Productos autoesterilizantes.

Uso de un producto polimérico que comprende un polímero unido,

directamente o mediante un espaciador, a un derivado de ftalocianina de fórmula general (I) **Fórmula**

en la que

M está seleccionado de 2H y un metal seleccionado del grupo constituido por Zn, Si(OR')2, Ge(OR')2 y AIOR' en las que R' está seleccionado de H y grupos alquilo que tienen de 1 a 15 átomos de carbono;R está seleccionado de H, grupos que comprenden al menos un sustituyente amonio cuaternario, grupos que comprenden al menos un sustituyente amino alifático y grupo seleccionados de: -COOH, -SH, -NH2, -CO-CH2-Br, -SO2Cl, maleimida, hidracina, fenol, imidato, biotina, posiblemente unidos al núcleo deftalocianina mediante un espaciador adecuado (X)p-W en la que X y p son como se han definido anteriormente y W está seleccionado de alquilo C1-C10, arilo y aril C1-C5-alquilo;

R1, igual o diferente de R, está seleccionado de H, grupos que comprenden al menos un sustituyente aminoalifático y grupos que comprenden al menos un sustituyente amonio cuaternario;

R2 y R3, iguales o diferentes entre sí, están seleccionados de H, grupos alcoxi que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, grupos tioalcoxi que tienen de 1 a 10 átomos de carbono, grupos que comprenden al menos un sustituyente amino alifático y grupos que comprenden al menos un sustituyente amonio cuaternario,con la condición de que:

a) al menos uno de R, R1, R2 y R3 sea un grupo que comprende al menos un sustituyente amino alifático o un grupo que comprende al menos un sustituyente amonio cuaternario y, si R, R1, R2 y R3 son grupos que comprenden al menos un sustituyente amino alifático o grupos que comprenden al menos un sustituyenteamonio cuaternario, o R y R2 son grupos que comprenden al menos un sustituyente amino alifático o grupos que comprenden al menos un sustituyente amonio cuaternario y R1 y R3 son H, dichos grupos que comprenden al menos un sustituyente amino alifático o dichos grupos que comprenden al menos un sustituyente amonio cuaternario son los mismos;

b) si R y R1 son ambos diferentes de H, están en las posiciones 1,4 ó 2,3, mientras que si solo uno de R y R1 es diferente de H, está en la posición 1 ó 2;

c) si R2 y R3 son ambos diferentes de H, están en las posiciones 8, 11, 15, 18, 22, 25 ó 9, 10, 16, 17, 23, 24,mientras que si solo uno de R2 y R3 es diferente de H, está en la posiciones 8(11), 15(18), 22(25) o en las posiciones 9(10), 16(17), 23(24), caracterizado por que dicho polímero es un polímero insoluble en agua yen fluidos biológicos, posiblemente mezclado con o recubierto con un polímero soluble en agua o en fluidosbiológicospara la producción o el recubrimiento de artículos o dispositivos industriales y médicos autoesterilizantes.

Productos autoesterilizantes Campo de la invención [0001] La invención se refiere al campo de los derivados de ftalocianina, y en particular a nuevos productos que tienen propiedades autoesterilizantes en los que los derivados de ftalocianina de fórmula general (I) , facilitados en lo sucesivo, están unidos a polímeros.

Estado de la técnica

En los seres humanos, muchas infecciones se transmiten por contacto. Esto es particularmente cierto para infecciones conectadas al uso de dispositivos médicos tales como catéteres, implantes, lentes de contacto de plástico y similares. De hecho, en casi todos los casos, los microorganismos responsables de estas infecciones, que han crecido sobre los materiales xenogénicos del dispositivo, son particularmente virulentos y resistentes a la inactivación por tratamientos convencionales y por antibióticos en el uso actual.

Se sabe generalmente que se ha desarrollado resistencia a antibióticos en un número cada vez mayor de microorganismos, que está preocupando tanto a la profesión médica como a la población. Además, hay implicaciones en cuanto a si pueden desarrollarse o no rápidamente y eficazmente nuevos antibióticos para prevenir posibles problemas en el futuro. Como se sabe, el desarrollo de nuevos antibióticos es un procedimiento muy caro y largo durante el cual los microorganismos se vuelven cada vez más resistentes bajo presión evolutiva en presencia de nuevos antibióticos basados en mecanismos de acción conocidos. Por tanto, hay investigaciones en curso sobre nuevos principios activos y procedimientos alternativos capaces de erradicar los agentes microbianos causales.

Para la esterilización de artículos y dispositivos médicos, procedimientos conocidos incluyen una variedad de tratamientos tales como tratamiento con sustancias citotóxicas en forma gaseosa o como disoluciones, exposición a radiación de alta energía y tratamientos térmicos. Desafortunadamente, el nivel de esterilización logrado en estos casos solo es temporal y debe renovarse por tratamientos repetidos tanto durante como después del uso de los dispositivos. En otras palabras, la esterilización proporcionada mediante procedimientos conocidos no es permanente y el material, después del uso inicial, debe someterse a un nuevo ciclo de esterilización antes de poder reutilizarse.

En conclusión, sería de gran interés proveer materiales que tuvieran por sí mismos una acción bactericida y esterilizante adecuada para la producción de artículos y dispositivos utilizables en el campo médico o en cualquier otro campo en el que se requiera esterilización a largo plazo de las superficies de artículos y dispositivos, y que puedan ejercer una acción sostenida.

Resumen de la invención [0006] El solicitante ha encontrado ahora sorprendentemente que los derivados de ftalocianina de fórmula general (I) facilitados en lo sucesivo, que tienen actividad antimicrobiana, pueden inmovilizarse sobre la superficie de polímeros, a la vez que se mantiene su actividad antimicrobiana. Por tanto, es objeto de la invención el uso de un 45 producto polimérico que comprende un polímero unido a un derivado de ftalocianina de fórmula general (I)

en la que M está seleccionado de 2H y un metal seleccionado del grupo constituido por Zn, Si (OR') 2, Ge (OR') 2 y AIOR' en las que R' está seleccionado de H y grupos alquilo que tienen de 1 a 15 átomos de carbono. R está seleccionado de H, grupos que comprenden al menos un sustituyente amonio cuaternario, grupos que comprenden al menos un sustituyente amino alifático y grupos como se definen en la reivindicación 1.

R1, igual o diferente de R, está seleccionado de H, grupos que comprenden al menos un sustituyente amino alifático y grupos que comprenden al menos un sustituyente amonio cuaternario, R2 y R3, iguales o diferentes entre sí, están seleccionados de H, grupos alcoxi que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, grupos tioalcoxi que tienen de 1 a 10 átomos de carbono, grupos que comprenden al menos un sustituyente amino alifático y grupos que comprenden al menos un sustituyente amonio cuaternario,

con la condición de que:

a) al menos uno de R, R1, R2 y R3 sea un grupo que comprende al menos un sustituyente amino alifático o un grupo que comprende al menos un sustituyente amonio cuaternario y, si R, R1, R2 y R3 son grupos que comprenden al menos un sustituyente amino alifático o grupos que comprenden al menos un sustituyente amonio cuaternario, o R y R2 son grupos que comprenden al menos un sustituyente amino alifático o grupos que comprenden al menos un sustituyente amonio cuaternario y R1 y R3 son H, dichos grupos que comprenden al menos un sustituyente amino alifático o dichos grupos que comprenden al menos un sustituyente amonio cuaternario son los mismos; b) si R y R1 son ambos diferentes de H, están en las posiciones 1, 4 ó 2, 3, mientras que si solo uno de R y R1 es diferente de H, está en la posición 1 ó 2; c) si R2 y R3 son ambos diferentes de H, están en las posiciones 8, 11, 15, 18, 22, 25 ó 9, 10, 16, 17, 23, 24, mientras que si solo uno de R2 y R3 es diferente de H, está en la posiciones 8 (11) , 15 (18) , 22 (25) o en las posiciones 9 (10) , 16 (17) , 23 (24) , caracterizado por que dicho polímero es insoluble en agua y en fluidos biológicos, posiblemente mezclado o recubierto con un polímero soluble: en agua o en fluidos biológicos para la producción o recubrimiento de artículos o dispositivos industriales y médicos autoesterilizantes.

Otros objetos de la invención también son un procedimiento de preparación del producto polimérico anteriormente dicho, su uso para la producción o recubrimiento de artículos o dispositivos industriales y médicos autoesterilizantes, además de dichos artículos y dispositivos que tienen al menos una superficie que comprende el producto polimérico anteriormente dicho.

Las características y ventajas de la invención se ilustrarán en detalle en la siguiente descripción.

Breve descripción de las figuras

Figura 1: concentración (μM) del Compuesto 9 recuperado después de la desorción con DMF frente a la concentración (mM) en la disolución para preparar el recubrimiento, como en el Ejemplo 13.

Descripción detallada de la invención [0010] Los derivados de ftalocianina son conocidos como moléculas fotosensibilizantes útiles en la muy conocida terapia fotodinámica (o “PDT”) para el tratamiento de tanto tumores como infecciones microbianas. Las ftalocianinas se conocen de hecho desde hace tiempo como compuestos capaces de localizarse en especies eucariotas o procariotas vivas, y absorber luz para producir especies reactivas de oxígeno (ROS) , en particular radicales y oxígeno singlete, destruyendo así células que participan en el proceso fotodinámico (Ben-Hur E. y col. En Int. J Radiat. Biol., vol 47, pág. 145-147, 1985) .

Ejemplos de derivados de ftalocianina preparados por el solicitante se describen en la patente de EE.UU. nº 5.965.598. Estos productos se usan para preparar composiciones farmacéuticas útiles en el tratamiento de infecciones microbianas, en forma de disoluciones para administración parenteral o en forma de cremas, geles, pomadas y lociones para administración tópica, pero hasta la fecha nunca se habían usado unidos a, o combinados con, polímeros adecuados para la producción de artículos y dispositivos. Las características del macrociclo y la presencia de los sustituyentes influyen fuertemente en la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) y, por tanto, en su capacidad para inducir inactivación microbiana.

La producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) también depende fuertemente del entorno en el que se encuentra la ftalocianina. En particular, cuanto mayor sea la concentración y, por tanto, la agregación de ftalocianina en disolución, menos eficaz será en su acción en el proceso fotosensibilizante. También se ha observado un efecto negativo sobre su efecto fotosensibilizante cuando los sustituyentes sobre los núcleos de ftalocianina tienen movilidad reducida, por ejemplo, debido a impedimento estérico. Sorprendentemente, usando los derivados de ftalocianina de la invención y los procedimientos de preparación, el solicitante ha encontrado que su actividad antimicrobiana, mediada por la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) , todavía es eficaz después de la inmovilización de los derivados de ftalocianina sobre la superficie del polímero. En particular, el solicitante ha observado que, cuando se “modifica” por las presentes ftalocianinas de fórmula general (I) , la superficie del polímero en contacto con los microorganismos se vuelve autoesterilizante.

Los presentes productos poliméricos también... [Seguir leyendo]

1. Uso de un producto polimérico que comprende un polímero unido, directamente o mediante un espaciador, a un derivado de ftalocianina de fórmula general (I)

en la que M está seleccionado de 2H y un metal seleccionado del grupo constituido por Zn, Si (OR') 2, Ge (OR') 2 y AIOR' en las que R' está seleccionado de H y grupos alquilo que tienen de 1 a 15 átomos de carbono; R está seleccionado de H, grupos que comprenden al menos un sustituyente amonio cuaternario, grupos que comprenden al menos un sustituyente amino alifático y grupo seleccionados de: -COOH, -SH, -NH2, -CO-CH2-Br, -SO2Cl, maleimida, hidracina, fenol, imidato, biotina, posiblemente unidos al núcleo de ftalocianina mediante un espaciador adecuado (X) p-W en la que X y p son como se han definido anteriormente y W está seleccionado de alquilo C1-C10, arilo y aril C1-C5-alquilo; R1, igual o diferente de R, está seleccionado de H, grupos que comprenden al menos un sustituyente amino alifático y grupos que comprenden al menos un sustituyente amonio cuaternario; R2 y R3, iguales o diferentes entre sí, están seleccionados de H, grupos alcoxi que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, grupos tioalcoxi que tienen de 1 a 10 átomos de carbono, grupos que comprenden al menos un sustituyente amino alifático y grupos que comprenden al menos un sustituyente amonio cuaternario,

con la condición de que:

a) al menos uno de R, R1, R2 y R3 sea un grupo que comprende al menos un sustituyente amino alifático o un grupo que comprende al menos un sustituyente amonio cuaternario y, si R, R1, R2 y R3 son grupos que comprenden al menos un sustituyente amino alifático o grupos que comprenden al menos un sustituyente amonio cuaternario, o R y R2 son grupos que comprenden al menos un sustituyente amino alifático o grupos que comprenden al menos un sustituyente amonio cuaternario y R1 y R3 son H, dichos grupos que comprenden al menos un sustituyente amino alifático o dichos grupos que comprenden al menos un sustituyente amonio cuaternario son los mismos; b) si R y R1 son ambos diferentes de H, están en las posiciones 1, 4 ó 2, 3, mientras que si solo uno de R y R1 es diferente de H, está en la posición 1 ó 2; c) si R2 y R3 son ambos diferentes de H, están en las posiciones 8, 11, 15, 18, 22, 25 ó 9, 10, 16, 17, 23, 24, mientras que si solo uno de R2 y R3 es diferente de H, está en la posiciones 8 (11) , 15 (18) , 22 (25) o en las posiciones 9 (10) , 16 (17) , 23 (24) , caracterizado por que dicho polímero es un polímero insoluble en agua y en fluidos biológicos, posiblemente mezclado con o recubierto con un polímero soluble en agua o en fluidos biológicos para la producción o el recubrimiento de artículos o dispositivos industriales y médicos autoesterilizantes.

2. Uso según la reivindicación 1, en el que dicho polímero insoluble está seleccionado del grupo constituido por algodón, viscosa, poliestireno, polietileno, polipropileno, poliacrilamida, poliamida, poli (alcohol vinílico) , polisacáridos, ésteres de celulosa tales como acetato de celulosa, derivados de silicona y mezclas de los mismos.

3. Uso según las reivindicaciones 1 y 2, en el que dicho polímero soluble está seleccionado del grupo constituido por dextranos y sus derivados, proteínas y sus derivados metilados, e hidrolizados de proteína.

4. Uso según la reivindicación 1, en el que dicho grupo que comprende al menos un sustituyente amonio cuaternario

o un sustituyente amino alifático es un grupo (X) pR4 en la que X está seleccionado del grupo constituido por O, -CH2, CO, S, SO y -NR5 en la que R5 está seleccionado de H y alquilo C1-C15; y R4 es en la que Y está seleccionado del grupo constituido por alquilo C1-C10 y fenilo, posiblemente sustituido, o Y forma con el

grupo Z al que está unido un heterociclo saturado o insaturado, posiblemente sustituido, que puede comprender hasta 2 heteroátomos seleccionados del grupo constituido por N, O y S; Z está seleccionado del grupo constituido por -N, -CH2N y -CONHCH2CH2N; R6 y R7, iguales o diferentes entre sí, están seleccionados del grupo constituido por alquilo C1-C15 y fenilo, o forman con el grupo Z al que están unidos un heterociclo saturado o insaturado, posiblemente sustituido, que puede comprender hasta dos heteroátomos seleccionados del grupo constituido por N, O y S; R8 y R9, iguales o diferentes entre sí, están seleccionados del grupo constituido por H, alquilo C1-C15 y fenilo, y grupos R10COOEt o R10COOMe en los que R10 es alquilo C1-C15; m, n, p, w, t y u son, independientemente entre sí, 0 ó 1; y v es un número entero entre 1 y 3,

con la condición de que solo uno de n, w, t y u sea simultáneamente 0.

5. Uso según la reivindicación 1, en el que dicho grupo que comprende al menos un sustituyente amonio cuaternario está seleccionado de los siguientes grupos: 25 6. Uso según la reivindicación 1, en el que dicho grupo que comprende al menos un sustituyente amonio cuaternario está seleccionado de los siguientes grupos:

7. Uso según la reivindicación 1, en el que dicho grupo que comprende al menos un sustituyente amino alifático está seleccionado de los siguientes grupos:

8. Uso según la reivindicación 1, en el que dicho grupo que comprende al menos un sustituyente amino alifático está seleccionado de los siguientes grupos:

9. Uso según la reivindicación 1, en el que en el derivado de ftalocianina de fórmula (I) M es Zn.

10. Uso según la reivindicación 1, en el que dicho heterociclo saturado o insaturado está seleccionado del grupo constituido por morfolina, piperidina, piridina, pirimidina, piperazina, pirrolidina, pirrolina, imidazol y julolidina.

11. Uso según la reivindicación 1, en el que si R es un grupo seleccionado de:-COOH, -SH, -NH2, -CO-CH2-Br, -SO2Cl, maleimida, hidracina, fenol, imidato, biotina, posiblemente unido al núcleo de ftalocianina mediante un espaciador adecuado (X) p-W en la que X y p son como se han definido anteriormente y W está seleccionado de alquilo C1-C10, arilo y aril C1-C5-alquilo; R1 es igual a H y R2 y R3 están seleccionados de H, grupos que comprenden al menos un sustituyente amino alifático y grupos que comprenden al menos un sustituyente amonio cuaternario, a condición de que al menos uno de R2 y R3 sea diferente de H.

12. Uso según la reivindicación 1, en el que dicho derivado de ftalocianina de fórmula general (I) está seleccionado entre los siguientes compuestos:

- Diyoduro del derivado de ftalocianina de fórmula (I) en la que M es Zn, R1 = R2 = R3 = H y R = 1, 3-bis (trimetilamonio) -2-propiloxi en la posición 2 [Compuesto 1]

- Derivado de ftalocianina de fórmula (I) en la que M es Zn, R1 = R2 = R3 = H y R = 1, 3-bis- (dimetilamino) -2propiloxi en la posición 2 [Compuesto 1bis];

- Octayoduro del derivado de ftalocianina de fórmula (I) en la que M es Zn, R1 = R2 = H y R = R3 = 1, 3-bis (dimetil-etilacetato-amonio) -2-propiloxi en las posiciones 2, 9 (10) , 16 (17) , 23 (24) [Compuesto 2]

- Derivado de ftalocianina de fórmula (I) en la que M es Zn, R1 = R2 = H y R = R3 = 1, 3-bis- (dimetilamino) -2propiloxi en las posiciones 2, 9 (10) , 16 (17) , 23 (24) [Compuesto 2bis]

- Diyoduro del derivado de ftalocianina de fórmula (I) en la que M es Zn, R1 = R2 = R3 = H y R = 1, 3-bis (dimetil-etilacetato-amonio) -2-propiloxi en la posición 2 [Compuesto 3]

- Octayoduro del derivado de ftalocianina de fórmula (I) en la que M es Zn, R1 = R2 = H y R = R3 = 1, 3-bis (dimetil- (2-hidroxicarbonil) etil-amonio) -2-propiloxi en las posiciones 2, 9 (10) , 16 (17) , 23 (24) [Compuesto 4]

- Diyoduro del derivado de ftalocianina de fórmula (I) en la que M es Zn, R1 = R2 = R3 = H y R = 1, 3-bis (dimetil- (2-hidroxicarbonil) etil-amonio) -2-propiloxi en la posición 2 [Compuesto 5]

- Triyoduro del derivado de ftalocianina de fórmula (I) en la que M es Zn, R1 = R3 = H, R = 4hidroxicarbonilfenoxi en la posición 2 y R2 = [3- (N, N, N-trimetilamonio) fenoxi] en las posiciones 9 (10) , 16 (17) , 23 (24) [Compuesto 6]

- Triyoduro del derivado de ftalocianina de fórmula (I) en la que M es Zn, R1 = R3 = H, R = 4hidroxicarbonilfenoxi en la posición 2 y R2 = [3- (N, N, N-trimetilamonio) fenoxi] yoduro en las posiciones 8 (11) , 15 (18) , 22 (25) [Compuesto 7]

- Tetrayoduro del derivado de ftalocianina de fórmula (I) en la que M es Zn, R1 = R3 = H, R = R2 = [3- (N, N, Ntrimetilamonio) fenoxi] en las posiciones 2, 9 (10) , 16 (17) , 23 (24) [Compuesto 8]

- Derivado de ftalocianina de fórmula (I) en la que M es Zn, R1 = R3 = H, R = R2 = [3- (N, Ndimetilamino) fenoxi] en las posiciones 2, 9 (10) , 16 (17) , 23 (24) [Compuesto 8bis]

- Tetracloruro del derivado de ftalocianina de fórmula (I) en la que M es Zn, R1 = R3 = H, R = R2 = [3- (N, N, Ntrimetilamonio) fenoxi] en las posiciones 1, 8 (11) , 15 (18) , 22 (25) [Compuesto 9]

- Derivado de ftalocianina de fórmula (I) en la que M es Zn, R1 = R3 = H, R = R2 = [3- (N, Ndimetilamino) fenoxi] en las posiciones 1, 8 (11) , 15 (18) , 22 (25) [Compuesto 9bis]

- Tetracloruro del derivado de ftalocianina de fórmula (I) en la que M es Zn, R1 = R3 = H, R = R2 = [4- (N, N, Ntrimetilamonio) fenoxi] en las posiciones 1, 8 (11) , 15 (18) , 22 (25) [Compuesto 10]

- Derivado de ftalocianina de fórmula (I) en la que M es Zn, R1 = R3 = H, R = R2 = [4- (N, Ndimetilamino) fenoxi] en las posiciones 1, 8 (11) , 15 (18) , 22 (25) [Compuesto 10bis]

- Octacloruro de derivado de ftalocianina de fórmula (I) en la que M es Zn, R = R1 = R2 = R3 = [3- (N, N, Ntrimetilamonio) fenoxi] en las posiciones 2, 3, 9, 10, 16, 17, 23, 24 [Compuesto 11]

- Derivado de ftalocianina de fórmula (I) en la que M es Zn, R = R1 = R2 = R3 = [3- (N, N-dimetilamino) fenoxi] en las posiciones 2, 3, 9, 10, 16, 17, 23, 24 [Compuesto 11bis]

- Octacloruro del derivado de ftalocianina de fórmula (I) en la que M es Zn, R = R1 = R2 = R3 = [3- (N, N, Nmetildietilamonio) fenoxi] en las posiciones 2, 3, 9, 10, 16, 17, 23, 24 [Compuesto 12]

- Derivado de ftalocianina de fórmula (I) en la que M es Zn, R = R1 = R2 = R3 = [3- (N, N-dietilamino) fenoxi] en las posiciones 2, 3, 9, 10, 16, 17, 23, 24 [Compuesto 12bis]

13. Uso según la reivindicación 1, en el que dicho espaciador procede del enlace de dicho derivado de ftalocianina y dicho polímero por un agente bifuncional adecuado seleccionado del grupo constituido por carbodiimidas, glutaraldehído, clorotriazina de 1, 1'-carbonildiimidazol, bromuro de cianógeno, anhídridos mixtos, imidoésteres y derivados de maleimido.

14. Artículos o dispositivos médicos autoesterilizantes que comprenden el producto polimérico como se define en las 5 reivindicaciones 1-13, posiblemente en combinación con una o más sustancias farmacéuticamente activas.

15. Artículos o dispositivos médicos autoesterilizantes que tienen al menos una superficie recubierta con el producto polimérico como se define en las reivindicaciones 1-13.

16. Artículos o dispositivos médicos autoesterilizantes según la reivindicación 14 ó 15, seleccionados del grupo constituido por catéteres, tubos guía, sondas, válvulas cardíacas, prótesis para tejidos blandos, prótesis de origen animal, tendones artificiales, sustituciones de hueso y cardiovasculares, lentes de contacto, oxigenadores de la sangre, riñones artificiales, corazones, páncreas e hígados, bolsas de sangre, jeringuillas, instrumentos quirúrgicos, sistemas de filtro, instrumentos de laboratorio, recipientes para cultivos y para regeneración celular y tisular,

soportes para péptidos, proteínas y anticuerpos, adyuvantes clínicos para uso doméstico y hospitalario, recipientes e instrumentos para uso cosmético.

17. Derivados de ftalocianina de fórmula (I) seleccionados de:

- octayoduro del derivado de ftalocianina de fórmula (I) en la que M es Zn, R1 = R2 = H y R = R3 = 1, 3-bis (dimetil-etilacetato-amonio) -2-propiloxi en las posiciones 2, 9 (10) , 16 (17) , 23 (24) ; y

- diyoduro del derivado de ftalocianina de fórmula (I) en la que M es Zn, R1 = R2 = R3 = H y R = 1, 3-bis (dimetil-etilacetato-amonio) -2-propiloxi en la posición 2.