Reactivos de peptoide específicos para prión.

Un reactivo de peptoide que tiene una fórmula de:

Xa-(Q)n-Xb



en la que:

cada Q es independientemente un aminoácido o una glicina N-sustituida, y -(Q)n- define una región de peptoide; enla que dicha región de peptoide -(Q)n- comprende SEC ID Nº: 229, 230, 232, 233, 234, 235,236, 237, 238, 239, 240ó 241.

Xa es H, alquilo (C1-C6), cicloalquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heterocicloalquilo, acilo (C1-C6),aminoacilo (C1-6), un aminoácido, un grupo protector de amino, o un polipéptido de 2 a 100 aminoácidos en el que Xaestá opcionalmente sustituido con un resto conjugado que está opcionalmente unido mediante un resto de ligador;Xb es H, alquilo (C1-C6), arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heterocicloalquilo, amino, alquilamino,dialquilamino, hidroxilo, alcoxi (C1-C6), ariloxi, aralcoxi, un grupo protector de carboxi, un aminoácido, o unpolipéptido de 2 a 100 aminoácidos, en el que Xb está opcionalmente sustituido con un resto conjugado que estáopcionalmente unido mediante un resto de ligador.

Reactivos de peptoide específicos para prión

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La invención se refiere a reactivos de peptoide útiles en detectar y aislar priones, y en el tratamiento y prevención de enfermedades relacionadas con priones. La invención también se refiere a complejos y composiciones que comprenden los reactivos de peptoide. También se desvelan procedimientos para preparar los reactivos de peptoide, y kits que los contienen.

ANTECEDENTES

La proteína priónica (PrPC) es una proteína de 33-35 kD de función incierta y, en seres humanos, es transcrita por un gen sobre el brazo corto del cromosoma 20. El núcleo resistente a proteasas de 27-30 kD (prión, proteína de tembladera, o PrPSc) es el componente funcional, con varias isoformas responsables de “enfermedades por priones” que son enfermedades conformacionales de proteínas.

Las enfermedades conformacionales de proteínas se producen a partir de la transición conformacional anómala de una proteína (una proteína de enfermedad conformacional tal como PrPC) , que a su vez conduce a la autoasociación de las formas de proteína anómalas (por ejemplo, PrPSc) produciendo deposición y lesión de tejido. Los priones (PrPSc) tienen una conformación de hoja sustancialmente plegada en vez de la estructura de hélice a de PrPC normal, carecen de ácido nucleico detectable y generalmente no provocan una respuesta inmunitaria. En general, las enfermedades conformacionales de proteínas comparten similitudes sorprendentes en las presentaciones clínicas, normalmente una rápida progresión del diagnóstico a la muerte tras duraciones variables de incubación.

En seres humanos, las enfermedades por priones, también conocidas como “encefalopatías espongiformes transmisibles” (EET) , incluyen, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (ECJ) , síndrome de Gerstmann-Sträussler-Scheinker (GSS) , insomnio familiar letal y kuru (véase, por ejemplo, Isselbacher y col., eds. (1994) . Harrison's Principles of Internal Medicine. Nueva York: McGraw-Hill, Inc.; Medori y col. (1992) N. Engl. J. Med. 326: 444-9) . En animales, las EET incluyen tembladera de las ovejas, encefalopatía espongiforme bovina (EEB) , encefalopatía transmisible del visón y enfermedad debilitante crónica de reno y alce cautivo (Gajdusek, (1990) . Subacute Spongiform Encephalopathies: Transmissible Cerebral Amyloidoses Caused by Unconventional Viruses. En: Virology, Fields, ed., Nueva York: Raven Press, Ltd. (pág. 2289-2324) ) . Las encefalopatías espongiformes transmisibles se caracterizan por los mismos distintivos: la presencia de la conformación anormal (resistente a proteinasa K rica en beta) de la proteína priónica que transmite la enfermedad cuando se inocula experimentalmente en animales de laboratorio que incluyen primates, roedores y ratones transgénicos.

Recientemente, la rápida propagación de EEB y su correlación con elevada manifestación de EET en seres humanos ha conducido a aumentar el interés en la detección de EET en mamíferos no humanos. Las trágicas consecuencias de la transmisión accidental de estas enfermedades (véase, por ejemplo, Gajdusek, Infectious Amyloids, and Prusiner Prions In Fields Virology, Fields, y col., eds. Philadelphia: Lippincott-Ravin, Pub. (1996) ; Brown y col., Lancet, 340: 24-27 (1992) ) , dificultades de descontaminación (Asher y col. (1986) en: Laborator y Safety: Principles and Practices, Miller ed., (pág. 59-71) Am. Soc. Micro.) y la preocupación sobre EEB (British Med.

J. (1995) 311: 1415-1421) son la base de la urgencia de tener tanto una prueba de diagnóstico que identificaría seres humanos y animales con EET como terapias para sujetos infectados.

Los priones se diferencian significativamente de las bacterias, virus y viroides. La hipótesis dominante es que, a diferencia de todos los otros patógenos infecciosos, la infección es producida por una conformación anormal de la proteína priónica, que actúa de molde y convierte conformaciones priónicas normales en conformaciones anómalas anormales. Una proteína priónica se caracterizó por primera vez a principios de los 80 (véase, por ejemplo, Bolton, McKinley y col. (1982) Science 218: 1309-1311; Prusiner, Bolton y col. (1982) Biochemistr y 21: 6942-6950; McKinley, Bolton y col. (1983) Cell 35: 57-62) . Desde entonces se han clonado, secuenciado y expresado genes que codifican la proteína priónica completa en animales transgénicos (véase, por ejemplo, Basler, Oesch y col. (1986) Cell 46: 417-428.)

La característica clave de las enfermedades por priones es la formación de la proteína anormalmente moldeada (PrPSc) de la forma normal de la proteína priónica (celular o no patógena o PrPC) (véase, por ejemplo, Zhang y col. (1997) Biochem. 36 (12) : 3543-3553; Cohen & Prusiner (1998) Ann. Rev. Biochem. 61: 793-819; Pan y col. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:10962-10966; Safar y col. (1993) J Biol. Chem. 268: 20276-20284.) La sustancial estructura de hoja 1 de PrPSc con respecto a las formas de no enfermedad plegadas predominantemente de hélice a de PrPC ha sido revelada por estudios de espectroscopía óptica y cristalografía (véase, por ejemplo, Wille y col. (2001) Proc. Nat'l Acad Sci. USA 99: 3563-3568; Peretz y col. (1997) J. MoI. Biol. 273: 614-622; Cohen & Prusiner, (1999) 5: Structural Studies of Prion Proteins. En Prion Biology And Diseases, S. Prusiner, ed. Cold Spring Harbor, NY: Cold Spring Harbor Laborator y Press, (pág: 191-228) . Los cambios estructurales parecen ir seguidos de alteraciones en las propiedades bioquímicas: PrPC es soluble en detergentes no desnaturalizantes, PrPSc es insoluble; PrPC es fácilmente digerida por proteasas, mientras que PrPSc es parcialmente resistente, produciendo la formación de un fragmento truncado del extremo amino conocido como “PrPres” (Baldwin y col. (1995) ; Cohen & Prusiner (1995) ) , forma “PrP 27-30” (27-30 kDa) o “resistente a PK” (resistente a proteinasa K) . Adicionalmente, la PrPSc puede convertir PrPC en la conformación patógena. Véase, por ejemplo, Kaneko y col. (1995) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 92:11160-11164; Caughey (2003) Br Med Bull. 66: 109 - 20.

La detección de las isoformas patógenas de proteínas de enfermedades conformacionales en sujetos vivos, y muestras obtenidas de sujetos vivos, ha demostrado ser difícil. Por tanto, el diagnóstico definitivo y los tratamientos paliativos para estas afecciones transmisibles y que contienen amiloides antes de la muerte del sujeto sigue siendo un reto sustancialmente sin satisfacer. El examen histopatológico de biopsias de cerebro es arriesgado para el sujeto y lesiones y depósitos amiloides pueden perderse dependiendo de dónde se tome la muestra de biopsia. Por tanto, todavía hay riesgos involucrados con las biopsias para animales, pacientes y personal sanitario. Además, los resultados de pruebas del cerebro en animales no se obtienen normalmente hasta que el animal ha entrado en el suministro de alimentos. Por tanto, normalmente, los anticuerpos generados contra péptidos priónicos reconocen tanto PrPSc desnaturalizado como PrPC, pero no pueden reconocer selectivamente PrPSc infeccioso (sin desnaturalizar) (véase, por ejemplo, Matsunaga y col. (2001) Proteins: Structure, Function and Genetics 44: 110118) .

Están disponibles varias pruebas para EET (véase, Soto, C. (2004) Nature Reviews Microbiol. 2:809, Biffiger y col. (2002) J. Virol. Meth. 101:79; Safar y col. (2002) Nature Biotech. 20:1147, Schaller y col. Acta Neuropathol. (1999) 98:437, Lane y col. (2003) Clin. Chem. 49:1774) . Sin embargo, todas éstas utilizan muestras de tejido de cerebro y sólo son adecuadas como pruebas de autopsia. La mayoría de éstas también requieren tratamiento con proteinasa K de las muestras, que puede requerir tiempo, la digestión incompleta de PrPC puede conducir a resultados positivos falsos, y la digestión de PrPSc sensible a PK puede producir resultados negativos falsos.

Por tanto, sigue existiendo la necesidad de composiciones y procedimientos para detectar la presencia de las proteínas priónicas patógenas en diversas muestras, por ejemplo, en muestras obtenidas de sujetos vivos, en suministros de sangre, en animales de granja y en otros suministros de alimentos humanos y animales. También sigue existiendo una necesidad de procedimientos y composiciones para diagnosticar y tratar enfermedades relacionadas con priones. La presente invención se refiere a éstos, además de a otros fines importantes.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a reactivos de peptoide que interaccionan con una proteína de enfermedad conformacional tal como una proteína priónica, preferencialmente con una forma patógena con respecto a una forma no... [Seguir leyendo]

1. Un reactivo de peptoide que tiene una fórmula de:

Xa- (Q) n-Xb

en la que:

cada Q es independientemente un aminoácido o una glicina N-sustituida, y - (Q) n- define una región de peptoide; en la que dicha región de peptoide - (Q) n- comprende SEC ID Nº: 229, 230, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240 ó 241. Xa es H, alquilo (C1-C6) , cicloalquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heterocicloalquilo, acilo (C1-C6) , aminoacilo (C1-6) , un aminoácido, un grupo protector de amino, o un polipéptido de 2 a 100 aminoácidos en el que Xa está opcionalmente sustituido con un resto conjugado que está opcionalmente unido mediante un resto de ligador; Xb es H, alquilo (C1-C6) , arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heterocicloalquilo, amino, alquilamino, dialquilamino, hidroxilo, alcoxi (C1-C6) , ariloxi, aralcoxi, un grupo protector de carboxi, un aminoácido, o un polipéptido de 2 a 100 aminoácidos, en el que Xb está opcionalmente sustituido con un resto conjugado que está opcionalmente unido mediante un resto de ligador.

2. El reactivo de peptoide de la reivindicación 1, en el que Xb es un aminoácido opcionalmente sustituido con un resto conjugado que está opcionalmente unido mediante un resto de ligador.

3. El reactivo de peptoide de la reivindicación 1, en el que la región de peptoide - (Q) n- es poliiónica a pH de 5, 5 a 8, 5.

4. El reactivo de peptoide de la reivindicación 1, en el que la región de peptoide - (Q) n- tiene una carga neta de al menos 3+ a un pH de 5, 5 a 8, 5.

5. El reactivo de peptoide de la reivindicación 1, en el que la región de peptoide - (Q) n- comprende SEC ID Nº: 230, 237, 238, 239 ó 240

6. El reactivo de peptoide de la reivindicación 1, en el que la región de peptoide - (Q) n- comprende SEC ID Nº: 230, 237, 238, 239 ó 240.

7. El reactivo de peptoide de la reivindicación 1, en el que la región de peptoide - (Q) n- comprende SEC ID Nº: 240.

8. El reactivo de peptoide de la reivindicación 1 que comprende al menos un resto conjugado,

9. El reactivo de peptoide de la reivindicación 8, en el que el resto conjugado está unido mediante un resto de ligador.

10. El reactivo de peptoide de la reivindicación 8, en el que el resto conjugado es un agente de reticulación o un ligante.

11. El reactivo de peptoide de la reivindicación 8, en el que el resto conjugado comprende biotina o un grupo mercapto.

12. Un reactivo de peptoide seleccionado de:

y

13. Un reactivo de peptoide seleccionado de: y

o sales del mismo.

14. Complejo que comprende el reactivo de peptoide de las reivindicaciones 1 ó 12 y un prión patógeno.

15. Una composición que comprende el reactivo de peptoide de las reivindicaciones 1 ó 12 unido a un soporte sólido.

16. Una composición que comprende el reactivo de peptoide de las reivindicaciones 1 ó 12 y una muestra biológica.

17. Un procedimiento de detección de la presencia de un prión patógeno en una muestra que comprende poner en contacto dicha muestra con un primer reactivo de peptoide según las reivindicaciones 1 ó 12 en condiciones que permitan la unión de dicho reactivo de peptoide a dicho prión patógeno, si está presente, para formar un complejo, y detectar la formación de dicho complejo, en el que la formación del complejo es indicativa de la presencia de dicho prión patógeno.

18. Un procedimiento de detección de la presencia de un prión patógeno en una muestra que comprende poner en contacto dicha muestra con un primer reactivo de peptoide según las reivindicaciones 1 ó 12 en condiciones que permitan la unión de dicho primer reactivo de peptoide a dicho prión patógeno, si está presente, para formar un primer complejo, poner en contacto dicho primer complejo con un segundo reactivo de peptoide de la invención, opcionalmente detectablemente marcado, en condiciones que permitan la unión de dicho segundo reactivo de peptoide a dicho prión patógeno de dicho primer complejo para formar un segundo complejo, y detectar la formación de dicho segundo complejo, en el que la formación de dicho segundo complejo es indicativa de la presencia del prión patógeno.

19. Un procedimiento de detección de la presencia de un prión patógeno en una muestra que comprende poner en contacto dicha muestra con un primer reactivo de peptoide según las reivindicaciones 1 ó 12 en condiciones que permitan la unión de dicho primer reactivo de peptoide a dicho prión patógeno, si está presente, para formar un primer complejo, extraer la muestra sin unir de dicho primer complejo, poner en contacto dicho primer complejo con un segundo reactivo de peptoide de la invención, opcionalmente detectablemente marcado, en condiciones que permitan la unión de dicho segundo reactivo de peptoide a dicho prión patógeno de dicho primer complejo para formar un segundo complejo, y detectar la formación de dicho segundo complejo, en el que la formación de dicho segundo complejo es indicativa de la presencia del prión patógeno.

20. Un procedimiento de detección de la presencia de un prión patógeno en una muestra que comprende poner en contacto la muestra con un primer reactivo de peptoide según las reivindicaciones 1 ó 12 en condiciones que permitan la unión de dicho primer reactivo de peptoide a dicho prión patógeno, si está presente, para formar un primer complejo, extraer la muestra sin unir de dicho primer complejo, disociar dicho prión patógeno de dicho primer complejo proporcionando así prión patógeno disociado, poner en contacto dicho prión patógeno disociado con un segundo reactivo de peptoide según la reivindicación 1, opcionalmente detectablemente marcado, en condiciones que permitan la unión de dicho segundo reactivo de peptoide a dicho prión patógeno disociado para formar un segundo complejo, y detectar la formación de dicho segundo complejo, en el que la formación de dicho segundo complejo es indicativa de la presencia del prión patógeno.

21. Un procedimiento de detección de la presencia de un prión patógeno en una muestra que comprende poner en contacto dicha muestra con un primer reactivo de peptoide según las reivindicaciones 1 ó 12 en condiciones que permitan la unión de dicho primer reactivo de peptoide a dicho prión patógeno, si está presente, para formar un primer complejo, poner en contacto dicho primer complejo con un reactivo de unión a prión, opcionalmente detectablemente marcado, en condiciones que permitan la unión de dicho reactivo de unión a prión a dicho prión patógeno de dicho primer complejo para formar un segundo complejo, y detectar la formación de dicho segundo complejo, en el que la formación de dicho segundo complejo es indicativa de la presencia del prión patógeno.

22. Un procedimiento de detección de la presencia de un prión patógeno en una muestra que comprende poner en contacto dicha muestra con un primer reactivo de peptoide según las reivindicaciones 1 ó 12 en condiciones que permitan la unión de dicho primer reactivo de peptoide a dicho prión patógeno, si está presente, para formar un

primer complejo, extraer la muestra sin unir de dicho primer complejo, poner en contacto dicho primer complejo con un reactivo de unión a prión, opcionalmente detectablemente marcado, en condiciones que permitan la unión de dicho reactivo de unión a prión a dicho prión patógeno de dicho primer complejo para formar un segundo complejo, y detectar la formación de dicho segundo complejo, en el que la formación del segundo complejo es indicativa de la presencia del prión patógeno.

23. Un procedimiento de detección de la presencia de un prión patógeno en una muestra que comprende poner en contacto dicha muestra con un primer reactivo de peptoide según las reivindicaciones 1 ó 12 en condiciones que permitan la unión de dicho primer reactivo de peptoide a dicho prión patógeno, si está presente, para formar un primer complejo, extraer la muestra sin unir de dicho primer complejo, disociar dicho prión patógeno de dicho primer complejo proporcionando así prión patógeno disociado, poner en contacto dicho prión patógeno disociado con un reactivo de unión a prión, opcionalmente detectablemente marcado, en condiciones que permitan la unión de dicho reactivo de unión a prión a dicho prión patógeno disociado para formar un segundo complejo, y detectar la formación de dicho segundo complejo, en el que la formación de dicho segundo complejo es indicativa de la presencia de dicho prión patógeno.

24. Un procedimiento de detección de la presencia de un prión patógeno en una muestra que comprende poner en contacto dicha muestra con un primer reactivo de peptoide según las reivindicaciones 1 ó 12 en condiciones que permitan la unión de dicho primer reactivo de peptoide a dicho prión patógeno, si está presente, para formar un primer complejo, extraer la muestra sin unir de dicho primer complejo, disociar dicho prión patógeno de dicho primer complejo proporcionando así prión patógeno disociado, poner en contacto dicho prión patógeno disociado con un reactivo de unión a prión en condiciones que permitan la unión de dicho reactivo de unión a prión a dicho prión patógeno disociado para formar un segundo complejo, y detectar la formación de dicho segundo complejo usando un segundo reactivo de unión a prión, opcionalmente detectablemente marcado, en el que la formación de dicho segundo complejo es indicativa de la presencia del prión patógeno.

25. Un procedimiento de detección de la presencia de un prión patógeno en una muestra, que comprende poner en contacto dicha muestra con un reactivo de unión a prión en condiciones que permitan la unión de dicho reactivo de unión a prión al prión patógeno, si está presente, para formar un primer complejo, extraer la muestra sin unir de dicho primer complejo, poner en contacto dicho primer complejo con un reactivo de peptoide según las reivindicaciones 1 ó 12, opcionalmente detectablemente marcado, en condiciones que permitan la unión de dicho reactivo de peptoide a dicho prión patógeno de dicho primer complejo para formar un segundo complejo, y detectar la formación de dicho segundo complejo, en el que la formación de dicho segundo complejo es indicativa de la presencia de dicho prión patógeno.

26. El procedimiento de las reivindicaciones 21 a 25, en el que dicho reactivo de unión a prión comprende un anticuerpo antipriónico.

27. Un procedimiento de detección de la presencia de un prión patógeno en una muestra que comprende: poner en contacto dicha muestra con un primer reactivo de peptoide según las reivindicaciones 1 ó 12 en condiciones que permitan la unión de dicho primer reactivo de peptoide a dicho prión patógeno, si está presente, para formar un complejo, extraer la muestra sin unir de dicho complejo, disociar dicho prión patógeno de dicho complejo proporcionando así prión patógeno disociado, poner en contacto dicho prión patógeno disociado con un segundo soporte sólido en condiciones que permitan que dicho prión patógeno disociado se adhiera a dicho segundo soporte sólido; y detectar el prión patógeno disociado adherido usando un reactivo de unión a prión, opcionalmente detectablemente marcado, en el que la unión de dicho reactivo de unión a prión indica la presencia de dicho prión patógeno.

28. El procedimiento de la reivindicación 27, en el que dicha disociación se lleva a cabo exponiendo dicho complejo a pH 12 o por encima o pH 2 o por debajo.

29. El procedimiento de la reivindicación 28 que comprende además la etapa de neutralizar dicho pH después de dicha disociación.

30. El procedimiento de la reivindicación 27, en el que dicho prión patógeno disociado está desnaturalizado.

31. El procedimiento de la reivindicación 27, en el que dicho reactivo de unión a prión comprende un anticuerpo antipriónico.

32. Un procedimiento de detección de la presencia de un prión patógeno en una muestra que comprende: poner en contacto dicha muestra con un primer reactivo de peptoide según las reivindicaciones 1 ó 12 en condiciones que permitan la unión de dicho primer reactivo de peptoide a dicho prión patógeno, si está presente, para formar un primer complejo, extraer la muestra sin unir de dicho primer complejo, disociar dicho prión patógeno de dicho primer complejo proporcionando así prión patógeno disociado, poner en contacto dicho prión patógeno disociado con un segundo soporte sólido, en el que dicho segundo soporte sólido comprende un primer anticuerpo antipriónico, en condiciones que permitan que dicho prión patógeno disociado se una a dicho primer anticuerpo antipriónico para

formar un segundo complejo; y detectar dicho prión patógeno disociado de dicho segundo complejo con un segundo anticuerpo antipriónico, opcionalmente detectablemente marcado, en el que la unión de dicho segundo anticuerpo antipriónico indica la presencia de dicho prión patógeno.

33. El procedimiento de la reivindicación 32, en el que dicha disociación se lleva a cabo exponiendo dicho primer complejo a pH 12 o por encima o pH 2 o por debajo.

34. El procedimiento de la reivindicación 33 que comprende además la etapa de neutralizar dicho pH después de dicha disociación.

35. El procedimiento de la reivindicación 32, en el que dicho prión patógeno disociado está desnaturalizado.

36. El procedimiento de la reivindicación 32, en el que dicho primer reactivo de unión a prión comprende un anticuerpo antipriónico.

37. El procedimiento de la reivindicación 32, en el que el segundo reactivo de unión a prión comprende un anticuerpo antipriónico.

38. Un reactivo de peptoide de las reivindicaciones 1 ó 12, en el que dicho reactivo de peptoide está ligado a un agente de obtención de imágenes para su uso en un procedimiento de determinación de una localización de una infección por enfermedad relacionada con priones en un animal que comprende:

(a) administrar dicho reactivo de peptoide a dicho animal; y

(b) detectar dicho agente de obtención de imágenes, en el que la detección de dicho agente de obtención de imágenes determina la localización de dicha infección.

39. Un procedimiento para aislar un prión patógeno de una muestra que comprende:

(a) poner en contacto un soporte sólido que comprende un reactivo de peptoide de las reivindicaciones 1 ó 12 con dicha muestra en condiciones que permitan la unión de dicho prión patógeno, si está presente en la muestra, a dicho reactivo de peptoide para formar un complejo; y

(b) extraer la muestra sin unir de dicho complejo, proporcionando así prión patógeno aislado.

40. Un procedimiento para reducir la cantidad del prión patógeno en una muestra que comprende:

(a) poner en contacto soporte sólido que comprende un reactivo de peptoide de las reivindicaciones 1 ó 12 con dicha muestra en condiciones que permitan la unión de dicho prión patógeno, si está presente en dicha muestra, con dicho reactivo de peptoide de dicho soporte sólido para formar un complejo; y

(b) separar muestra sin unir de dicho complejo, proporcionando así dicha muestra con una cantidad reducida del prión patógeno.

41. Un procedimiento de preparación de un suministro de sangre que está sustancialmente libre de un prión patógeno que comprende:

(a) detectar la presencia o ausencia de prión patógeno en una pluralidad de muestras de sangre, en el que dicha detección implica unir dicho prión patógeno, si está presente, a un reactivo de peptoide de las reivindicaciones 1 ó 12; y

(b) combinar dichas muestras en las que el prión patógeno no se detecta, proporcionando así el suministro de sangre que está sustancialmente libre del prión patógeno.

42. Un procedimiento de preparación de un suministro de alimentos que está sustancialmente libre de un prión patógeno que comprende:

(a) detectar la presencia o ausencia de prión patógeno en una pluralidad de muestras de alimentos, en el que dicha detección implica unir dicho prión patógeno, si está presente, a un reactivo de peptoide de las reivindicaciones 1 ó 12; y

(b) combinar dichas muestras en las que el prión patógeno no se detecta, proporcionando así dicho aporte de alimento que está sustancialmente libre del prión patógeno.