sLDLR en la hepatitis vírica.

Uso de un sLDLR (receptor soluble de LDL) para la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o laprevención de una infección del hígado.

sLDLR en la hepatitis vírica.

Campo de la invención La presente invención se refiere al uso terapéutico del receptor soluble de LDL (sLDLR; del inglés, soluble LDL receptor) en la hepatitis vírica, especialmente la infección por el virus de la hepatitis B (HBV; del inglés, hepatitis B virus) .

Antecedentes de la invención El colesterol, un componente de todas las membranas plasmáticas eucarióticas, es esencial para el crecimiento y la viabilidad de las células en los organismos superiores. Sin embargo, unos niveles séricos elevados de colesterol causan enfermedad y muerte al contribuir a la formación de placas ateroscleróticas en las arterias de todo el cuerpo. En los mamíferos, el principal sitio de síntesis de colesterol es el hígado. También se forman cantidades apreciables de colesterol en el intestino. La velocidad de formación de colesterol por estos órganos es muy sensible a la cantidad de colesterol absorbida de fuentes dietéticas. Las células de fuera del hígado y del intestino obtienen colesterol del plasma en lugar de sintetizarlo de novo. El colesterol y otros lípidos son transportados en los fluidos corporales por lipoproteínas, que se clasifican de acuerdo con una densidad creciente. Una lipoproteína es una partícula que consiste en un núcleo de lípidos hidrófobos rodeado de una envoltura de lípidos polares y apoproteínas. Estas lipoproteínas tienen dos funciones: solubilizan lípidos muy hidrófobos y contienen señales que regulan el movimiento de lípidos particulares dentro y fuera de células y tejidos diana específicos. El colesterol es transportado en los fluidos corporales por lipoproteínas de baja densidad (LDL; del inglés, low-density lipoproteins) , que se unen a un receptor específico presente en la membrana plasmática de células no hepáticas. El complejo de receptor-LDL se internaliza luego en las células mediante un mecanismo de transporte conocido como endocitosis mediada por receptor (Goldstein et al., 1979) . El receptor de lipoproteínas de baja densidad (LDL) es el prototipo de una familia de receptores de superficie celular estructuralmente relacionados que median en la endocitosis de múltiples ligandos en células de mamífero.

La secuencia de nucleótidos de un cDNA clonado de 5, 3 kilobases para el receptor de LDL humano reveló cinco dominios estructurales, algunos de los cuales comparten una homología de secuencia con otras proteínas. Su dominio NH2-terminal de unión a ligandos consiste en 322 restos, que incluyen 47 restos de cisteína. Este dominio va seguido de cuatro dominios adicionales: el primero consiste en aproximadamente 350 restos de aminoácido y es homólogo al receptor de EGF, el segundo consiste en 48 restos de aminoácido ricos en azúcares O-enlazados, el tercero es un único dominio transmembranal de 22 restos de aminoácido, y el cuarto es un dominio citoplásmico de 50 restos de aminoácido (Yamamoto et al., 1984) .

A partir del sobrenadante del cultivo de células inducidas con interferón (Fischer et al., 1993) y en fluidos corporales (Fischer et al., 1994) se identificó y aisló una forma soluble del LDLR, sLDLR, que presentaba actividad antiviral. Se han identificado varias proteínas inducidas por interferón que contribuyen a la inducción del estado antivírico por IFNs. Una de dichas proteínas que presentaba actividad antivírica se producía y acumulaba en el sobrenadante del cultivo de células WISH amnióticas humanas. Esta proteína fue purificada hasta homogeneidad y fue identificada como el sLDLR (véanse el Documento EP 0553667 y Fischer et al., 1993) . Se halló que el sLDLR era secretado al medio por células de mamífero que pasan a un estado antivírico en respuesta al interferón. Por contraste con el interferón, el sLDLR no induce un estado antivírico en las células pero es antivírico en sí mismo. Se halló que aparentemente el sLDLR ha de estar presente durante todo el proceso de replicación, maduración y gemación víricas, lo que sugiere que podría estar implicado en un proceso complejo que condujera a la inhibición del la ensambladura o la gemación del virus (datos no publicados) . Se ha mostrado recientemente que la endocitosis del virus de la hepatitis C es mediada por receptores de LDL presentes en células cultivadas (Agnello et al., 1999) .

El daño o la lesión hepáticos pueden tener diversas causas. Se pueden deber, por ejemplo, a infecciones víricas o bacterianas, abuso del alcohol, trastornos inmunológicos o cáncer.

Las hepatitis víricas debidas al virus de la hepatitis B y al virus de la hepatitis C son enfermedades maltratadas que afectan a un gran número de personas de todo el mundo. El número de virus de hepatitis conocidos crece constantemente. Aparte de los virus de las hepatitis B y C, se han descubierto hasta ahora al menos otros cuatro virus, llamados virus de las hepatitis A, D, E y G, que causan hepatitis asociadas a virus.

La lamivudina (3TC) , de nombre comercial Epivir, un tratamiento anti-HIV, ha sido también aprobada para el tratamiento de la hepatitis B. Ciertos estudios han mostrado que el Epivir puede reducir la cantidad de virus de la hepatitis B hasta niveles muy pequeños, aunque este efecto no dura para siempre.

El Adefovir Dipivoxil (ADV) es otro tratamiento contra el HIV del que se ha mostrado que es eficaz en la hepatitis B crónica.

Yamamoto et al., 2006, se dirigen a la caracterización de interacciones de receptores de lipoproteínas de baja densidad y ligandos mediante transferencia de energía por resonancia de fluorescencia.

Yamamoto et al., 2007, describen la unión, específica de isoformas de la apolipoproteína E, al receptor de lipoproteínas de baja densidad.

Compendio de la invención La presente invención se basa en el hallazgo de que el sLDLR es eficaz para el tratamiento y/o la prevención de infecciones hepáticas causadas por el HBV.

Un primer objeto de la presente invención es proporcionar un nuevo medio para tratar y/o prevenir infecciones hepáticas causadas por el HBV. Por lo tanto, la invención se refiere al uso de un sLDLR para la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de la hepatitis vírica causada por el HBV.

Con objeto de aplicar estrategias terapéuticas génicas para suministrar el sLDLR al hígado, otros aspectos de la invención se refieren al uso de vectores de expresión que comprenden la secuencia de codificación de un sLDLR, para uso en el tratamiento y/o la prevención de los estados morbosos. La invención se refiere además al uso de la activación de sLDLRs por genes endógenos y al uso de células genéticamente modificadas para que expresen sLDLRs, para la prevención y/o el tratamiento de la infección hepática causada por el HBV.

Descripción de la invención La presente invención se basa en el hallazgo de un efecto beneficioso de un sLDLR en la hepatitis vírica, en particular en la hepatitis causada por el virus HBV.

De acuerdo con el primer aspecto de la presente invención, se usa el sLDLR para la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de una infección vírica del hígado causada por el HBV.

De acuerdo con la invención, también se utilizan sLDLRs para la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de la hepatitis crónica activa, también llamada hepatitis crónica agresiva. Es una inflamación continua del hígado que daña las células hepáticas. Las causas de la hepatitis crónica activa incluyen la infección vírica y otras. La enfermedad se caracteriza por necrosis o muerte de células hepáticas, inflamación activa, y fibrosis que puede conducir a insuficiencia hepática, cirrosis y muerte. La incidencia es 1 caso por cada 10.000 personas. Son factores de riesgo las enfermedades autoinmunes, una infección previa con hepatitis C, o un antígeno positivo de hepatitis A o hepatitis B durante más de 6 meses.

La hepatitis crónica persistente es una forma benigna y no progresiva de inflamación hepática, y es también una enfermedad abarcada por la expresión "infección hepática" de acuerdo con la presente invención.

Los ejemplos de producción de sustituciones de aminoácidos en proteínas que se pueden utilizar para obtener muteínas de polipéptidos o proteínas sLDLR para uso en la presente invención incluyen cualesquier operaciones de método conocidas, tales como las presentadas en las patentes de EE.UU. RE 33.653, 4.959.314, 4.588.585 y 4.737.462, concedidas a Mark et al.; 5.116.943, concedida a Koths et al.; 4.965.195, concedida a Namen et al.; 4.879.111, concedida a Chong et al.; y 5.017.691, concedida a Lee et al.; y las proteínas con sustitución de lisina presentadas en la patente de EE.UU. nº 4.904.584 (Shaw et al.)... [Seguir leyendo]

1. Uso de un sLDLR (receptor soluble de LDL) para la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de una infección del hígado.

2. El uso de acuerdo con la Reivindicación 1, en donde la infección del hígado es vírica, aguda o crónica.

3. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el sLDLR es sLDLR o una isoforma del mismo, o una proteína fusionada del mismo, o un derivado funcional seleccionado de entre sLDLR con cadenas laterales de polietilenglicol, ésteres alifáticos de los grupos carboxilo, amidas de los grupos carboxilo por reacción con amoníaco o con aminas primarias o secundarias, derivados N-acílicos de grupos amino libres de los restos de aminoácido, formados con componentes acílicos, o derivados O-acílicos de grupos hidroxilo libres, formados con componentes acílicos.

4. El uso de acuerdo con la Reivindicación 3, en donde el sLDLR está PEGilado.

5. El uso de acuerdo con la Reivindicación 3, en donde el sLDLR es una proteína fusionada y comprende todo, o parte de, un sLDLR fusionado con toda, o parte de, una inmunoglobulina.

6. El uso de acuerdo con la Reivindicación 5, en donde la proteína fusionada comprende toda, o parte de, la región constante de una inmunoglobulina.

7. El uso de acuerdo con la Reivindicación 6, en donde la inmunoglobulina es del isotipo IgG1 o IgG2.

8. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el sLDLR se utiliza en una cantidad de aproximadamente 0, 0001 a 10 mg/kg de peso corporal, o de aproximadamente 0, 01 a 5 mg/kg de peso corporal, o de aproximadamente 0, 1 a 3 mg/kg de peso corporal o de aproximadamente 1 a 2 mg/kg de peso corporal.

9. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el sLDLR se usa en una cantidad de aproximadamente 0, 1 a 1000 μg/kg de peso corporal, o de 1 a 100 μg/kg de peso corporal o de aproximadamente 10 a 50 μg/kg de peso corporal.

10. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el sLDLR se administra subcutánea o intramuscularmente.

11. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el sLDLR se administra diariamente o en días alternos.

12. Uso de un vector de expresión que comprende la secuencia de codificación de un sLDLR, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de una infección del hígado.

13. El uso de acuerdo con la Reivindicación 12, para terapia génica.

14. Uso de un vector para inducir y/o potenciar la producción endógena de un sLDLR en una célula, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de una infección del hígado.

15. Uso de una célula que ha sido genéticamente modificada para que produzca un sLDLR, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de una infección del hígado.