Modulación medida por EPH/EFRINA de la adherencia celular metástasis de células tumorales.

Anticuerpo dirigido a un dominio de interacción con efrina de un receptor EphA3 para su uso en la prevención,

demora o inhibición de metástasis de células tumorales, en el que se modula la capacidad de una célula tumoral queexpresa dicho receptor EphA3 para responder a la unión a efrina en un mamífero y se mejora la repulsión alcontacto celular entre dicha célula tumoral y otra célula que expresa dicha efrina.

Modulación mediada por EPH/EFRINA de la adherencia celular y metástasis de células tumorales SECTOR DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a la modulación de la adherencia celular y la repulsión celular. Más particularmente, la presente invención se refiere a la modulación de la adherencia celular y la repulsión al contacto celular en respuesta a la unión de efrina por las células que expresan receptores Eph. Una característica particular de la presente invención es que la repulsión celular y la adherencia celular se desencadenan por diferentes vías dependientes, del tipo de célula y de la actividad quinasa de Eph en respuesta a la unión de efrina. Por consiguiente, la presente invención se refiere en particular a la prevención, inhibición o retraso de la metástasis de células tumorales a través de la modulación de las interacciones de unión del receptor de Eph-efrina y posterior internalización y señalización del receptor Eph.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Los receptores Eph y sus ligandos de efrina unidos a la membrana actúan como señales celulares de orientación que coordinan el movimiento de las células y capas celulares por la mediación de señales repulsivas o de adherencia (Boyd y Lackmann, 2001) . La repulsión de célula a célula inducida por efrina dependiente del contacto celular se basa tanto en las señales del receptor activo de la tirosina quinasa (Lawrenson y otros, 2002) , como en la escisión proteolítica regulada del ligando para interrumpir las interacciones multivalentes receptor/ligando de alta afinidad (Hattori y otros, 2000) . La expresión de variantes de empalme de EphA que carecen del dominio de la quinasa durante el desarrollo de ratones puede cambiar las respuestas celulares al mismo receptor de repulsión de contacto a adherencia de célula a célula (Holmberg y otros, 2000) . En la actualidad, es evidente a partir de estos y otros estudios que, en ausencia de la función de señalización citoplásmica del receptor Eph y la falta de escisión de la unión Eph/efrina (Hattori y otros, 2000) , la repulsión del contacto celular cambia a adherencia de célula a célula. Además, la activación del receptor Eph puede aumentar la adherencia célula-sustrato (Holmberg y Frisen, 2002) por interferecia a las integrinas ávâ3 o á5â1, aumentando su afinidad por sus ligandos vitronectina o fibronectina (Huynh-Do y otros, 1999, Becker y otros, 2000) . El análisis de los mutantes de Eph y efrina mutantes durante diferentes procesos de desarrollo en C-elegans y ratón ha hecho hincapié en la importancia de la repulsión celular, la adherencia celular, mediadas por Eph/efrina, así como la señalización de Eph dependiente de quinasa e independiente de quinasa (George y otros, 1998 , Wang y otros, 1999, Birgbauer y otros, 2001, Kullander y otros, 2001, Birgbauer y otros, 2000) .

Hay pocos indicios de la función receptor Eph/efrina en tejido adulto normal, pero cada vez más pruebas dan a entender que estas familias de moléculas están involucradas en la progresión del cáncer y la neovascularización del tumor (Dodelet y Pasquale, 2000, Ogawa y otros, 2000) . Sin embargo, al contrario de las funciones de desarrollo bien definidas de los receptores Eph y las efrinas, su función en la biología celular del cáncer sólo se está comenzando a explorar (Batlle y otros 2002) . El EphA3, aislado originalmente como antígeno en la superficie de las células pre-B linfoblásticas LIC63 (Boyd y otros, 1992) , está sobreexpresado en varios tumores, incluyendo cáncer de pulmón, neuroblastoma, tumores cerebrales y renales y melanoma (Wang y Anderson, 1997, Wicks y otros, 1992, Chiari y otros, 2000) . Recientemente, el EphA3 fue redescubierto como antígeno tumoral involucrado en una respuesta de rechazo al tumor de un paciente con melanoma (Chiari y otros, 2000) .

Lawrenson y otros, J Cell Science (2002) 115 (5) : 1059-1072 describen que los receptores Eph y las efrinas están sobreexpresadas en una gama de tumores y que la activación de EphA3 induce retracción de las protusiones celulares, redondeo celular, aparición de protuberancias en la membrana y la desadherencia y que el agrupamiento de receptores mediados por efrina A5 y la actividad de la tirosina quinasa de EphA3 son esenciales en esta respuesta.

CARACTERÍSTICAS DE LA INVENCIÓN

Los presentes inventores se han dado cuenta de la necesidad de comprender mejor el significado funcional de la expresión del receptor Eph y las interacciones Eph-efrinas a través de los cada vez más diversos tipos de células tumorales que expresan receptores de Eph.

Sorprendentemente, los presentes inventores proponen que se produce tanto adherencia celular como repulsión al contacto celular en respuesta a la unión a efrina, siendo la respuesta concreta dependiente del tipo de célula tumoral que expresa el receptor Eph.

Por lo tanto, la presente invención se refiere, en términos generales, a la modulación de la adherencia celular, la repulsión al contacto celular, invasión y/o metástasis mediante la modulación del sistema receptor Eph-efrina.

En un aspecto, la presente invención da a conocer un anticuerpo contra el dominio de interacción de efrina de un receptor EphA3, para su uso en la prevención, demora o inhibición de metástasis de células tumorales mediante la modulación de la capacidad de una célula tumoral que expresa dicho receptor EphA3 de responder a la unión a efrina en un mamífero, con lo que se mejora la repulsión al contacto celular entre dicha célula tumoral y otra célula que expresa dicha efrina.

En un segundo aspecto, se da a conocer una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo dirigido a un dominio de interacción de efrina de un receptor EphA3, para su uso en la prevención, demora o inhibición de metástasis de células tumorales mediante la modulación de la capacidad de una célula tumoral que expresa dicho receptor EphA3 de responder a la unión a efrina en un mamífero, con lo que se mejora la repulsión al contacto celular entre dicha célula tumoral y otra célula que expresa dicha efrina.

Un ejemplo de célula tumoral, según esta realización, es una célula de melanoma maligno o una célula de tumor renal. Los modelos experimentales de dichos tipos de células son células de melanoma LiBr o células de riñón epitelial humanas, células (HEK) 293.

Cuando se va a inhibir o reducir la adherencia célula-célula, la célula tumoral responde normalmente a la unión a efrina mediante la adherencia a otra célula que expresa la efrina unida.

Un ejemplo de dicha célula tumoral es una célula tumoral linfoblástica, tales como células de leucemia pre-B. Un modelo experimental de dicho tipo de célula es LK63.

Preferentemente, el receptor Eph es EphA3.

Preferentemente, la efrina es efrina A5.

También se da a conocer en el presente documento un método para identificar un agente que modula la adherencia celular y/o repulsión celular, incluyendo dicho método la etapa de determinar si dicho agente modula la adherencia celular o repulsión celular en respuesta a la unión a efrina.

También se da a conocer en el presente documento una composición farmacéutica que comprende un agente para su uso en la modulación de la adherencia celular mediada por receptor Eph-efrina, junto con un diluyente o excipiente portador farmacéuticamente aceptable.

También se da a conocer el uso de un agente que modula la adherencia celular y repulsión al contacto mediados por receptor dirigido específicamente hacia células tumorales que expresan el receptor Eph y mediante la internalización en los lisosomas de estas células y la liberación de un fármaco citotóxico injertado en el ambiente ácido que destruirá las células tumorales diana.

En el presente documento, a menos que se indique lo contrario, "comprenden", "comprende" y "que comprende" se utilizan de forma inclusiva en vez de exclusivamente, de modo que un número entero indicado o grupo de números enteros pueden incluir uno o más números enteros o grupos de enteros no declarados.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

Figura 1. La efrinaA5 unida a la superficie causa o bien repulsión celular o adherencia celular de las células tumorales positivas a EphA3.

(A) Se sembraron células de leucemia pre-B humanas LK63 positivas a EphA3 y células de melanoma LiBr en cubreobjetos de vidrio recubiertos con efrina-A5-Fc (efrina, 10 µg/ml) o fibronectina (FN, 10 µg/ml) . Después de 4 h, el citoesqueleto de las células adherentes fijas se tiñó con rodamina-faloidina. Se muestran fotografías de imágenes de fluorescencia representativas, la segunda columna representa secciones ampliadas de la primera. Barra de escala:... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo dirigido a un dominio de interacción con efrina de un receptor EphA3 para su uso en la prevención, demora o inhibición de metástasis de células tumorales, en el que se modula la capacidad de una célula tumoral que expresa dicho receptor EphA3 para responder a la unión a efrina en un mamífero y se mejora la repulsión al contacto celular entre dicha célula tumoral y otra célula que expresa dicha efrina.

2. Anticuerpo para el uso, según la reivindicación 1, en el que también se previene, inhibe o demora la neovascularización de un tumor. 10

3. Anticuerpo para el uso, según la reivindicación 1, en el que dicha célula tumoral es una célula de melanoma maligno.

4. Anticuerpo para el uso, según la reivindicación 1, en el que el anticuerpo es el anticuerpo monoclonal IIIA4. 15

5. Anticuerpo para el uso, según la reivindicación 1, en el que la efrina expresada por dicha otra célula es efrina A5 humana.

6. Anticuerpo para el uso, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el mamífero es un ser 20 humano.

7. Composición farmacéutica que comprende un anticuerpo dirigido a un dominio de interacción con efrina de un receptor EphA3 junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable, para su uso en la prevención, demora o inhibición de metástasis de células tumorales mediante la modulación de la capacidad de una célula tumoral que expresa dicho receptor EphaA3 para responder a la unión a efrina en un mamífero, en el que se mejora la repulsión al contacto celular entre dicha célula tumoral y otra célula que expresa dicha efrina.

8. Composición farmacéutica para el uso, según la reivindicación 7, en el que dicho anticuerpo es un anticuerpo monoclonal IIIA4. 30

9. Uso de un anticuerpo dirigido a un dominio de interacción con efrina de un receptor EphA3 para la fabricación de un medicamento para su uso en la prevención, demora o inhibición de metástasis de células tumorales mediante la modulación de la capacidad de una célula tumoral que expresa dicho receptor EphA3 para responder a la unión a efrina en un mamífero, en el que se mejora la repulsión al contacto celular entre dicha célula y otra célula que expresa dicha efrina.

10. Uso, según la reivindicación 9, en el que también se previene, inhibe o demora la neovascularización de un tumor.

11. Uso, según la reivindicación 9, en el que dicha célula tumoral es una célula de melanoma maligno.

12. Uso, según la reivindicación 9, en el que el anticuerpo es el anticuerpo monoclonal IIIA4.

13. Uso, según la reivindicación 9, en el que que la efrina expresada por dicha otra célula es efrina A5 humana. 45