Modulación por IVIG de quimioquinas para el tratamiento de la esclerosis múltiple, la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson.

Método para verificar la eficacia de un tratamiento intravenoso con inmunoglobulina (IVIG) de exacerbaciones agudas de esclerosis múltiple recurrente-remitente en un sujeto,

comprendiendo el método los pasos de:

(a) Poner en contacto una primera muestra biológica del sujeto tratado con IVIG con un reactivo que se une específicamente a una secuencia de ácido nucleico del factor 1 de regulación transcripcional (TRERF1);

(b) Medir la expresión génica del TRERF1;

(c) Comparar la expresión génica del TRERF1 en la primera muestra procedente del sujeto tratado con IVIG con la expresión génica del TRERF1 presente en una muestra de referencia procedente del sujeto obtenida con anterioridad al tratamiento con IVIC; y

(d) Determinar si el TRERF1 está o no sobreexpresado o infraexpresado en la muestra procedente del sujeto tratado con IVIG en comparación con la expresión génica del marcador en la muestra de referencia, verificando así la eficacia del tratamiento con IVIG de la esclerosis múltiple en el sujeto.

Modulacion por IVIG de quimioquinas para el tratamiento de la esclerosis multiple, la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION

La esclerosis multiple (EM) es la enfermedad autoinmune inflamatoria mas habitual del sistema nervioso central. Se caracteriza por lesiones desmielinizantes de la sustancia blanca del sistema nervioso central, cuyas consecuencias son deficits neurologicos (Sospedra M. y Martin R., Immunology of Multiple Sclerosis. Annu Rev Immunol., 23: 683-747 (2005) ) . La patogenesis de la enfermedad esta asociada con la infiltracion en el cerebro de celulas inmunes y, especialmente, de celulas T activadas (Sospedra M. y Martin R., Annu Rev Immunol., 23: 683-747 (2005) ) . Esta infiltracion va acompafada de una disrupcion de la barrera hematoencefalica (van Horssen J. y col., J Neuropathol Exp Neurol., 66: 321-8 (2007) ) .

Las inmunoglobulinas intravenosas (IVIG) han demostrado ser efectivas en el tratamiento de diversas enfermedades autoimmunes, incluyendo EM (Sospedra M. y Martin R., Immunology of Multiple Sclerosis. Annu Rev Immunol., 23: 683747 (2005) ) , pero no se ha conseguido explicar por completo el mecanismo exacto de accion que subyace bajo la actividad inmunomoduladora de las IVIG. Existen diversos modelos que tratan de explicar la eficacia de las IVIG en pacientes que padecen enfermedades autoinmunes e inflamatorias (Kazatchkine M.D. y col., Mult Scler, 2:24-6; 33:2426 (2000) ; Trebst C. and Stange M., Curr. Pharm. Design, 12:241-2493 (2006) ) . Estos modelos incluyen la inmunomodulacion mediada por los receptores Fcy (Sorensen P.S., Neurol Sci, 4:227-230 (2003) ) , la modulacion de las redes idiotipo-antiidiotipo (Samuelsson A. y col., Science, 291:484-6 (2001) ) , la eliminacion de productos microbianos inmunoestimulantes (Dalakas M.C., Ann Intern Med, 126:721-30 (1997) ) y la neutralizacion de los anticuerpos que actuan contra las citoquinas y quimioquinas (Bayr y J. y col., Transfus Clin Biol., 10:165-9 (2003) ) . Tambien se ha demostrado el potencial de las IVIG para modificar el equilibrio entre la inmunoreactividad de las celulas Th1 y Th2 e inhibir la formacion de complejos anticuerpo/complemento (Andersson U. y col., Immunol Rev, 139: 21-42 (1994) ; Bayr y

J. y col., Intravenous immunoglobulin in autoimmune disorders: An insight into the immunregulator y mechanisms) .

Los efectos beneficiosos de las IVIG en pacientes que padecen EM fueron demostrados mediante una serie de ensayos clinicos abiertos (Basta M. y col., Blood, 77: 376-80 (1991) ) y mediante cuatro ensayos clinicos aleatorios doble ciego (Sorensen P.S. y col., Eur J. Neurol, 9: 557-563 (2002) ; Strasser-Fuchs S. y col., Mult Scler, 2: 9-13 (2000) ; Sorensen P.S. y col., Neurology, 50: 1273-1281 (1998) ; Lewanska M. y col., Eur J. Neurol, 9: 565-572 (2002) ) . Las IVIG redujeron la frecuencia de recaida en pacientes de EM, asi como el numero de lesiones realzadas con gadolinio observadas en el diagnostico por imagen de resonancia magnetica (MRI) (Dudesek A. y Zettl U.K., J. Neurol, 253; V/50-V/58) ) . Asimismo, se demostro que la IVIG suprimia la proliferacion de las celulas T perifericas activadas (Bayr y J. y col., Neurol Sci, 4: 217-221 (2003) ; Stange M. y Gold R., Nervenarzt, (2005) ) . Las celulas T perifericas auto-reactivas pueden atravesar la barrera hematoencefalica y se cree que son las principales celulas efectoras responsables de la inflamacion cerebral (Sospedra M. y Martin R., Annu Rev Immunol., 23: 683-747 (2005) ; Helling N. y col., Immunol Res. 1: 27-51 (2002) ) . Por tanto, una modulacion de la funcion cerebral T mediante IVIG podria explicar el efecto beneficioso desde el punto de vista terapeutico de las IVIG observado en los pacientes de EM.

Recientemente se ha observado que las IVIG son un tratamiento alternativo eficaz para aquellos pacientes que sufren esclerosis multiple recurrente-remitente (EMRR) (Elovaara l. y col., Intravenous Immunoglobulin is effective and well tolerated in the treatment of MS Relapse, manuscript submitted) . Debido a que se cree que las celulas T perifericas auto-reactivas son las responsables de la inflamacion cerebral en la EM, se asume la tarea de identificar los genes que estan regulados de forma diferencial en las celulas T perifericas de pacientes con EM en grado de exacerbacion aguda tratados con IVIG. Se llego a la conclusion de que las diferencias en los perfiles de expresion genica podrian facilitar informacion importante sobre los potenciales mecanismos de accion del tratamiento con IVIG.

Ademas, los cambios observados en los perfiles de expresion genetica podrian facilitar marcadores de pronostico que predijesen el exito del tratamiento. Dichos marcadores podrian tambien ayudar a identificar los objetivos de desarrollo de nuevos agentes terapeuticos.

El documento WO 02/059604 se refiere a metodos y composiciones para la deteccion, diagnostico y pronostico de la esclerosis multiple, asi como para controlar la eficacia de diversos tratamientos. El documento WO 02/059604 tambien se refiere a la identificacion de aquellos pacientes con una mayor probabilidad de respuesta a un tratamiento terapeutico especifico.

El documento WO 2005/027733 se refiere a marcadores biologicos de la esclerosis multiple y a su utilizacion para el diagnostico y aplicaciones clinicas de la enfermedad.

Asimismo, un numero cada vez mayor de evidencias sugieren que la inflamacion cerebral tiene una funcion especifica no solo en el caso de la EM, sino tambien en la patogenesis de la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson (vease, por ejemplo, Wilms y col., Curr. Pharm. Des. 13: 1925 (2007) ) . En microglias especificas, las celulas inmunes innatas residentes desempefan un papel principal en los procesos inflamatorios del cerebro y se sabe que estan asociadas no solo a la EM, sino tambien a la Enfermedad de Alzheimer y la Enfermedad de Parkinson (veanse, por ejemplo, Yamamoto y col., Am. J. Pathology 166: 1475 (2006) ; Huang y col., FASEB 19: 761 (2005) ; Kim y col., Exp.

And Mol. Med. 38: 333 (2006) ) . Asi, la presente invencion proporciona nuevos marcadores de pronostico que predicen el exito del tratamiento asociado a la administracion de un tratamiento con inmunoglobulina por via intravenosa, asi como nuevas dianas terapeuticas que pueden utilizarse para el tratamiento de la EM, por ejemplo esclerosis multiple recurrente-remitente (EMRR) , o de la enfermedad de Parkinson o de Alzheimer.

BREVE SUMARIO DE LA INVENCION

La presente invencion proporciona un metodo para estudiar la eficacia del tratamiento de la esclerosis multiple segun la reivindicacion 1.

El reactivo puede ser un acido nucleico, incluyendo un oligonucleotido o un conjunto de cebadores de RT-PCR. En otros aspectos, la muestra es una muestra de sangre que puede contener celulas T. La muestra puede ser tambien liquido cerebroespinal.

BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS

Figura 1: muestra el desarrollo de las puntuaciones EDSS en 10 pacientes de EMRR durante el tratamiento con IVIG. Los trazos de los recuadros, que contienen la mediana, los percentiles 25 y 75, la minima y la maxima, muestran las puntuaciones EDSS de los pacientes durante la remision, asi como antes y despues del tratamiento con IVIG durante la fase de relapso.

Figura 2: muestra que el tratamiento con IVIG no altera la composicion celular de celulas obtenidas por aislamiento de ARN. Se muestran los datos de expresion genica relativa obtenidos por analisis de microarray para CD3, CD4, CD8 y CD14. A la expresion gecnica se asigna el dia 0 el valor 1 y se compara con la expresion gecnica el dia 6 (A) y el dia 26 (B) . Cada punto representa un paciente individual.

Figura 3: PCR en tiempo real, mostrando la expresion de genes representativos. Los graficos de los recuadros contienen la mediana, los percentiles 25 y 75, la minima y la maxima, muestran la expresion relativa de los genes indicados. La expresion genica se normalizo con respecto a un control endogeno (gliceraldehido-3-fosfato-deshidrogenasa) . Los experimentos PCR en tiempo real se llevaron a cabo en tripletes, confirmandose al menos en dos ocasiones en diferentes dias.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION

En terminos generales, la esclerosis multiple (EM) se refiere a una enfermedad inflamatoria desmielinizante que afecta al sistema nervioso central (SNC) . Durante la evolucion de la EM, la mielina que rodea los axones neuronales se degenera, lo que resulta en una subsecuente degeneracion axonal. Se cree que la patogenesis de la EM implica una respuesta autoinmune en la cual las celulas T atacan partes del sistema nervioso central, desencadenando respuestas inflamatorias, resultando en una estimulacion de otras celulas inmunes y en la secrecion de factores solubles tales como citoquinas y anticuerpos.... [Seguir leyendo]

1. Metodo para verificar la eficacia de un tratamiento intravenoso con inmunoglobulina (IVIG) de exacerbaciones agudas de esclerosis multiple recurrente-remitente en un sujeto, comprendiendo el metodo los pasos de:

(a) Poner en contacto una primera muestra biologica del sujeto tratado con IVIG con un reactivo que se une especificamente a una secuencia de acido nucleico del factor 1 de regulacion transcripcional (TRERF1) ;

(b) Medir la expresion genica del TRERF1;

(c) Comparar la expresion genica del TRERF1 en la primera muestra procedente del sujeto tratado con

IVIG con la expresion genica del TRERF1 presente en una muestra de referencia procedente del 10 sujeto obtenida con anterioridad al tratamiento con IVIC; y

(d) Determinar si el TRERF1 esta o no sobreexpresado o infraexpresado en la muestra procedente del sujeto tratado con IVIG en comparacion con la expresion genica del marcador en la muestra de referencia, verificando asi la eficacia del tratamiento con IVIG de la esclerosis multiple en el sujeto.

2. Metodo segun la reivindicacion 1, caracterizado porque el reactivo es un acido nucleico.

3. Metodo segun la reivindicacion 1, caracterizado porque el reactivo es un oligonucleotido.

4. Metodo segun la reivindicacion 1, caracterizado porque el reactivo es un conjunto de cebadores de PCR RT.

5. Metodo segun la reivindicacion 1, caracterizado porque la muestra es una muestra de sangre.

6. Metodo segun la reivindicacion 5, caracterizado porque la muestra de sangre comprende celulas T.

7. Metodo segun la reivindicacion 1, caracterizado porque la muestra es liquido cerebroespinal.

Fig. 1

Fig. 2 A-B Fig. 3 A-D