Producto inmunogénico estable que comprende unos heterocomplejos antigénicos.

Producto inmunogénico estable para la inducción de anticuerpos contra una o varias proteínas antigénicas en unsujeto,

caracterizado porque consiste en unos heterocomplejos inmunogénicos proteicos constituidos porasociaciones entre (i) unas moléculas de proteínas antigénicas y (ii) unas moléculas proteicas portadoras, porquepor lo menos el 1 por ciento y porque menos del 40 por ciento de las proteínas antigénicas (i) están unidas con lasmoléculas proteicas portadoras (ii) por un enlace covalente, y porque la o las proteínas antigénicas (i) consisten enunas citoquinas producidas naturalmente por dicho sujeto.

Producto inmunogénico estable que comprende unos heterocomplejos antigénicos.

Campo de la invención La presente invención se refiere a unos productos inmunogénicos estables que comprenden unos heterocomplejos proteicos inmunogénicos para la obtención de una respuesta inmunitaria humoral con producción de anticuerpos específicos dirigidos contra uno o varios antígenos, en particular contra a un antígeno "propio", así como a su utilización en el campo de las vacunas.

Técnica anterior

La obtención de una respuesta de anticuerpos de alto nivel contra un antígeno dado, en un individuo, es un objetivo buscado habitualmente, ya sea dicho antígeno un antígeno "extraño" o un antígeno "propio".

Sin embargo, el problema de un buen reconocimiento del antígeno contra el cual se busca una respuesta de anticuerpos, en un individuo, debe ser resuelto en algunos números de casos, en particular (a) cuando el antígeno de interés se comporta como un "hapteno", es decir una estructura química de baja masa molecular que es poco o nada inmunogénica en forma libre, pero que, una vez fijada sobre una molécula de alta masa molecular, es capaz de inducir la producción de anticuerpos específicos de este hapteno, y (b) cuando el antígeno de interés es una proteína propia, es decir una proteína producida naturalmente en el individuo, para la cual existe una tolerancia inmunitaria debida a la supresión de los clones de linfocitos T correspondientes, durante el desarrollo del sistema inmunitario.

Con el fin de provocar, o de aumentar, el reconocimiento de un antígeno de interés por las células B, se han realizado diversas construcciones inmunogénicas en el estado de la técnica.

Una primera forma de estas construcciones inmunogénicas consiste en un acoplamiento covalente del antígeno de interés en una molécula portadora, aportando la molécula portadora unas estructuras reconocidas por los linfocitos T auxiliares (células "T helper") en asociación con unas moléculas de clase II del Complejo Mayor de Histocompatibilidad (CMH) , y que activan los linfocitos T auxiliares que producen entonces diversas citoquinas, entre ellas las IL-2, citoquinas que activarán a su vez los clones de células 8 específicas del antígeno de interés. Las células B específicas del antígeno de interés, una vez activadas, se multiplicarán y producirán unos anticuerpos específicos del antígeno de interés, que es el objetivo que se busca. En general, este tipo de construcciones inmunogénicas consiste en productos de acoplamiento químico covalente entre el antígeno de interés y la molécula portadora, los cuales, después de una etapa de purificación y eliminación de los productos no acoplados, son unos productos finales de estructura química bien definida.

La primera forma de una construcción inmunogénica anterior está por ejemplo ilustrada por el artículo de Richard et al., que describe la preparación de productos de acoplamiento covalente entre la IL-9 y la ovalbúmina (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 97 (2) : 767-772) . Está también ilustrada en la patente americana no US 6, 340, 461 (Terman) , que describe unos productos de acoplamiento entre una o varias copias de un antígeno de interés, contra la cual se busca una respuesta de anticuerpos específica en un individuo, y una molécula portadora constituida por un "superantígeno". El antígeno de interés está acoplado de manera exclusivamente covalente a la molécula portadora, por ejemplo con la ayuda del glutaraldehído (también denominado "pentanodial") , siendo los productos no acoplados de manera covalente eliminados con el fin de obtener un producto final químicamente bien definido.

En el estado de la técnica se describen otros productos de acoplamiento covalente. El artículo de Kim et al. (1999, Vaccine, Vol. 17 (n° 7-8) : 597-603) describe unos inmuno-conjugados que comprenden un antígeno tumoral seleccionado de entre MUC1 y GD3, que está acoplado a la proteína portadora KLH. Kim et al. (1999) han descrito el papel de los inmuno-adyuvantes en la inducción de una respuesta de anticuerpos y de una respuesta celular de tipo T contra estos inmuno-conjugados. La solicitud PCT no WO 96/27389 describe unos compuestos inmunogénicos desprovistos de toxicidad que derivan de una proteína de regulación de un virus VIH-1, VIH-2 o HTLV-2, por tratamiento químico con la ayuda de un agente de acoplamiento tal como un aldehído, o de una proteína portadora activada por un pre-tratamiento con la ayuda de un aldehído. La solicitud PCT no WO 02/11759 describe unas vacunas que contienen, a título de principio activo, un inmunógeno que es un factor citoquínico o un factor de regulación celular con propiedades inmunosupresoras/angiogénicas. En particular, la solicitud WO 02/11759 describe unas vacunas que comprenden unos inmuno-conjugados entre diversas citoquinas y una proteína portadora.

Eventualmente, el producto de acoplamiento covalente entre el antígeno de interés y el superantígeno se puede preparar en forma de un polímero de dicho producto de acoplamiento, por ejemplo por fijación no covalente de los productos de acoplamiento monómeros entre sí, a través de interacciones iónicas, de interacciones de adsorción o también de interacciones bioespecíficas. Por ejemplo, los productos de acoplamiento monoméricos pueden formar unos complejos con unas moléculas altamente cargadas positivamente o negativamente, gracias a puentes salinos realizados en condiciones de baja fuerza iónica. Grandes complejos de productos de acoplamiento monoméricos son preparados utilizando unos polímeros cargados, tales como unos polímeros poli (ácido L-glutámico) o poli (Llisina) . Según otro modo de realización de un polímero de productos de acoplamiento monoméricos, los productos de acoplamiento exclusivamente covalente entre el antígeno de interés y el superantígeno pueden ser adsorbidos o acoplados de manera no covalente a la superficie de micropartículas, tales como bolas de látex u otros polímeros hidrófobos.

Una segunda forma de estas construcciones inmunogénicas, designada comúnmente estructura "MAP" (por Muli-Antigenic Protein") se presenta en general en forma de un esqueleto proteico constituido por un polímero de poli (lisina) , lineal o ramificado, en el que se fijan de manera covalente uno o más antígenos de interés.

Una tercera forma de estas construcciones inmunogénicas consiste en unas micropartículas en las que se fijan el o los antígenos de interés. Se conocen unas formas variadas de micropartículas portadoras de antígenos.

Se conocen por ejemplo los iscoms (por "immunostimulating complexes") , que están constituidos por un complejo antigénico y por un adyuvante, el compuesto QuilA.

Se conocen también los liposomas, que poseen las mismas desventajas que los iscoms, a saber en particular una cierta toxicidad y unos efectos inmunológicos secundarios, debidos a su falta de pureza.

Se conocen también las micropartículas biodegradables, como los polímeros de ácido láctico y de ácido glutámico (Aguado y Lambert, 1992, Immuno. Biol., Vol. 184: 113-125) o también unas partículas de almidón (solicitud de patente americana no 2002/0098203 - Gutavsson et al.) , en la matriz polimérica, de las cuales los antígenos de interés están atrapados. Estas partículas liberan el antígeno en su forma soluble durante la degradación de la matriz

polimérica.

Se han descrito asimismo unas partículas constituidas exclusivamente por proteínas recombinantes híbridas, como se describen en la solicitud de patente francesa no FR 2 635 532 (Thiollais et al.) .

Se conocen también unas microesferas porosas en las que los antígenos están inmovilizados en el interior de los microporos por captación o acoplamiento físico, como se describe en la patente americana US no 5.008.116 (Cahn) .

Sin embargo, las diferentes soluciones propuestas en el estado de la técnica tienen todas en común por lo menos un inconveniente técnico relacionado con su modo de preparación, a saber la pérdida de una gran proporción del

material antigénico de interés, debido a una etapa obligatoria de eliminación de los antígenos no acoplados o no adsorbidos.

Además, aunque las técnicas anteriores permiten realizar una asociación entre un antígeno de interés de baja masa molecular con una molécula portadora, estas son en general inadecuadas pare el acoplamiento de un antígeno de interés de alta masa molecular, por ejemplo de más de 10 kDa, con la molécula portadora, debido en particular a los volúmenes estéricos que impiden el acoplamiento de un número elevado de moléculas de antígenos de interés de alta masa molecular a una misma molécula portadora.... [Seguir leyendo]

1. Producto inmunogénico estable para la inducción de anticuerpos contra una o varias proteínas antigénicas en un sujeto, caracterizado porque consiste en unos heterocomplejos inmunogénicos proteicos constituidos por asociaciones entre (i) unas moléculas de proteínas antigénicas y (ii) unas moléculas proteicas portadoras, porque por lo menos el 1 por ciento y porque menos del 40 por ciento de las proteínas antigénicas (i) están unidas con las moléculas proteicas portadoras (ii) por un enlace covalente, y porque la o las proteínas antigénicas (i) consisten en unas citoquinas producidas naturalmente por dicho sujeto.

2. Producto inmunogénico según la reivindicación 1, caracterizado porque cada heterocomplejo comprende (i) una pluralidad de proteínas antigénicas unidas a (ii) una molécula proteica portadora.

3. Producto inmunogénico según la reivindicación 2, caracterizado porque, para cada heterocomplejo inmunogénico, la pluralidad de proteínas antigénicas (i) está constituida por una pluralidad de ejemplares de una proteína antigénica única.

4. Producto inmunogénico según una de las reivindicaciones 2 o 3, caracterizado porque, para cada heterocomplejo inmunogénico, las proteínas antigénicas (i) están constituidas por una pluralidad de ejemplares de una proteína normalmente reconocida como una proteína propia por las células del sistema inmunitario de dicho sujeto.

5. Producto según una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque comprende de 5 a 50 proteínas antigénicas (i) para una molécula proteica portadora (ii) , preferentemente de 20 a 40 proteínas antigénicas (i) para una molécula proteica portadora (ii) .

6. Producto inmunogénico según una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque los enlaces covalentes entre una o varias de las proteínas antigénicas (i) y la molécula proteica portadora (ii) están realizados por medio de un agente químico de unión bifuncional.

7. Producto inmunogénico según la reivindicación 6, caracterizado porque dicho agente químico de unión comprende por lo menos dos funciones aldehídos libres.

8. Producto inmunogénico según la reivindicación 7, caracterizado porque dicho agente de unión es el glutaraldehído.

9. Producto inmunogénico según una de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque la o las proteínas antigénicas (i) se seleccionan de entre la interleucina-4, el interferón alfa, el interferón gamma, el VEGF, la interleucina-10, el TNF alfa, el TGF beta, la interleucina-5 y la interleucina-6.

10. Producto inmunogénico según una de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque se selecciona de entre los productos que comprenden los heterocomplejos siguientes, en los que las proteínas antigénicas (i) , por un lado y la molécula portadora proteica (ii) por otro, son respectivamente:

a) (i) IL-4 y (ii) KLH; b) (i) interferón alfa y (ii) KLH; c) (i) VEGF y (ii) KLH; d) (i) IL-10 y (ii) KLH; e) (i) interferón alfa y (ii) gp160 de VIH1; f) (i) IL-4 y (ii) el antígeno alérgeno Bet v 1; y g) (i) el VEGF y (ii) la proteína E7 de un Papilomavirus; y h) (i) el TNFα y (ii) KLH

11. Composición que comprende un producto inmunogénico según una de las reivindicaciones 1 a 10.

12. Composición farmacéutica que comprende un producto inmunogénico según una de las reivindicaciones 1 a 10, en asociación con uno o varios excipientes fisiológicamente compatibles.

13. Composición inmunogénica que comprende un producto inmunogénico según una de las reivindicaciones 1 a 10, en asociación con uno o varios excipientes fisiológicamente compatibles.

14. Composición vacunal que comprende un producto inmunogénico según una de las reivindicaciones 1 a 10, en asociación con uno o varios excipientes fisiológicamente compatibles.

15. Composición inmunogénica o composición vacunal según una de las reivindicaciones 13 o 14, caracterizada porque comprende el adyuvante de la inmunidad CpG.

16. Procedimiento de preparación de un producto inmunogénico según una de las reivindicaciones 1 a 9,

caracterizado porque comprende las etapas siguientes:

a) incubar las proteínas antigénicas (i) , que consisten en unas citoquinas producidas naturalmente por un sujeto, y la molécula portadora (ii) en una relación molar (i) : (ii) de 5:1 a 50:1, en presencia de un agente químico de 5 unión;

b) estabilizar los heterocomplejos formados en la etapa a) mediante un tratamiento con el formaldehído; y

c) recuperar el producto inmunogénico que comprende unos heterocomplejos inmunogénicos que se ha 10 preparado en la etapa b) .

17. Procedimiento según la reivindicación 16, caracterizado porque el agente químico de unión es el glutaraldehído.