Utilización de proteínas inmunógenas inmunosupresoras o angiogénicas desactivadas para la producción de IgA secretoras.

Utilización, en combinación con un adyuvante de inmunidad mucosal,

de la proteína Tat del virus VIH1 cuyaspropiedades inmunosupresora y/o angiogénica se han desactivado en por lo menos el 70%, por un tratamiento físicoy/o químico, por recombinación genética o también por un acondicionamiento adyuvante, conservándole dichotratamiento la propiedad de ser reconocida por unos anticuerpos dirigidos contra dicha proteína Tat, y conservándoleunas propiedades inmunógenas suficientes para generar unos anticuerpos que neutralizan o bloquean dichaproteína Tat nativa, o también la utilización de una molécula de ADN que corresponde a dicha proteína Tatdesactivada por mutación o de una molécula de ADN que corresponde a dicho fragmento inactivo, para la obtenciónde un medicamento que confiere una inmunidad mucosal basada en la secreción de anticuerpos de clase IgA, parael tratamiento de cánceres relacionados con las infecciones por el virus VIH-1.

Utilización de proteínas inmunógenas inmunosupresoras o angiogénicas desactivadas para la producción de IgA secretoras.

La presente invención se refiere a la utilización de una proteína Tat del VIH-1 que procede de células infectadas por un virus o de células inmunitarias, de un fragmento de dicha proteína o también de una molécula de ADN que corresponde a dicha proteína o fragmento, para la preparación de un medicamento destinado a conferir a un paciente una inmunidad mucosal basada en la secreción de IgA secretoras.

Se buscan siempre unos compuestos activos para luchar contra el cáncer que es la principal plaga médica de nuestra época. Numerosas terapias se han desarrollado con un éxito variable ya que existe todavía una mortalidad importante. Estas terapias han sido en primer lugar la exéresis quirúrgica para los tumores sólidos, la radioterapia y la quimioterapia. Estas terapias parecen ser insuficientes en numerosos cánceres para los cuales no se ha observado ningún éxito clínico, lo cual indica una prolongación importante de la supervivencia de los pacientes o su curación total.

Los cánceres son proliferaciones de células que pueden migrar después en el organismo para formar metástasis. Es conocido que el sistema inmunitario de un individuo normal elimina regularmente las células cancerígenas nacientes (concepto de inmunovigilancia) , y que la formación de un cáncer está asociada 1) al escape del sistema de vigilancia inmunitario local y después a un periodo avanzado del cáncer, a una inmunosupresión sistémica y 2) a una proliferación de las células endoteliales vasculares que aseguran la aportación nutritiva de las células tumorales (neoangiogénesis) .

La mayoría de los agentes anticancerígenos (quimioterapia, radioterapia) utilizados en la actualidad luchan contra la replicación de las células cancerígenas. Estos agentes no tienen por objetivo el entorno particular necesario para la proliferación de las células cancerígenas, caracterizado al mismo tiempo por la ausencia de actividad local (paracrina) de las células inmunitarias antitumorales (escape inmunitario) y por la aparición de una vascularización intratumoral (neoangiogénesis) .

Por ello, recientemente, se han introducido nuevos enfoques terapéuticos. Algunos tienen como objetivo estimular el sistema inmunitario antitumor por terapia celular o por la activación de genes que codifican para unas proteínas que estimulan la respuesta inmunitaria (terapia génica) o también inmunizando directamente contra unos antígenos, identificados como específicos o asociados, del tumor de tipo MAGE (vacunación) . Otros tienen como objetivo luchar contra la neoangiogénesis, utilizando unos antimetabolitos que destruyen las células endoteliales (Judah Folkman) . En este nuevo contexto, se debe señalar que De Bruijn et al., (Cancer Res (1998) 58, páginas 724-731) han descrito la utilización de proteínas E6 y E7 nativas para inducir una respuesta celular citotóxica (CTL) en ratones para protegerlos contra la implantación de células tumorales.

Ahora bien, la solicitante ha descubierto de manera sorprendente, después de largas investigaciones, que unos factores inmunosupresores o angiogénicos con acción paracrina son inducidos por los tumores. Estos factores que son solubles pueden, por un lado, impedir localmente que las células del sistema inmunitario actúen eficazmente, incluso si se les estimula (inmunosupresión) y pueden, por otro lado, asegurar la nutrición de las células cancerígenas, activando la proliferación de las células endoteliales (angiogénesis) .

El fenómeno de escape a las defensas inmunitarias celulares del hospedante por inducción de su parálisis in situ es una estrategia utilizada por numerosos cánceres y es necesario para su supervivencia. Inicialmente, la inmunosupresión permanece localizada a nivel del tumor, ya que el individuo es todavía capaz de defenderse contra las otras agresiones tales como infecciones. Sin embargo, en un estado más tardío, esta inmunosupresión puede extenderse, generalizarse, así como lo demuestran la diseminación de metástasis y la gran vulnerabilidad de la persona con cáncer frente a las infecciones, incluso fuera de los efectos debilitantes debidos a la quimioterapia o radioterapia. En resumen, este escape al control del sistema inmunitario se debe a una parálisis del sistema inmunitario (inmunosupresión) , que le impide funcionar normalmente. Esta inmunosupresión utiliza unos factores paralizantes, que son producidos por las células cancerígenas o su entorno. La parálisis local de las células del sistema inmunitario o inmunosupresión representa por lo tanto un arma principal de las células cancerígenas que les permite escapar al sistema inmunitario del hospedante. Así, unas proteínas liberadas por las células infectadas actúan como verdaderas toxinas sobre las células inmunitarias de los alrededores, las desajustan y bloquean in situ (de manera paracrina) las células del sistema inmunitario, protegiendo las células infectadas.

Los tumores malignos están caracterizados por la presencia de una vascularización importante, que asegura un aflujo de sangre necesario para la nutrición de las células cancerígenas. Esta vascularización se realiza mediante la activación de las células endoteliales vasculares inducidas en contacto con las células tumorales (neoangiogénesis) . Los trabajos de Judah Folkman han demostrado recientemente que el control de la neoangiogénesis tumoral podía representar un arma eficaz decisiva contra los cánceres (Folkman J., Semin. Cancer Biol., 1992, 3 (2) : 65-71) .

En este contexto fisiopatológico, la solicitante ha descubierto, después de largas investigaciones, en el caso del ATL,

del cáncer del cuello uterino, y del sarcoma de Kaposi, tres proteínas implicadas en una inmunosupresión local a nivel del tumor: se trata de la proteína Tax de HTLV 1, de la proteína E7 del papilomavirus, y de la proteína Tat del VIH-1 en el sarcoma de Kaposi. En este último caso, existiría también como agente etiológico un virus del herpes (el HHV8) , que explicaría que el sarcoma de Kaposi aparece también en sujetos no infectados por el VIH-1. Se ha implicado a Tat en el sarcoma de Kaposi, pero sin que los investigadores identifiquen su papel generador de inmunosupresión local que favorece la generación de sarcomas de Kaposi. De manera interesante, la solicitante ha descubierto que algunas de estas proteínas inmunosupresoras, tales como la proteína Tat del VIH-1 y la proteína E7 de HPV (cepas 16 y 18) también tienen efectos activadores sobre las células endoteliales vasculares.

Para luchar contra estos factores inmunosupresores y/o angiogénicos, la solicitante ha propuesto inducir por vía general unos anticuerpos específicos dirigidos contra estos factores extracelulares. Así, ha descrito la administración de las proteínas citadas anteriormente por las dos vías convencionales de administración de las vacunas, a saber la vía oral y la vía inyectable.

Así, en una solicitud de patente anterior (WO 96/27389, Zagur y et al.) , la solicitante ha demostrado cómo bloquear mediante unos anticuerpos específicos los factores solubles liberados por las células tumorales o infectadas por un virus. Por "factores solubles" se entienden unos factores (en general unas proteínas) sintetizados por estas células y liberados en el medio extracelular o bien mediante transporte activo, o bien mediante difusión pasiva. Los factores extracelulares citados anteriormente pueden actuar in situ o bien inhibiendo la respuesta celular inmunitaria, que incluye la activación de los linfocitos T citolíticos (CTL) , o bien perturbando la red citoquínica, o bien satisfaciendo mediante la neoangiogénesis las necesidades nutritivas del tumor. Estos factores extracelulares pueden ser de origen celular (citoquinas) o, para los cánceres inducidos por virus o las enfermedades virales, unas proteínas virales, principalmente unas proteínas de regulación, presentes en el medio extracelular.

Ha descrito en particular unos medios que permiten obtener, en el medio circulante, unos anticuerpos de clase IgG dirigidos específicamente contra unos factores deletéreos, por ejemplo inmunosupresores y/o angiogénicos, siendo dichos anticuerpos susceptibles de bloquear estos factores y neutralizar sus efectos sobre las células inmunitarias y/o endoteliales. Estos anticuerpos específicos de clase IgG han sido, o bien inducidos por inmunización activa (vacunación) dirigida contra las proteínas en particular los factores solubles previamente identificados, o bien administrados pasivamente (inmunización pasiva) . Los anticuerpos circulantes, presentes en el medio extracelular, combinándose con... [Seguir leyendo]

1. Utilización, en combinación con un adyuvante de inmunidad mucosal, de la proteína Tat del virus VIH1 cuyas propiedades inmunosupresora y/o angiogénica se han desactivado en por lo menos el 70%, por un tratamiento físico y/o químico, por recombinación genética o también por un acondicionamiento adyuvante, conservándole dicho tratamiento la propiedad de ser reconocida por unos anticuerpos dirigidos contra dicha proteína Tat, y conservándole unas propiedades inmunógenas suficientes para generar unos anticuerpos que neutralizan o bloquean dicha proteína Tat nativa, o también la utilización de una molécula de ADN que corresponde a dicha proteína Tat desactivada por mutación o de una molécula de ADN que corresponde a dicho fragmento inactivo, para la obtención de un medicamento que confiere una inmunidad mucosal basada en la secreción de anticuerpos de clase IgA, para el tratamiento de cánceres relacionados con las infecciones por el virus VIH-1.

2. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque dicho medicamento consiste en una composición farmacéutica vacunal para la vía mucosal.

3. Utilización según una de las reivindicaciones 1 y 2, caracterizada porque dicho medicamento está adaptado para la administración por vía oral o por vía intranasal.

4. Utilización según una de las reivindicaciones 1, 2 y 3, caracterizada porque el compuesto inmunógeno ha sido tratado por un aldehído, o carboxamidado, o carboximetilado o maleimidado, u oxidado por barboteo de oxígeno.

5. Utilización según las reivindicaciones 1, 2 y 3, caracterizada porque la proteína Tat utilizada es una proteína Tat mutada.

6. Utilización según una de las reivindicaciones 1, 2 y 3, caracterizada porque se utiliza una molécula de ADN que corresponde a dicha proteína Tat desactivada por mutación, o una molécula de ADN que corresponde a dicho fragmento inactivo.

7. Composición farmacéutica vacunal para la vía mucosa, que contiene a título de principio activo la proteína Tat del virus VIH1 cuyas propiedades angiogénicas y/o inmunosupresoras se han desactivado en por lo menos el 70%, por un tratamiento físico y/o químico, por recombinación genética o también por un acondicionamiento adyuvante, conservándole dicho tratamiento la propiedad de ser reconocida por unos anticuerpos dirigidos contra dicha proteína, y conservándole unas propiedades inmunógenas suficientes para generar unos anticuerpos que neutralizan o bloquean dicha proteína nativa, o también una molécula de ADN que corresponde a dicha proteína Tat desactivada por mutación, o una molécula de ADN que corresponde a dicho fragmento inactivo, en combinación con un adyuvante de inmunidad mucosal.

8. Composición farmacéutica vacunal según la reivindicación 7, caracterizada porque consiste en una composición para la vía oral digestiva o para la vía nasal.

9. Composición según una de las reivindicaciones 7 y 8, caracterizada porque el adyuvante de inmunidad mucosal se selecciona de entre un mutante de CT (toxina del cólera) y un mutante de LT (enterotoxina lábil de E. coli) .

10. Composición farmacéutica vacunal según una de las reivindicaciones 7 a 9, caracterizada porque contiene un adyuvante que adsorbe el principio activo.

11. Composición farmacéutica vacunal según la reivindicación 10, caracterizada porque el adyuvante que adsorbe el principio activo se selecciona de entre el hidróxido de alúmina y las partículas de oro.

12. Composición farmacéutica según una de las reivindicaciones 7 a 11, caracterizada porque la proteína se obtiene por recombinación genética y presenta una homología peptídica del 70% por lo menos con la proteína Tat del VIH1

o con un segmento de la proteína Tat del VIH1.

13. Composición farmacéutica según una de las reivindicaciones 7 a 12, caracterizada porque la proteína ha sido tratada por un aldehído o ha sido carboximetilada, carboxamidada o maleimidada, u oxidada por barboteo de oxígeno.

14. Procedimiento de preparación de una composición farmacéutica, caracterizado porque se prepara una composición para la vía mucosa, tal como se ha definido en una de las reivindicaciones 7 a 13, por mezcla del o de los principios activos inmunógenos con un adyuvante de la inmunidad mucosal.

15. Anticuerpo purificado de clase IgA anti-proteína Tat del virus VIH1.

16. Fragmento F (ab') 2 o F (ab) de un anticuerpo tal como se ha definido en la reivindicación 15.

17. Composición farmacéutica que contiene un anticuerpo de clase IgA anti-proteína Tat según una de las

reivindicaciones 15 o 16.

18. Composición farmacéutica que contiene un anticuerpo de clase IgG anti-proteína Tat del virus VIH1 y un anticuerpo de clase IgA anti-proteína Tat del virus VIH1.