Mutante antagonista de anticuerpos ANTI-CD40.

Una composición farmacéutica para uso en un procedimiento de prevención o tratamiento de rechazo detrasplantes,

enfermedades autoinmunes, alergia o inhibición del factor de coagulación sanguínea VIII, quecomprende un anticuerpo monoclonal como un principio activo, en la que el anticuerpo monoclonal consiste en doscadenas pesadas, cada una representada por una secuencia de aminoácidos que se extiende desde Q en laposición 27 a K en la posición 474 en SEC ID Nº 140 y dos cadenas ligeras, cada una representada por unasecuencia de aminoácidos que se extiende desde A en la posición 23 a C en la posición 235 en SEC ID Nº 142.

Mutante antagonista de anticuerpo anti-CD40

Campo técnico

La presente invención se refiere a un anticuerpo anti-CD40 que reconoce CD40 que es un tipo de molécula de membrana celular asociada con la inmunidad. Además, la presente invención se refiere a un anticuerpo con una mutación en la región constante del anticuerpo humano o con una subclase que tiene su parte sustituida para reducir una actividad ADCC y/o CDC, manteniendo a la vez una actividad antagonista.

Antecedentes de la técnica

1. CD40

CD40 es un antígeno que tiene un peso molecular de 50 kDa que está presente en la superficie de membrana celular, y se expresa en linfocitos B, células dendríticas (CD) , algunos tipos de células cancerosas y células epiteliales tímicas. Se sabe que CD40 desempeña un papel importante en la proliferación y diferenciación de linfocitos B y CD. CD40 se identificó como un antígeno expresado en la superficie de linfocitos B humanos (E. A. Clark y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 4494, 1986; e I. Stamenkovic y col., EMBO J. 8: 1403, 1989) y se ha considerado un miembro de la familia del receptor de TNF que incluye receptores de NGF de baja afinidad, receptores de TNF, CD27, OX40 y CD30. Se han clonado recientemente ligados (CD40L) para CD40 humanos y murinos y se ha descubierto que son proteínas de membrana de tipo II y se expresan en linfocitos T CD4+ activados. También se ha descubierto que CD40L introduce fuertes señales para activación en linfocitos B humanos o murinos.

En células dendríticas, se ha observado que CD40 se expresa más que en linfocitos B, y se ha puesto de manifiesto que CD40 desempeña un papel importante en células dendríticas. La unión de CD40 con CD40L activa células presentadoras de antígenos (APC) , es decir, expresa moléculas coestimuladoras tales como CD80 (B7-1) y CD86 (B7-2) o potencia la producción de IL-2 (Caux, C., y col.: Activation of human dendritic cells through CD40 crosslinking. J. Exp. Med., 180: 1263, 1994; y Shu, U., y col.: Activated T cells induce interleukin-12 production by monocyte via CD40 - CD40 ligand interaction. Eur. J. Immunol., 25: 1125, 1995) . Las células dendríticas tienen una fuerte capacidad presentadora de antígenos y una fuerte capacidad para activar linfocitos T auxiliares (Th) . También se cree que las células dendríticas controlan la diferenciación de linfocitos Th vírgenes en linfocitos Th1 o Th2. Cuando se cultivan monocitos de sangre periférica, que son células dendríticas mieloides, en presencia de GM-CSF e IL-4, y se maduran por CD40L, las células dendríticas maduradas resultantes (DC1) pueden producir IL-12 in vitro, y estimular y activar linfocitos Th vírgenes alogénicos para inducir linfocitos T productores de IFNy (es decir, para promover su diferenciación a Th1) . Esta acción se inhibe por anticuerpo anti-IL12 y por lo tanto puede efectuarse mediante IL-12. Por otro lado, cuando se cultivan linfocitos T plasmacitoides, que están presentes en regiones T linfoides y sangre periférica, en presencia de IL-3 y ligando de CD40, se muestra que las células dendríticas linfoides resultantes (DC2) son incapaces de producir IL-12, y estimulan y activan linfocitos Th vírgenes alogénicos para inducir linfocitos T productores de IL-4, lo que indica promoción de su diferenciación a Th2. Se cree que los linfocitos Th1 están implicados en la activación de inmunidad celular, mientras que los linfocitos Th2 están asociados con potenciación de la inmunidad humoral así como restricción de inmunidad celular. Cuando se activan linfocitos T citotóxicos (CTL) con la ayuda de linfocitos Th1, pueden eliminar patógenos (varios tipos de virus, listeria, bacterias de la tuberculosis, protozoos de toxoplasma, etc.) que crecen en el citoplasma y células tumorales.

Se ha demostrado que los anticuerpos anti-CD40 monoclonales, que reconocen CD40 expresado en la superficie de membrana, tienen diferentes actividades biológicas que los linfocitos B. Los anticuerpos anti-CD40 monoclonales se clasifican en general en anticuerpos agonistas y antagonistas frente a la interacción entre CD40 y CD40L.

2. Anticuerpos agonistas Se sabe que los anticuerpos agonistas activan linfocitos B. Por ejemplo, se ha indicado que los anticuerpos anti-CD40 inducen adhesión celular (Barrett y col., J. Immunol. 146: 1722, 1991; y Gordon y col., J. Immunol. 140: 1425, 1998) , aumentan el tamaño celular (Gordon y col., J. Immunol. 140: 1425, 1998; y Valle y col., Eur. J. Immunol. 19: 1463, 1989) , inducen la división celular de linfocitos B activados solamente por un anticuerpo anti-IgM, anticuerpo anti-CD20 o éster de forbol (Clark y Ledbetter, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 4494, 1986; Gordon y col., LEUCOCYTE TYPING III. A. J. McMicheal ed. Oxford University Press. Oxford. p.426; y Paulie y col., J. Immunol.

142: 590, 1989) , inducen la división celular de linfocitos B en presencia de IL4 (Valle y col., Eur. J. Immunol. 19: 1463, 1989; y Gordon y col., Eur. J. Immunol. 17: 1535, 1987) , inducen la expresión de IgE por células cultivadas estimuladas con IL-4 y privadas de linfocitos T (Jabara y col., J. Exp. Med. 172: 1861, 1990; y Gascan y col., J. Immunol. 147: 8, 1991) , inducen la expresión de IgG e IgM por las células cultivadas (Gascan y col., J. Immunol.

147: 8, 1991) , secretan FceRII/CD23 soluble a partir de células mediante IL-4 (Gordon y Guy, Immunol. Today 8: 39, 1987; y Cairns y col., Eur. J. Immunol. 18: 349, 1988) , potencian la expresión de FceRII/CD23 soluble en las células mediante IL4 (Challa, A., Allergy, 54: 576, 1999) , y promueven la producción de IL-6 (Clark y Shu, J. Immunol. 145: 1400, 1990) . Además, se ha indicado que la adición de IL-4 y un anticuerpo anti-CD40 a linfocitos B de cultivo primario humanos en presencia de células adhesivas CDw32 + condujo al establecimiento de linfocitos B clonados derivados de las mismas (Bancherauet y col., Science 241: 70, 1991) , y se inhibió la apoptosis de células de centro germinal a través de CD40 independientemente de si su receptor de antígenos estaba activo o inactivo (Liu y col., Nature 342: 929, 1989) . Como se ha descrito anteriormente, se ha identificado CD40 como antígeno expresado en la superficie de linfocitos B humanos y, en consecuencia, se ha evaluado la mayoría de los anticuerpos aislados, como un índice, principalmente usando su potencia e inducción para proliferación y/o diferenciación de linfocitos B humanos, o su actividad de inducción para muerte celular de células cancerosas (Katira, A. y col., LEUKOCYTE TYPING V. S. F. Schlossossman, y col. eds. p.547. Oxford University Press. Oxford; W. C. Flansow y col., LEUKOCYTE TYPING V. S. F. Schlossossman, y col. eds. p. 555. Oxford University Press. Oxford; y J. D. Pound y col., International Immunology, 11: 11, 1999) .

Se ha demostrado que el anticuerpo anti-CD40 madura DC (Z. H. Zhou y col., Hybridoma, 18: 471, 1999) . Además, se ha indicado que el papel de los linfocitos T CD4 en la sensibilización de linfocitos T CD8 específicos de antígeno está en la activación de DC mediante señalización CD40-CD40L, y se ha descubierto que el anticuerpo monoclonal anti-CD40 (mAb) es capaz de reemplazar linfocitos T auxiliares CD40 en la activación de células dendríticas (DC) (Shoenberger, S. P., y col.: T-cell help for cytotoxic T lymphocytes is mediated by CD40 - CD40L interactions. Nature, 480, 1998) . Además, se ha descubierto que la administración de un anticuerpo anti-CD40 en ratones es capaz de proteger el cuerpo del animal de células tumorales que expresan CD40 así como células tumorales que no expresan CD40 (French, R. R., y col.: CD40 antibody evokes a cytotoxic T-cell response that eradicates lymphoma and bypasses T-cell help. Nature Medicine, 5, 1999) .

Se espera que los anticuerpos anti-CD40 agonistas sean eficaces para el tratamiento de enfermedades infecciosas, debido a bacterias, virus, etc., cáncer y otras, basándose en sus funciones descritas anteriormente. Se describen anticuerpos anti-CD40 con actividades agonistas superiores en el documento WO 02/088186. Los ejemplos representativos de estos anticuerpos agonistas son anticuerpos KM341-1-19 y 2105. El hibridoma KM341-1-19 que produce el anticuerpo KM341-1-19 y el hibridoma 2105 que produce el anticuerpo 2105 se presentaron el 27 de Septiembre de 2001 y 17 de Abril de 2002, respectivamente, para su depósito internacional según el Tratado de Budapest, al Depositario de Organismos de Patente Internacional, Instituto Nacional de Ciencia y Tecnología Industrial Avanzada (central 6, 1-1, Higashi 1, Tsukuba, Ibaraki, Japón) . Sus números de acceso son FERM BP7759 (KM341-1-19) y FERM BP-8024 (2105) .

3. Anticuerpos antagonistas Tomando en consideración, por otro lado, que CD40 desempeña un papel importante en... [Seguir leyendo]

1. Una composición farmacéutica para uso en un procedimiento de prevención o tratamiento de rechazo de trasplantes, enfermedades autoinmunes, alergia o inhibición del factor de coagulación sanguínea VIII, que comprende un anticuerpo monoclonal como un principio activo, en la que el anticuerpo monoclonal consiste en dos cadenas pesadas, cada una representada por una secuencia de aminoácidos que se extiende desde Q en la posición 27 a K en la posición 474 en SEC ID Nº 140 y dos cadenas ligeras, cada una representada por una secuencia de aminoácidos que se extiende desde A en la posición 23 a C en la posición 235 en SEC ID Nº 142.

2. Uso de un anticuerpo monoclonal para producción de una composición farmacéutica para prevención o tratamiento de rechazo de trasplantes, enfermedades autoinmunes, alergia o inhibición del factor de coagulación sanguínea VIII, en el que el anticuerpo monoclonal consiste en dos cadenas pesadas, cada una representada por una secuencia de aminoácidos que se extiende desde Q en la posición 27 a K en la posición 474 en SEC ID Nº 140 y dos cadenas ligeras, cada una representada por una secuencia de aminoácidos que se extiende desde A en la posición 23 a C en la posición 235 en SEC ID Nº 142.