto activo.

6. La preparación de la reivindicación 5, que comprende menos de 5% de productos de degradación de paclitaxel, en donde dichos productos de degradación son Bacatina III, o 7-Epi-Taxol.

7. La preparación de las reivindicaciones anteriores que comprende un agente estabilizador en el intervalo de 5% (m/v) a 15% (m/v) .

8. La preparación de las reivindicaciones anteriores de comprende liposomas con un tamaño medio de partícula de 50 nm a 400 nm, con preferencia aproximadamente 100 nm a aproximadamente 300 nm.

9. La preparación de las reivindicaciones anteriores que comprende liposomas que tienen un potencial zeta positivo en solución 0, 05 M de KCl a pH aproximado 7, 5 a la temperatura ambiente.

10. La preparación de las reivindicaciones anteriores caracterizada por tener un pH entre 4 y 6, 5

11. La preparación de las reivindicaciones anteriores que comprende ácido cítrico.

12. Una composición farmacéutica que comprende una preparación de liposomas de una cualquiera de las reivindicaciones 1-11, junto con un portador, diluyente y/o adyuvante farmacéuticamente aceptable.

13. La composición farmacéutica de la reivindicación 12 para uso en el tratamiento de enfermedades asociadas con actividad angiogénica aumentada.

14. El uso de una preparación de las reivindicaciones 1-11 para la fabricación de una composición farmacéutica para el tratamiento de enfermedades asociadas con actividad angiogénica aumentada..

Fig. 1: Diámetro y valores PI de los liposomas para LipoPacTM (Lote GB 100)