Polipéptidos inmunógenos y anticuerpos monoclonales.

Ácido nucleico aislado seleccionado de entre el grupo que consiste en:

(a) un ácido nucleico que codifica un polipéptido de S. pneumoniae que presenta una secuencia que consiste enSEC ID nº 4;

(b) un ácido nucleico que codifica un polipéptido de S. pneumoniae que presenta al menos 90% de identidad conSEC ID nº 26;

(c) un ácido nucleico totalmente complementario a un ácido nucleico que codifica un polipéptido de S. pneumoniaede (a) o (b); y

(d) un ARN de (a) o (b), en el que U está sustituido por T.

Polipéptidos inmunógenos y anticuerpos monoclonales.

Campo técnico La presente invención se refiere a la inmunología, y más particularmente a provocar una respuesta inmunitaria frente a las bacterias.

Antecedentes El Streptococcus pneumoniae es un patógeno humano bastante ubicuo, que puede infectar a varios órganos, incluyendo los pulmones, el sistema nervioso central (SNC) , el oído medio, y el conducto nasal. La infección da como resultado diversos síntomas tales como bronquitis, neumonía, meningitis, infección de los senos nasales, y septicemia. El S. pneumoniae es una causa importante de meningitis bacteriana en seres humanos, y está asociado con mortalidad y morbilidad significativas a pesar del tratamiento con antibióticos (Quagliarello et al., (1992) N. Eng.

J. Med. 327: 869-872) .

Actualmente se dispone de dos vacunas neumocócicas. Una es una vacuna para adultos compuesta de 23 polisacáridos capsulares diferentes que, juntos, representan los tipos capsulares de aproximadamente 90% de las cepas que provocan infección neumocócica. Sin embargo, esta vacuna no es inmunógena en niños, un grupo de edad con susceptibilidad elevada a la infección neumocócica. En adultos, se ha demostrado que la vacuna es aproximadamente 60% eficaz frente a la neumonía bacterémica, pero es menos eficaz en adultos con mayor riesgo de infección neumocócica debido a la edad o a afecciones médicas subyacentes (Fedson, y Musher. 2004. “Pneumococcal Polysaccharide Vaccine”, p. 529-588. En Vaccines. S. A. Plotkin y W. A. Orenstein (eds.) , W. B. Saunders and Co., FiladelFia, PA; Shapiro et al., N. Engl. J. Med. 325:1453-1460 (1991) ) . No se ha demostrado que esta vacuna sea eficaz frente a la neumonía neumocócica no bacterémica, la forma más común de infección.

La segunda vacuna disponible es una vacuna conjugada 7-valente, que es eficaz frente a infecciones neumocócicas bacterémicas en niños menores de 2 años de edad. También ha demostrado eficacia frente a neumonía (Black et al., Arch. Pediatr. 11 (7) :485-489 (2004) ) . La producción de esta vacuna es complicada debido a la necesidad de producir 7 conjugados diferentes, y esto conduce a que la vacuna sea cara (aproximadamente $200/niño) . Además, la vacuna no realiza un buen trabajo cubriendo las infecciones en el mundo en desarrollo, donde son muy comunes los tipos no vacunales de Streptococcus pneumoniae (Di Fabio et al., Pediatr. Infect. Dis. J. 20:959-967 (2001) ; Mulholland, Trop. Med. Int. Health 10:497-500 (2005) ) . Esta vacuna no funciona tan bien frente a otitis media y colonización como lo hace frente a enfermedad invasiva. También se ha demostrado que el uso de la vacuna conjugada 7-valente ha conducido a un incremento en la colonización y enfermedad con cepas de tipos capsulares no representadas por los 7 polisacáridos incluidos en la vacuna (Bogaert et al., Lancet Infect. Dis. 4:144-154 (2004) ; Eskola et al., N. Engl. J. Med. 344:403-409 (2001) ; Mbelle et al., J. Infect. Dis. 180:1171-1176 (1999) ) . Por lo tanto, existe la necesidad de tratamientos eficaces para Streptococcus pneumoniae.

Sumario Se describen composiciones y métodos para provocar una respuesta inmunitaria frente a Streptococcus pneumoniae. Se proporcionan polipéptidos PhtD inmunógenos, y en particular sus fragmentos, derivados y variantes, así como ácidos nucleicos que los codifican. También se proporcionan anticuerpos monoclonales (e hibridomas que los producen) que tienen especificidad por tales polipéptidos, fragmentos, derivados o variantes. Se proporcionan además métodos para obtener y usar los polipéptidos inmunógenos, derivados, variantes y anticuerpos monoclonales.

Se describe en la presente memoria un ácido nucleico aislado seleccionado del grupo que consiste en: a) un ácido nucleico que codifica un polipéptido de S. pneumoniae que tiene al menos 90% de identidad con SEC ID NO:2; b) un ácido nucleico completamente complementario a un ácido nucleico que codifica un polipéptido de S. pneumoniae que tiene al menos 90% de identidad con SEC ID NO:2; y c) un ARN de (a) o (b) , en el que U se sustituye por T.

La identidad de secuencia puede ser al menos 85%, 90%, y más preferiblemente 95 a 100%.

También se describe un polipéptido aislado que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 85%, 90%, 95% o 100% de identidad con SEC ID NO:2, y un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a un polipéptido que tiene al menos 80%, 85%, 90%, 95% o 100% de identidad con SEC ID NO:2.

En otro caso, se describe un ácido nucleico aislado seleccionado del grupo que consiste en: a) un ácido nucleico que codifica un polipéptido de S. pneumoniae que tiene al menos 80% de identidad con SEC ID NO:3; b) un ácido nucleico completamente complementario a un ácido nucleico que codifica un polipéptido de S. pneumoniae que tiene al menos 80% de identidad con SEC ID NO:3; y c) un ARN de (a) o (b) , en el que U se sustituye por T.

La identidad de secuencia puede ser al menos 85%, 90%, y más preferiblemente 95 a 100%.

También se describe un polipéptido aislado que comprende una secuencia de ácidos nucleicos que tiene al menos 80%, 85%, 90%, 95% o 100% de identidad con SEC ID NO:3, y también un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a un polipéptido que tiene al menos 80%, 85%, 90%, 95% o 100% de identidad con SEC ID NO:3.

Según otro aspecto de la invención, se proporciona un ácido nucleico aislado seleccionado del grupo que consiste en: a) un ácido nucleico que codifica un polipéptido de S. pneumoniae que tiene al menos 80% de identidad con SEC ID NO:4; b) un ácido nucleico completamente complementario a un ácido nucleico que codifica un polipéptido de S. pneumoniae que tiene al menos 80% de identidad con SEC ID NO:4; y c) un ARN de (a) o (b) , en el que U se sustituye por T.

Según una forma de realización preferida de la presente invención, la identidad de secuencia es al menos 85%, 90%, y más preferiblemente 95 a 100%.

La presente invención también proporciona un polipéptido aislado que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 85%, 90%, 95% o 100% de identidad con SEC ID NO:4, y también un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a un polipéptido que tiene al menos 80%, 85%, 90%, 95% o 100% de identidad con SEC ID NO:4.

Según un aspecto adicional de la invención, se proporciona un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a un determinante antigénico de un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos como se expone en SEC ID NO:4.

Según una forma de realización preferida de la presente invención, el determinante antigénico al que se une específicamente el anticuerpo monoclonal está situado en un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos como se expone en SEC ID NO: 4 en una región que comprende el aminoácido 1 y el aminoácido 101.

También se describe en la presente memoria un fragmento inmunógeno seleccionado del grupo que consiste en SEC ID NO.:2, SEC ID NO.:3 y SEC ID NO.:4, o una variante del mismo seleccionado del grupo que consiste en SEC ID NO.:15, SEC ID NO.:16 y SEC ID NO.:17.

En otro caso, se describe un método para inmunizar un hospedante frente a infección y un método para tratar una infección por una bacteria Streptococcus sp., que comprende administrar al hospedante al menos un polipéptido de PhtD seleccionado del grupo que consiste en SEC ID NO.:2, SEC ID NO.:3 y SEC ID NO.:4, o una variante del mismo seleccionado del grupo que consiste en SEC ID NO.:15, SEC ID NO.:16 y SEC ID NO.:17.

En un caso adicional, se describe un anticuerpo monoclonal que tiene la misma especificidad de unión a antígenos que los anticuerpos producidos por el hibridoma que tiene la Designación ATCC nº XXXX.

El anticuerpo monoclonal se puede seleccionar del grupo que consiste en IB12 producido por el hibridoma de ratón que tiene la Designación ATCC nº XXXX, 4D5 producido por el hibridoma de ratón que tiene la Designación ATCC nº XXXX, y 9E11 producido por el hibridoma de ratón que tiene la Designación ATCC nº XXXX.

También se describe un método para prevenir infección por, y un método para tratar una infección por, una bacteria Streptococcus sp. en un hospedante, que comprende administrar al hospedante al menos un anticuerpo monoclonal seleccionado del grupo que consiste en IB12 producido por el hibridoma de ratón que tiene la Designación ATCC nº XXXX, 4D5 producido por el hibridoma de ratón que tiene la Designación ATCC nº XXXX, y 9E11 producido por el hibridoma de ratón que tiene la Designación ATCC nº XXXX.

Se pueden administrar al menos dos anticuerpos monoclonales para prevenir la infección y/o para tratar... [Seguir leyendo]

1. Ácido nucleico aislado seleccionado de entre el grupo que consiste en:

(a) un ácido nucleico que codifica un polipéptido de S. pneumoniae que presenta una secuencia que consiste en SEC ID nº 4;

(b) un ácido nucleico que codifica un polipéptido de S. pneumoniae que presenta al menos 90% de identidad con SEC ID nº 26;

(c) un ácido nucleico totalmente complementario a un ácido nucleico que codifica un polipéptido de S. pneumoniae de (a) o (b) ; y

(d) un ARN de (a) o (b) , en el que U está sustituido por T.

2. Vector de expresión recombinante que comprende el ácido nucleico según la reivindicación 1, enlazado operablemente a un elemento regulador de la transcripción.

3. Célula que comprende el vector de expresión recombinante según la reivindicación 2.

4. Ácido nucleico aislado según la reivindicación 1, en el que el polipéptido de S. pneumoniae provoca una respuesta inmunitaria.

5. Polipéptido aislado que presenta:

(i) una secuencia de aminoácidos de SEC ID nº 4; o

(ii) al menos 90% de identidad con SEC ID nº 26.

6. Anticuerpo monoclonal que se une específicamente a:

(i) un polipéptido que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID nº 4;

(ii) un determinante antigénico dispuesto en un péptido que presenta una secuencia de aminoácidos como se expone en SEC ID nº 4;

(iii) un polipéptido que presenta al menos 90% de identidad con SEC ID nº 24, opcionalmente en el que el anticuerpo monoclonal se une específicamente a un péptido que consiste en SEC ID nº 26; o

(iv) un péptido que presenta al menos 90% de identidad con SEC ID nº 26.

7. Composición inmunógena que comprende un polipéptido al menos 90% idéntico a SEC ID nº 26, opcionalmente en la que el polipéptido consiste en SEC ID nº 26.

8. Polipéptido inmunógeno seleccionado de entre el grupo que consiste en SEC ID nº 4 y SEC ID nº 26.

9. Composición que comprende al menos un polipéptido inmunógeno según la reivindicación 8 y un vehículo farmacéuticamente aceptable, que comprende opcionalmente además un adyuvante o al menos otra proteína estreptocócica inmunógena o su fragmento.

10. Composición según la reivindicación 9, en la que la composición resulta adecuada para su administración sobre una superficie mucosa.

11. Composición según la reivindicación 10, en la que la composición es una pulverización nasal, una disolución para nebulizador o un producto de inhalación en aerosol.

12. Polipéptido o composición inmunógeno/a según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, para su utilización en la generación de anticuerpos específicos para PhtD en un sujeto.

13. Polipéptido o composición inmunógeno/a según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, para su utilización en la reducción del transporte nasal de neumococos en un sujeto.

14. Polipéptido o composición inmunógeno/a según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, para su utilización en la reducción del riesgo de infección neumocócica en un sujeto, opcionalmente en el que:

(i) la infección neumocócica es meningitis, otitis media, neumonía, o uremia hemolítica; o

(ii) el transporte nasal de neumococos no está eliminado.

15. Al menos un polipéptido de PhtD o una variante del mismo, seleccionado de entre el grupo como se define en la reivindicación 8, para su utilización en la inmunización de un hospedante contra una infección por una bacteria Streptococcus sp., opcionalmente en el que se usa más de un fragmento.

16. Composición como se define en la reivindicación 9, para su utilización en el tratamiento de una infección en un hospedante por una bacteria Streptococcus sp., opcionalmente en la que la composición comprende más de un polipéptido.

17. Composición que comprende un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a un polipéptido que presenta al menos 90% de identidad con SEC ID nº 26, para su utilización en la inhibición de una infección por la especie Streptococcus en un hospedante.

18. Composición que presenta un primer anticuerpo monoclonal que se une específicamente a un determinante antigénico de SEC ID nº 26, y al menos un segundo anticuerpo monoclonal que se une específicamente a un determinante antigénico de SEC ID nº 4, que no se encuentra en SEC ID nº 26, en la que la composición proporciona un efecto sinérgico cuando se administra al sujeto.

19. Polipéptido, ácido nucleico, vector de expresión recombinante, anticuerpo monoclonal o composición según cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 4 a 11, para su utilización como producto farmacéutico.

20. Polipéptido, ácido nucleico, vector de expresión recombinante, anticuerpo monoclonal o composición según la reivindicación 19, para su utilización en la provocación de una respuesta inmunitaria frente a S. pneumoniae.