Mutaciones de K-ras y B-raf y terapia con anticuerpos anti-EGFr.

Método de predicción de si un tumor será insensible al tratamiento con un anticuerpo frente a EGFr,

que comprende determinar la presencia o ausencia de una mutación de B-raf V600E en una muestra de dicho tumor; en el que la presencia de la mutación de B-raf indica que el tumor será insensible al tratamiento con el anticuerpo frente a EGFr.

Mutaciones de K-ras y B-raf y terapia con anticuerpos anti-EGFr

La presente solicitud se refiere a mutaciones de K-ras, a polinucleótidos que codifican para polipéptidos de K-ras mutantes y a métodos de identificación de mutaciones de K-ras. La presente solicitud también se refiere a mutaciones de B-raf, a polinucleótidos que codifican para polipéptidos de B-raf mutantes, a vectores que contienen esos polinucleótidos y a métodos de identificación de mutaciones de B-raf. La presente solicitud también se refiere a métodos de diagnóstico de cáncer; y a métodos y kits para predecir la utilidad de agentes de unión especifica anti-EGFr en el tratamiento de tumores.

Antecedentes

Determinadas aplicaciones de anticuerpos monoclonales en terapia contra el cáncer se basan en la capacidad del anticuerpo para suministrar específicamente a los tejidos cancerosos funciones efectoras citotóxicas tales como fármacos, toxinas o isotipos que potencian la inmunidad. Un enfoque alternativo es utilizar anticuerpos monoclonales para afectar directamente a la supervivencia de células tumorales privándolas de señales de proliferación extracelulares esenciales, tales como las mediadas por factores de crecimiento a través de sus receptores celulares. Una de las dianas atractivas en este enfoque es el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFr) , que se une a EGF y factor de crecimiento transformante a (TGFα) (véanse, por ejemplo, Ullrich et al., Cell 61: 203-212, 1990; Baselga et al., Pharmacol. Ther. 64: 127-154, 1994; Mendelsohn et al., en Biologic Therapy of Cancer 607-623, Filadelfia: J.B. Lippincott Co., 1995; Fan et al., Curr. Opin. Oncol. 10: 67-73, 1998) . La unión de EGF o TGFα a EGFr, una glicoproteína transmembrana de la superficie celular de 170 kDa, desencadena una cascada de acontecimientos bioquímicos celulares, incluyendo autofosforilación de EGFr e internalización, que culmina en proliferación celular (véase, por ejemplo, Ullrich et al., Cell 61: 203-212, 1990) .

Varias observaciones implican a EGFr en el soporte del desarrollo y la progresión de tumores sólidos humanos. Se ha demostrado que EGFr se sobreexpresa en muchos tipos de tumores sólidos humanos (véanse, por ejemplo, Mendelsohn Cancer Cells 7:359 (1989) , Mendelsohn Cancer Biology 1: 339-344 (1990) , Modjtahedi y Dean lnt'l J. Oncology 4:277-296 (1994) ) . Por ejemplo, se ha observado sobreexpresión de EGF-r en determinados carcinomas de pulmón, de mama, de colon, gástrico, de cerebro, de vejiga, de cabeza y cuello, de ovario y de próstata (véase, por ejemplo, Modjtahedi y Dean Int'l J. Oncology 4: 277-296 (1994) ) . Se ha notificado que el aumento en los niveles de receptor está asociado con un mal pronóstico clínico (véanse, por ejemplo, Baselga et al. Pharmacol. Ther. 64: 127-154, 1994; Mendelsohn et al., biologic Therapy of Cancer págs. 607-623, Filadelfia: J.B. Lippincott Co., 1995; Modjtahedi et al., Intl. J. of Oncology 4:277-296, 1994; Gullick, Br. Medical Bulletin, 47: 87-98, 1991; Salomon et al., Crit. Rev. Oncol. Hematol. 19: 183-232, 1995) . Se ha demostrado que tanto el factor de crecimiento epidérmico (EGF) como el factor de crecimiento transformante-alfa (TGF-α) se unen a EGF-r y conducen a proliferación celular y crecimiento tumoral. En muchos casos, el aumento de la expresión de EGFr en superficie estaba acompañado por la producción de TGFα o EGF por las células tumorales, lo que sugiere la implicación de un control del crecimiento autocrino en la progresión de esos tumores (véanse, por ejemplo, Baselga et al. Pharmacol. Ther. 64: 127-154, 1994; Mendelsohn et al., Biologic Therapy of Cancer págs. 607-623, Filadelfia: J.B. Lippincott Co., 1995; Modjtahedi et al., lntl. J. of Oncology 4:277-296, 1994; Salomon et al., Crit. Rev. Oncol. Hematol. 19: 183-232, 1995) .

Por tanto, determinados grupos han propuesto que anticuerpos contra EGF, TGF-α y EGF-r pueden ser útiles en la terapia de tumores que expresan o sobreexpresan EGF-r (véanse, por ejemplo, Mendelsohn Cancer Cells 7:359 (1989) , Mendelsohn Cancer Biology 1: 339-344 (1990) , Modjtahedi y Dean Int'l J. Oncology 4: 277-296 (1994) , Tosi et al. Int'l J. Cancer 62:643-650 (1995) ) . De hecho, se ha demostrado que anticuerpos anti-EGF-r que bloquean la unión de EGF y TGF-α al receptor parecen inhibir la proliferación de células tumorales. Sin embargo, al mismo tiempo, anticuerpos anti-EGF-r no parecen inhibir el crecimiento celular independiente de EGF y TGF-α (Modjtahedi y Dean Int'l J. Oncology 4:277-296 (1994) ) .

Se han generado anticuerpos monoclonales especificas frente al EGFr humano, que pueden neutralizar la unión de EGF y TGFα a células tumorales e inhibir la proliferación celular mediada por ligando In vitro, a partir de ratones y ratas (véanse, por ejemplo, Baselga et al., Pharmacol. Ther. 64: 127-154, 1994; Mendelsohn et al., en Biologic Therapy of Cancer págs. 607-623, Filadelfia: J.B. Lippincott Co., 1995; Fan et al., Curr. Opin. Oncol. 10: 67-73, 1998; Modjtahedi et al., lntl. J. Oncology 4: 277-296, 1994) . Algunos de estos anticuerpos, tales como los anticuerpos monoclonales de ratón 108, 225 (véase, por ejemplo, Aboud-Pirak et al., J. Natl. Cancer lnst. 80: 1605-1611, 1988) y 528 (véanse, por ejemplo, Baselga et al., Pharmacol. Ther. 64: 127-154, 1994; Mendelsohn et al., en Biologic Therapy of Cancer págs. 607-623, Filadelfia: J.B. Lippincott Co., 1995) o los de rata ICR16, ICR62 e ICR64 (véanse, por ejemplo, Modjtajedi et al., lntl. J. Oncology 4: 277-296, 1994; Modjtahedi et al., Br. J. Cancer 67: 247-253, 1993; Modjtahedi et al., Br. J. Cancer 67: 254-261, 1993) , se evaluaron extensamente por su capacidad para afectar al crecimiento tumoral en modelos de ratón de xenoinjerto. La mayoría de los anticuerpos monoclonales anti-EGFr eran eficaces en la prevención de la formación de tumores en ratones atímicos cuando se administraron junto con las células tumorales humanas (Baselga et al. Pharmacol. Ther. 64: 127-154, 1994; Modjtahedi et al., Br. J. Cancer

67: 254-261, 1993) . Cuando se inyectaron en ratones que llevaban xenoinjertos de tumores humanos establecidos, los anticuerpos monoclonales de ratón 225 y 528 provocaban una regresión tumoral parcial y requerían la administración conjunta de agente quimioterápicos, tales como doxorubicina o cisplatino, para la erradicación de los tumores (Baselga et al. Pharmacol. Ther. 64: 127-154, 1994; Mendelsohn et al., en Biologic Therapy of Cancer págs. 607-623, Filadelfia: J.B. Lippincott Co., 1995; Fan et al., Cancer Res. 53: 4637-4642, 1993; Baselga et al., J. Natl. Cancer lnst. 85: 1327-1333, 1993) . Una versión quimérica del anticuerpo monoclonal 225 (C225) , en la que las regiones variables del anticuerpo de ratón están unidas a regiones constantes humanas, presentaba una actividad antitumoral in vivo mejorada pero sólo a altas dosis (véanse, por ejemplo, Goldstein et al., Clinical Cancer Res. 1: 1311-1318, 1995; Prewett et al., J. lmmunother. Emphasis Tumor lmmunol. 19: 419-427, 1996) . Los anticuerpos de rata ICR16, ICR62 e ICR64 provocaban regresión de tumores establecidos pero no su erradicación completa (Modjtahedi et al., Br. J. Cancer 67: 254-261, 1993) . Estos resultados establecieron a EGFr como una diana prometedora la para terapia con anticuerpos contra tumores sólidos que expresan EGFr y condujeron a ensayos clínicos en seres humanos con el anticuerpo monoclonal C225 en múltiples cánceres sólidos humanos (véanse, por ejemplo, Baselga et al. Pharmacol. Ther. 64: 127-154, 1994; Mendelsohn et al., Biologic Therapy of Cancer págs. 607-623, Filadelfia: J.B. Lippincott Co., 1995; Modjtahedi et al., lntl. J. of Oncology 4: 277-296, 1994) .

Determinados avances en las técnicas biológicas hicieron posible producir un anticuerpo anti-EGFr completamente humano. Usando ratones transgénicos para genes de inmunoglobulinas humanas (tecnología Xenomouse™,

Abgenix, lnc.) , se desarrollaron anticuerpos humanos específicos para EGFr humano (véanse, por ejemplo, Mendez, Nature Genetics, 15: 146-156, 1997; Jakobovits, Adv. Drug Deliv. Rev., 31 (1-2) : 33-42, 1998; Jakobovits, Expert Opin. lnvest. Drugs, 7 (4) : 607-614, 1998; Yang et al., Crit. Rev. Oncol. Hematol. 38 (1) : 17-23, 2001; documento W098/24893; documento WO 98/50433) . Se ha mostrado que un anticuerpo de este tipo, panitumumab, un anticuerpo monoclonal de lgG2 humano con una afinidad de 5 x 10-11 M por EGFr humano, bloquea la unión de EGF al EGFr, bloqueando la señalización del receptor, e inhibiendo la activación y proliferación de células tumorales in vitro (véanse, por ejemplo, el documento W098/50433; la patente estadounidense n.º 6.235.883) . Estudios en ratones atímicos han demostrado que panitumumab tiene también actividad in... [Seguir leyendo]

1. Método de predicción de si un tumor será insensible al tratamiento con un anticuerpo frente a EGFr, que comprende determinar la presencia o ausencia de una mutación de B-raf V600E en una muestra de dicho tumor; en el que la presencia de la mutación de B-raf indica que el tumor será insensible al tratamiento con el anticuerpo frente a EGFr.

2. Método según la reivindicación 1, que comprende además determinar la presencia o ausencia de una mutación de K-ras en una muestra de dicho tumor, en el que la mutación de K-ras se selecciona de G12S, G12V, G12D, G12A, G12C, G13A y G13D; en el que la presencia de la mutación de K-ras indica que el tumor será insensible al tratamiento con el anticuerpo frente a EGFr.

3. Método de predicción de si un paciente será insensible al tratamiento con un anticuerpo frente a EGFr, que comprende determinar la presencia o ausencia de una mutación de B-raf V600E en una muestra de tumor de dicho paciente; en el que la presencia de la mutación de B-raf indica que el paciente será insensible al tratamiento con el anticuerpo frente a EGFr.

4. Método según la reivindicación 3, que comprende además determinar la presencia o ausencia de una mutación de K-ras en una muestra de tumor de dicho paciente, en el que la mutación de K-ras se selecciona de G12S, G12V, G12D, G12A, G12C, G13A y G13D; en el que la presencia de la mutación de K-ras indica que el paciente será insensible al tratamiento con el anticuerpo frente a EGFr.

5. Método según la reivindicación 1, 2, 3 ó 4, en el que el anticuerpo frente a EGFr es panitumumab.

6. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que tumor es un tumor de colon o rectal.

7. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el tumor se obtiene de un paciente que padece cáncer de colon metastásico.

8. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que la determinación de la presencia o ausencia de la mutación de B-raf y/o K-ras en un tumor o en una muestra de dicho tumor comprende amplificar un ácido nucleico de B-raf y/o K-ras a partir del tumor o la muestra de dicho tumor y secuenciar el ácido nucleico amplificado.

9. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que la determinación de la presencia o ausencia de la mutación de B-raf y/o K-ras en un tumor o en una muestra de dicho tumor comprende detectar un polipéptido de B-raf y/o K-ras mutante en una muestra del tumor usando un agente de unión especifica a un polipéptido de B-raf y/o K-ras mutante.