Procedimientos para el diagnóstico y tratamiento de enfermedades que tienen un componente autoinmune y/o inflamatorio.

Un procedimiento para identificar un sujeto que tiene una enfermedad inflamatoria o enfermedad autoinmunitaria que es sensible a tratamiento con un agente terapéutico anti-CD40,

comprendiendo dicho procedimiento:

a) proporcionar una muestra biológica de prueba y una muestra biológica de control obtenidas de dicho sujeto, en el que dicha muestra biológica de prueba y dicha muestra biológica de control comprenden células que expresan CD40 que han sido estimuladas con un ligando de CD40;

b) poner en contacto dicha muestra biológica de prueba con una cantidad eficaz de dicho agente terapéutico anti-CD40;

c) detectar el nivel de al menos un biomarcador en dicha muestra biológica de prueba, en el que dicho biomarcador está seleccionado del grupo que consiste en:

(i) un biomarcador de apoptosis celular, en el que dicho biomarcador de apoptosis está seleccionado del grupo que consiste en una proteína caspasa escindida, poli ADP-ribosa polimerasa (PARP) escindida, expresión en la superficie celular de fosfotidilserina (PS), fragmentación de ADN genómico, y cualquier combinación de las mismas;

(ii) un biomarcador de una ruta de señalización de CD40 mediada por CD40L, en el que dicha ruta de señalización de CD40 mediada por CD40L está seleccionada del grupo que consiste en la ruta de señalización de AKT, la ruta de señalización de NF-κB y una ruta de señalización de proteína cinasa activada por mitógeno (MAPK), y dicho biomarcador de dicha ruta de señalización de CD40 mediada por CD40L está seleccionada del grupo que consiste en proteína fosfo-PI3K, fosfo-PDK1, fosfo-AKT, fosfo-MEK, fosfo-ERK, fosfo-p38, fosfo-IKKα/β, fosfo-IκB y NF-κB activada; y

(iii) un biomarcador de supervivencia celular, en el que dicho biomarcador de supervivencia celular está seleccionado del grupo que consiste en una proteína antiapoptósica que es un miembro de la familia Bcl-2, una proteína inhibidora de la apoptosis IAP y factor 1 asociado a receptor de TNF (TRAF-1); y

d) comparar el nivel de dicho al menos un biomarcador en dicha muestra biológica de prueba con el nivel de dicho al menos un biomarcador detectado en dicha muestra biológica de control, en el que dicha muestra biológica de control no se ha puesto en contacto con dicho agente terapéutico anti-CD40, en el que

(i) un aumento en el nivel de al menos uno de dichos biomarcadores de apoptosis; y/o

(ii) una reducción en el nivel de al menos uno de dichos biomarcadores de al menos una de dichas rutas de señalización de CD40 mediadas por CD40L; y/o

(iii) una reducción en el nivel de al menos uno de dichos biomarcadores de supervivencia celular;

en dicha muestra biológica de prueba con respecto a dicha muestra biológica de control es indicativo de un sujeto que se beneficiaría del tratamiento con dicho agente terapéutico anti-CD40,

y en el que dicho agente terapéutico anti-CD40 es un anticuerpo monoclonal anti-CD40 antagonista o fragmento de unión a antígeno del mismo que puede unirse específicamente a un antígeno CD40 humano expresado sobre la superficie de un linfocito B humano, y que está libre de actividad antagonista significativa cuando se une al antígeno CD40 expresado sobre la superficie de dicho linfocito B.

Procedimientos para el diagnóstico y tratamiento de enfermedades que tienen un componente autoinmune y/o inflamatorio

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La invención se refiere al campo de la medicina de diagnóstico y de pronóstico, más particularmente a procedimientos para determinar la eficacia de agentes terapéuticos en el tratamiento de enfermedades que tienen un componente autoinmune y/o inflamatorio que está asociado a señalización de CD40 anómala.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Muchos miembros de la familia del factor de necrosis tumoral (TNF) de ligandos y sus receptores correspondientes regulan el crecimiento de células normales induciendo apoptosis o potenciando la supervivencia y proliferación celular. Es este equilibrio entre señales apoptósicas y señales de supervivencia y proliferación el que mantiene la homeostasis celular normal. Hasta la fecha se han identificado al menos 26 receptores de la familia TNF y 18 ligandos de la familia TNF. Las formas biológicamente activas de tanto los receptores como los ligandos son trímeros de proteína autoensamblados. Se han identificado formas de transmembrana y solubles de tanto los receptores como los ligandos. Aunque los dominios intracelulares de los receptores no comparten homología de secuencias, sus dominios extracelulares comprenden repeticiones ricas en cisteína de 40 aminoácidos. Sus colas citoplásmicas señalizan interaccionando con dos grupos principales de proteínas intracelulares: factores asociados a receptores de TNF (TRAF3) y proteínas que contienen dominio de la muerte (DD) . La interacción entre al menos seis sitios de unión a TRAF y TRAF humanos sobre la cola citoplásmica de algunos de estos receptores inicia varias rutas de señalización, que incluyen AKT (la serina/treonina cinasa denominada proteína cinasa B o PKB) , factor nuclear KB (NF-KB) y proteínas cinasas activadas por mitógeno (MAPK) . Véase, por ejemplo, la revisión de Younes y Kadin (2003) J. Clin. Oncol. 18:3526-3534.

El miembro de receptores de la familia TNF CD40 es un antígeno de superficie celular de 50-55 kDa presente sobre la superficie de linfocitos B humanos tanto normales como neoplásicos, células dendríticas, monocitos, macrófagos, linfocitos T CD8+, células endoteliales y células monocíticas y epiteliales. El antígeno CD40 también se expresa sobre linfocitos T activados, plaquetas activadas, células de músculo liso vasculares inflamadas, eosinófilos, membranas sinoviales en artritis reumatoide, fibroblastos dérmicos y otros tipos no linfoides de células. Dependiendo del tipo de célula que exprese CD40, la ligación puede inducir adhesión intercelular, diferenciación, activación y proliferación. Por ejemplo, la unión de CD40 a su ligando relacionado, CD40L (también designado CD154) , estimula la proliferación y diferenciación de linfocitos B en células plasmáticas, producción de anticuerpos, cambio de isotipo y generación de linfocitos B de memoria. Durante la diferenciación de linfocitos B, CD40 se expresa en pre-linfocitos B, pero se pierde tras la diferenciación en células plasmáticas.

El ligando de CD40 (CD40L) , también conocido como CD154, es una proteína transmembrana de 32-33 kDa que también existe en dos formas solubles biológicamente activas más pequeñas, 18 kDa y 31 kDa, respectivamente (Graf y col. (1995) Eur. J. Immunol. 25:1749-1754; Mazzei y col. (1995) J. Biol. Chem. 270:70257028; Pietravalle y col. (1996) J. Biol. Chem. 271:5965-5967) . CD40L se expresa en linfocitos T colaboradores CD4+ activados, pero no en reposo (Lane y col. (1992) Eur. J. Immunol. 22:2573-2578; Spriggs y col. (1992) J. Exp. Med. 176:1543-1550; y Roy y col. (1993) J. Immunol. 151:1-14) . Tanto CD40 como CD40L se han clonado y caracterizado (Stamenkovi y col. (1989) EMBO J. 8:1403-1410; Armitage y col. (1992) Nature 357:80-82; Lederman y col. (1992) J. Exp. Med. 175:1091-1101; y Hollenbaugh y col. (1992) EMBO J. 11:4313-4321) . Véase también la patente de EE.UU. nº 5.945.513, que describe CD40L humano. Las células transfectadas con el gen CD40L y que expresan la proteína CD40L sobre su superficie pueden provocar la proliferación de linfocitos B, y junto con otras señales estimulantes, pueden inducir la producción de anticuerpos (Armitage y col. (1992) arriba; y la patente de EE.UU. nº 5.945.513) . Pacientes con enfermedad autoinmunitaria tienen elevados niveles en suero de CD40L soluble (CD40Ls) que no se observan en sujetos sanos. La expresión en exceso de CD40L produce enfermedades autoinmunitarias similares a lupus eritematoso sistémico en modelos de roedor (Higuchi y col. (2002) J. Immunol. 168:9-12) . A diferencia, la ausencia de CD40L funcional en linfocitos T activados produce síndrome de hiper-IgM ligado al X (Allen y col. (1993) Science 259:990; y Korthauer y col. (1993) Nature 361:539) . Además, el bloqueo de la interacción CD40/CD40L puede prevenir el rechazo de trasplante en modelos de primate no humano. Véase, por ejemplo, Wee y col. (1992) Trasplantation 53:501-7.

La expresión de CD40 en APC desempeña una función co-estimulante importante en la activación de estas células. Por ejemplo, se ha mostrado que anticuerpos monoclonales (mAb) anti-CD40 agonistas imitan los efectos de linfocitos T colaboradores en la activación de linfocitos B. Cuando se presentaron sobre células adherentes que expresan FcyRII, estos anticuerpos inducen la proliferación de linfocitos B (Banchereau y col. (1989) Science 251:70) . Además, los mAb anti-CD40 agonistas pueden sustituir la señal de linfocitos T colaboradores por la secreción de IgM, IgG e IgE en presencia de IL-4 (Gascan y col. (1991) J. Immunol. 147:8) . Además, los mAb anti-CD40 agonistas pueden prevenir la muerte celular programada (apoptosis) de linfocitos B aislados de ganglios linfáticos.

Estas y otras observaciones sostienen la teoría actual de que la interacción de CD40 y CD40L desempeña una función esencial en la regulación de tanto respuestas inmunitarias humorales como mediadas por células. Estudios más recientes han revelado una función mucho más amplia de la interacción CD40/CD40L en diversos procesos fisiológicos y patológicos.

La ruta de transducción de señales de CD40 depende de la regulación coordinada de muchos factores intracelulares. Al igual que otros miembros de la familia de receptores de TNF, CD40 activa TRAF, que incluye TRAF-1, TRAF-2, -3, -5 y -6, que regulan por incremento diversas rutas de señalización tras la interacción de CD40 con CD40L (tanto CD40L unido a membrana como CD40L soluble) , que incluyen cinasa regulada por señales extracelulares (ERK) , cinasa del extremo amino de c-jun (JNK) , p38 MAPK y NF-KB (véase, por ejemplo, Younes y Carbone (1999) Int. J. Biol. Markers 14:135-143; van Kooten y Banchereau (2000) J. Leukoc. Biol. 67:2-17) .

Se ha mostrado que la señalización mediante CD40 previene la muerte celular de apoptosis (Makus y col. (2002) J. Immunol. 14:973-982) . Las señales apoptósicas son necesarias para inducir muerte celular programada de un modo coordinado. Las señales de muerte celular pueden incluir estímulos intrínsecos de dentro de la célula tales como estrés del retículo endoplásmico o estímulos extrínsecos tales como unión a receptor de FasL o TNFa. La ruta de señalización es compleja, que implica activación de caspasas tales como caspasa-3 y caspasa-9, y de poli (ADP ribosa) polimerasa (PARP) . Durante la cascada, las proteínas de señalización antiapoptósica, tales como Mcl-1 y Bcl-x, y miembros de la familia IAP de proteínas, tales como inhibidor ligado al X de apoptosis (XIAP) , se regulan por disminución (Budihardjo y col. (1999) Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 15:269-290) . Por ejemplo, en células dendríticas, la señalización de células por CD40 puede bloquear señales de apoptosis transducidas por FasL (Bjorck y col. (1997) Intl. Immunol. 9:365-372) .

Así, la interacción de CD40 con CD40L y posterior activación de la señalización de CD40 son etapas necesarias para respuestas inmunitarias normales; sin embargo, la desregulación de la señalización de CD40 puede conducir a enfermedad. Se ha mostrado que la ruta de señalización de CD40 participa en enfermedad autoinmunitaria (Ichikawa y col. (2002) J. Immunol. 169:2781-2787 y Moore y col. (2002) J. Autoimmun. 19:139-145) . Adicionalmente, la interacción CD40/CD40L desempeña una función importante en procesos inflamatorios. Por ejemplo, tanto CD40 como CD40L se expresan en exceso en lesiones de aterosclerosis humana y experimental. La estimulación de CD40 induce la expresión de enzimas que degradan la matriz y expresión de factor de tejido en tipos de células asociados a ateroma, tales como células endoteliales, células de músculo liso y macrófagos. Además, la estimulación de CD40 induce la... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para identificar un sujeto que tiene una enfermedad inflamatoria o enfermedad autoinmunitaria que es sensible a tratamiento con un agente terapéutico anti-CD40, comprendiendo dicho procedimiento:

a) proporcionar una muestra biológica de prueba y una muestra biológica de control obtenidas de dicho sujeto, en el que dicha muestra biológica de prueba y dicha muestra biológica de control comprenden células que expresan CD40 que han sido estimuladas con un ligando de CD40; b) poner en contacto dicha muestra biológica de prueba con una cantidad eficaz de dicho agente terapéutico anti-CD40; c) detectar el nivel de al menos un biomarcador en dicha muestra biológica de prueba, en el que dicho biomarcador está seleccionado del grupo que consiste en:

(i) un biomarcador de apoptosis celular, en el que dicho biomarcador de apoptosis está seleccionado del grupo que consiste en una proteína caspasa escindida, poli ADP-ribosa polimerasa (PARP) escindida, expresión en la superficie celular de fosfotidilserina (PS) , fragmentación de ADN genómico, y cualquier combinación de las mismas;

(ii) un biomarcador de una ruta de señalización de CD40 mediada por CD40L, en el que dicha ruta de señalización de CD40 mediada por CD40L está seleccionada del grupo que consiste en la ruta de señalización de AKT, la ruta de señalización de NF-KB y una ruta de señalización de proteína cinasa activada por mitógeno (MAPK) , y dicho biomarcador de dicha ruta de señalización de CD40 mediada por CD40L está seleccionada del grupo que consiste en proteína fosfo-PI3K, fosfo-PDK1, fosfo-AKT, fosfo-MEK, fosfo-ERK, fosfo-p38, fosfo-IKKa/1, fosfo-IKB y NF-KB activada; y

(iii) un biomarcador de supervivencia celular, en el que dicho biomarcador de supervivencia celular está seleccionado del grupo que consiste en una proteína antiapoptósica que es un miembro de la familia Bcl-2, una proteína inhibidora de la apoptosis IAP y factor 1 asociado a receptor de TNF (TRAF-1) ; y

d) comparar el nivel de dicho al menos un biomarcador en dicha muestra biológica de prueba con el nivel de dicho al menos un biomarcador detectado en dicha muestra biológica de control, en el que dicha muestra biológica de control no se ha puesto en contacto con dicho agente terapéutico anti-CD40, en el que

(i) un aumento en el nivel de al menos uno de dichos biomarcadores de apoptosis; y/o

(ii) una reducción en el nivel de al menos uno de dichos biomarcadores de al menos una de dichas rutas de señalización de CD40 mediadas por CD40L; y/o

(iii) una reducción en el nivel de al menos uno de dichos biomarcadores de supervivencia celular;

en dicha muestra biológica de prueba con respecto a dicha muestra biológica de control es indicativo de un sujeto que se beneficiaría del tratamiento con dicho agente terapéutico anti-CD40, y en el que dicho agente terapéutico anti-CD40 es un anticuerpo monoclonal anti-CD40 antagonista o fragmento de unión a antígeno del mismo que puede unirse específicamente a un antígeno CD40 humano expresado sobre la superficie de un linfocito B humano, y que está libre de actividad antagonista significativa cuando se une al antígeno CD40 expresado sobre la superficie de dicho linfocito B.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que dichas células que expresan CD40 se estimularon ex vivo con un ligando de CD40 antes de dicha etapa de puesta en contacto.

3. El procedimiento de la reivindicación 2, en el que dicho ligando de CD40 está seleccionado del grupo que consiste en CD40L soluble y CD40L unido a la membrana.

4. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicho anticuerpo monoclonal anti-CD40 antagonista o fragmento de unión a antígeno del mismo está libre de actividad antagonista significativa en una respuesta celular.

5. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicho anticuerpo monoclonal anti-CD40 antagonista o fragmento de unión a antígeno del mismo está libre de actividad antagonista significativa en ensayos de más de una respuesta celular.

6. El procedimiento de la reivindicación 4 o la reivindicación 5, en el que dicho anticuerpo monoclonal anti-CD40 antagonista o fragmento de unión a antígeno del mismo actúa de antagonista de al menos una respuesta de linfocitos B seleccionada del grupo que consiste en proliferación de linfocitos B, diferenciación de linfocitos B, producción de anticuerpos, adhesión intercelular, generación de linfocitos B de memoria, cambio de isotipo, regulación por incremento de la expresión en la superficie celular de MHC de clase II y CD80/86 y secreción de citocinas pro-inflamatorias.

7. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que dicha proteína caspasa escindida está seleccionada del grupo que consiste en caspasa-3 escindida, caspasa-7 escindida y caspasa-9 escindida.

8. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que la PS de la superficie celular se detecta por tinción con anexina V y en el que la fragmentación de ADN genómico se detecta por tinción TUNEL.

9. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que dicha ruta de señalización de MAPK está seleccionada del grupo que consiste en la ruta de señalización de MEK/ERK y la ruta de señalización de MEK/p38.

10. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que dicho miembro de la familia Bcl-2 está seleccionado del grupo que consiste en Bcl-xl y Mcl-1.

11. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3 o la reivindicación 10, en el que dicha proteína inhibidora de la apoptosis IAP está seleccionada del grupo que consiste en survivina, XIAP y cIAP1.

12. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, que comprende además detectar en dicha muestra biológica de prueba y dicha muestra biológica de control el nivel de al menos un marcador de citocinas de señalización de CD40.

13. El procedimiento de la reivindicación 12, en el que dicho marcador de citocinas está seleccionado del grupo que consiste en factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) , interleucina (IL) -6, IL-8, IL-10, factor estimulante de colonias de granulocitos-monocitos (GM-CSF) , factor de necrosis tumoral-a (TNF-a) , proteína 1 quimioatrayente de monocitos (MCP-1) y proteína 11 inflamatoria de macrófagos (MIP-11) .

14. El procedimiento de la reivindicación 12 ó 13, en el que una reducción en el nivel de al menos uno de dichos marcadores de citocinas en dicha muestra biológica de prueba con respecto a dicha muestra biológica de control es indicativo de un sujeto que se beneficiaría del tratamiento con dicho agente terapéutico anti-CD40.

15. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que dicho anticuerpo monoclonal anti-CD40 puede unirse específicamente a un antígeno CD40 humano expresado sobre la superficie de una célula que expresa CD40, modulando así la actividad de citotoxicidad mediada por células dependientes de anticuerpos (ADCC) , y en el que dicho biomarcador es un biomarcador de apoptosis.

16. El procedimiento de la reivindicación 15, en el que un aumento en el nivel de al menos uno de dichos biomarcadores de apoptosis dentro de dicha muestra biológica de prueba con respecto a dicha muestra biológica de control es indicativo de un sujeto que se beneficiaría del tratamiento con dicho anticuerpo anti-CD40.

17. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, que comprende además detectar en una muestra biológica de dicho sujeto el nivel de expresión de CD40 de la superficie celular, el nivel de expresión de CD40L de la superficie celular, o ambos, sobre células que expresan CD40 dentro de dicha muestra biológica.

18. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, que comprende además detectar el nivel de CD40 soluble en circulación o CD40L soluble en circulación en una muestra biológica recogida del sujeto.

19. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que detectar el nivel de dicho biomarcador comprende usar un anticuerpo para detectar la expresión de la proteína biomarcadora.

20. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que detectar el nivel de dicho biomarcador comprende hibridación de ácido nucleico.

21. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que detectar el nivel de dicho biomarcador comprende realizar RT-PCR cuantitativa.

22. El procedimiento de cualquier reivindicación precedente, en el que dicho anticuerpo anti-CD40 o fragmento de unión a antígeno del mismo está seleccionado del grupo que consiste en:

a) un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo que se une a un epítope que comprende los residuo.

8. 87 de la secuencia de CD40 humana mostrada en SEC ID Nº: 10 o SEC ID Nº: 12; y b) un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo que se une a un epítope que comprende los residuo.

8. 89 de la secuencia de CD40 humana mostrada en SEC ID Nº: 10 o SEC ID Nº: 12.

23. El procedimiento de cualquier reivindicación precedente, en el que dicho anticuerpo monoclonal anti-CD40 antagonista o fragmento de unión a antígeno del mismo está seleccionado del grupo que consiste en:

(i) un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo que comprende un dominio variable de la cadena ligera que contiene los residuos de la región determinante de la complementariedad (CDR) de SEC ID Nº: 2 y un dominio variable de la cadena pesada que contiene los residuos de la región determinante de la complementariedad (CDR) de SEC ID Nº: 4; y

(ii) un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo que comprende un dominio variable de la cadena ligera que contiene los residuos de la región determinante de la complementariedad (CDR) de SEC ID Nº: 6 y un dominio variable de la cadena pesada que contiene los residuos de la región determinante de la complementariedad (CDR) de SEC ID Nº: 7.

24. El procedimiento de la reivindicación 23, en el que dicho anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en:

(i) SEC ID Nº: 2;

(ii) SEC ID Nº: 4;

(iii) SEC ID Nº: 5;

(iv) SEC ID Nº: 2 y SEC ID Nº: 4;

(v) SEC ID Nº: 2 y SEC ID Nº: 5

(vi) SEC ID Nº: 6;

(vii) SEC ID Nº: 7

(viii) SEC ID Nº: 8

(ix) SEC ID Nº: 6 y SEC ID Nº: 7; y

(x) SEC ID Nº: 6 y SEC ID Nº: 8,

o un fragmento de unión a antígeno del mismo, en el que dicho fragmento retiene la capacidad de unirse específicamente a antígeno CD40 humano.

25. El procedimiento de cualquier reivindicación precedente, en el que dicho fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo anti-CD40 está seleccionado del grupo que consiste en un fragmento Fab, un fragmento F (ab') 2, un fragmento Fv y un fragmento Fv monocatenario.

26. El procedimiento de cualquier reivindicación precedente, en el que dicha enfermedad inflamatoria o enfermedad autoinmunitaria está seleccionada del grupo que consiste en lupus eritematoso sistémico (LES) , lupus discoide, nefritis lúpica, sarcoidosis, artritis juvenil, artritis reumatoide, artritis psoriásica, síndrome de Reiter, espondilitis anquilosante, artritis gotosa, rechazo de un trasplante de órgano o tejido, enfermedad de injerto frente a huésped, esclerosis múltiple, síndrome de hiper IgE, poliarteritis nodosa, cirrosis biliar primaria, enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, enfermedad celíaca (enteropatía sensible al gluten) , hepatitis autoinmune, anemia perniciosa, anemia hemolítica autoinmune, psoriasis, esclerodermia, miastenia grave, púrpura trombocitopénica autoinmune, tiroiditis autoinmune, enfermedad de Graves, tiroiditis de Hashimoto, enfermedad por complejos inmunes, síndrome de fatiga crónica y disfunción inmune (SFCDI) , polimiositis y dermatomiositis, crioglobulinemia, trombólisis, cardiomiopatía, pénfigo vulgar, fibrosis pulmonar intersticial, sarcoidosis, diabetes mellitus tipo I y tipo II, hipersensibilidad de tipo retardado tipo 1, 2, 3 y 4, alergia o trastornos alérgicos, asma, síndrome de Churg-Strauss (granulomatosis alérgica) , dermatitis atópica, dermatitis de contacto alérgica e irritante, urticaria, alergia mediada por IgE, aterosclerosis, vasculitis, miopatías inflamatorias idiopáticas, enfermedad hemolítica, enfermedad de Alzheimer y polineuropatía desmielinizante inflamatoria crónica.