Polipéptido derivado de enterococo y su uso para vacunación.

Uso de un polipéptido de acuerdo con la SEC ID Nº 1 para la generación de anticuerpos opsónicos contraEnterococcus.

Polipéptido derivado de enterococo y su uso para vacunación Los enterococos están entre los tres patógenos nosocomiales más comunes y, debido a sus resistencias a múltiples antibióticos, causan morbilidad y mortalidad sustanciales, especialmente entre pacientes de cuidados intensivos y los inmunodeprimidos. Aunque en la última década se han presentado varios nuevos antibióticos, la resistencia contra estos nuevos fármacos se está desarrollando y propagando rápidamente. Una enfermedad sistémica potencialmente letal tal como endocarditis causada por cepas resistentes puede ser, a veces, intratable. Por lo tanto, se necesitan desesperadamente estrategias de tratamiento y prevención alternativas para contrarrestar el incremento de clones resistentes de forma múltiple en hospitales y clínicas particulares en todo el mundo. Una mejor comprensión de las diferentes estructuras de la superficie celular de enterococos ayudará a dirigir nuevos enfoques terapéuticos y profilácticos.

Se sabe que todas las bacterias gram positivas (también aquellas que pertenecen al género Enterococcus) contienen en la pared celular varios carbohidratos y proteínas específicas. En el curso de la presente invención, se ha identificado una proteína que desempeña un posible papel en el equilibrio dinámico de un componente fundamental de la pared celular externa (es decir peptidoglucano) . Las proteínas que pertenecen a esta familia pueden actuar como peptidasas de la pared celular que degradan el peptidoglucano de las bacterias durante el crecimiento y la división celular.

Teng Fang et al., (Infection and Immunity 71: 5033-5042, 2003) desvelan un homólogo de Sag A en Enterococcus faecium, que parece estar implicado en el metabolismo de la pared celular. La proteína es inmunógena.

El documento US 6 583 275 describe proteínas de Enterococcus faecium.

Sorprendentemente, se ha comprobado que un polipéptido que probablemente está ubicado en la superficie externa de la célula bacteriana puede usarse para la producción de vacunas, dado que han sido identificados anticuerpos protectores dirigidos contra partes de dicho polipéptido.

La respuesta inmunitaria humoral está mediada por moléculas de anticuerpo secretadas por células plasmáticas. El antígeno que se une al receptor antigénico de células B, señala células B y es, al mismo tiempo, internalizado y procesado a péptidos que activan células T auxiliares armadas. Las señales procedentes del antígeno unido y de la célula T auxiliar inducen a la célula B a proliferar y diferenciarse en células plasmáticas que secretan un anticuerpo específico. Estos anticuerpos protegen al huésped frente a la infección de tres maneras principales. En primer lugar, dichos anticuerpos pueden inhibir los efectos tóxicos o la infectividad de patógenos uniéndose a ellos. Dichos anticuerpos se denominan neutralizantes. En segundo lugar, recubriendo los patógenos, dichos anticuerpos pueden permitir que células accesorias que reconocen las partes Fc de matrices de anticuerpos ingieran e inactiven al patógeno. Este proceso se denomina opsonización. En tercer lugar, los anticuerpos pueden desencadenar la activación del sistema del complemento. Las proteínas del complemento pueden potenciar fuertemente la opsonización o pueden inactivar directamente ciertas células bacterianas.

Para la producción de vacunas, es importante que el antígeno produzca anticuerpos que inhiban la actividad patógena del microorganismo patógeno. Los anticuerpos protectores producidos por una vacuna tienen, por lo tanto, el efecto de neutralización, opsonización y activación del complemento, con lo cual anticuerpos inducidos por un antígeno específico también pueden tener dos o incluso tres de las actividades protectoras.

La presente invención proporciona el uso del polipéptido de acuerdo con la SEC ID Nº 1 y el anticuerpo monoclonal, tal como se definen en las reivindicaciones adjuntas.

La SEC ID Nº 1 tiene la siguiente secuencia de aminoácidos:

(SEC ID Nº 1)

En una realización preferida, el polipéptido de la SEC ID Nº 1 se usa como conjugado, con lo que el antígeno está unido covalentemente a un inmunoportador. Dicho inmunoportador puede ser un polipéptido o una proteína o una molécula que contiene carbohidratos (tal como por ejemplo un polisacárido capsular o glucoconjugado) que mejora la interacción entre células T y B para la inducción de una respuesta inmunitaria contra el antígeno. Esto puede preferirse para vacunas destinadas al uso en pacientes con actividad reducida del sistema inmunitario. Dado que las infecciones por enterococos son, frecuentemente, un problema en hospitales y clínicas particulares, dichos conjugados son particularmente preferidos para dichos pacientes. Los inmunoportadores adecuados de acuerdo con la presente invención comprenden toxoide tetánico, toxoide diftérico, toxina A de Pseudomonas aeruginosa o sus derivados de la misma. Moléculas que contienen carbohidratos tales como polisacáridos capsulares o ácidos teicoicos también pueden servir como socio de conjugación para el polipéptido mencionado anteriormente o fragmentos del mismo. En una realización espacialmente preferida, se usan dichos fragmentos del inmunoportador que estimulan la respuesta inmunitaria en el paciente a tratar sin tener, sin embargo, el efecto secundario no deseado que dichas proteínas pueden producir cuando se usan en una forma no modificada.

El enlace covalente entre el antígeno y el inmunoportador puede proporcionarse mediante un enlace químico directo o mediante un separador. Algunas veces, moléculas cortas que tienen dos grupos reactivos en ambos extremos se hacen reaccionar con el antígeno y el inmunoportador para producir una molécula enlazada covalentemente.

En una alternativa, la molécula usada como vacuna (antígeno e inmunoportador) puede producirse de forma recombinante, con lo que fragmentos de genes adecuados son enlazados entre sí y son insertados en un vector apropiado. Dicho vector es introducido en una célula huésped adecuada y la célula huésped (por ejemplo E. coli, Bacillus, levadura o células de insecto) produce el polipéptido o fragmento del mismo tal como se ha definido anteriormente, junto con el inmunoportador como una molécula.

El polipéptido, en solitario o acoplado a un inmunoportador, puede usarse para el tratamiento o la prevención de infecciones bacterianas. Dicho medicamento es una vacuna que comprende preferentemente también un adyuvante farmacéuticamente aceptable. El adyuvante promueve los anticuerpos protectores del subtipo IgG. Los adyuvantes típicos incluyen adyuvante completo de Freund (ACF) , adyuvante incompleto de Freund (AIF) , alumbre y otros adyuvantes adecuados para uso humano (por ejemplo partículas similares a virus) . Polímeros como sulfato de dextrano han demostrado ser también un potente estimulador de anticuerpos IgG contra el antígeno de la superficie celular bacteriana.

Una vacuna activa es administrada al paciente, preferentemente antes de que se produzca una infección. Dicha vacunación puede aplicarse, por lo tanto, regularmente a pacientes en riesgo (por ejemplo ancianos, pacientes antes de un transplante de un órgano sólido o de médula ósea) para estimular su respuesta inmunitaria y para evitar una infección en un hospital o una clínica particular.

En circunstancias específicas también puede ser posible, sin embargo, aplicar la vacuna en fases tempranas de la infección para producir anticuerpos protectores que inactivan las bacterias que pertenecen al género Enterococcus. En una realización preferida, la vacuna de la presente invención proporciona protección contra diferentes cepas de Enterococcus faecium y posiblemente también contra cepas de Enterococcus faecalis, dado que existe una amplia homología de secuencia entre estas especies.

Los anticuerpos inducidos por la proteína de la SEC ID Nº 1 son protectores y facilitan la fagocitosis. Dado que dichos anticuerpos protectores y, en particular, opsónicos son preferidos, se desea usar aquellas partes del polipéptido de la SEC ID Nº 1 que producen anticuerpos que tienen propiedades opsónicas.

La formulación farmacéutica de un medicamento que se usará como vacuna es conocida por el experto en la materia. Habitualmente, una solución del antígeno posiblemente acoplado a un inmunoportador es disuelta en una solución fisiológicamente aceptable como un tampón. La solución debe estabilizarse para evitar una precipitación no deseada de los compuestos inmunológicamente activos. La vacuna es producida preferentemente en forma de una solución adaptada para inyección, preferentemente inyección por vía intramuscular. Otras formas de formulaciones farmacéuticas... [Seguir leyendo]

1. Uso de un polipéptido de acuerdo con la SEC ID Nº 1 para la generación de anticuerpos opsónicos contra Enterococcus.

2. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el polipéptido está enlazado covalentemente a un 5 inmunoportador, en particular una proteína, un carbohidrato y/o un glucoconjugado.

3. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en el que dicho polipéptido se usa junto con un adyuvante farmacéuticamente aceptable.

4. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dichos anticuerpos opsónicos son contra Enterococcus faecium o E. faecalis.

5. Uso de un polipéptido de acuerdo con la SEC ID Nº 1 para la preparación de un medicamento para el tratamiento

o la prevención de una infección bacteriana.

6. El uso de acuerdo con la reivindicación 5, en el que el polipéptido está enlazado covalentemente a un inmunoportador, en particular una proteína, un carbohidrato y/o un glucoconjugado.

7. El uso de acuerdo con la reivindicación 5 o 6, en el que el medicamento es una vacuna.

8. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, en el que dicho polipéptido se usa junto con un adyuvante farmacéuticamente aceptable.

9. Anticuerpo monoclonal que reacciona específicamente con un polipéptido de acuerdo con la SEC ID Nº 1, o dicho polipéptido enlazado covalentemente a un inmunoportador, caracterizado porque el anticuerpo es opsónico contra Enterococcus.