Métodos y kits para diagnosticar la deficiencia de hormona del crecimiento.

Un método de valoración de deficiencia de hormona del crecimiento relacionada con la pituitaria en un sujetohumano o animal,

el método comprendiendol proporcionar al menos una muestra post-administración de unsujeto al que se ha administrado oralmente HAib- D-Trp-D-gTrp-CHO (EP 1572), determinar el nivel de hormonadel crecimiento en la muestra o muestras y valorar si el nivel de hormona del crecimiento es indicativo dedeficiencia de hormona del crecimiento relacionada con la pituitaria en el sujeto comparando el nivel de hormonadel crecimiento en al menos una muestra post-administración con el nivel que puede encontrarse en una muestrapost-administración equivalente de un sujeto que se sabe que no tiene deficiencia de hormona del crecimientoy/o al nivel que puede hallarse en una muestra post-administración equivalente de un sujeto que se sabe quetiene deficiencia de hormona del crecimiento relacionada con la pituitaria, donde:

la muestra es una muestra de sangre, una muestra de suero o muestra de plasma;

el nivel de hormona del crecimiento en la muestra se mide utilizando un inmunoensayo; se proporcionauna o más muestra o muestras post-administración tomadas después de un intervalo de tiempo entre 15y 120 minutos; y

la cantidad de EP 1572 administrada es de entre 18 y 75 mg.

Métodos y kits para diagnosticar la deficiencia de hormona del crecimiento

La presente invención se refiere a métodos y kits para utilizar en relación al diagnóstico de deficiencia de hormona del crecimiento en un sujeto humano o animal.

Se estima que 1 de cada 4000 niños escolares está afectado por deficiencia de hormonas de crecimiento (GHD) , siendo la causa más común los hipopituitarismos idiopáticos.

Se reconoce en niños con GHD que la pequeña estatura puede ser la única característica presente. La Sociedad de Investigación de Hormona del Crecimiento sugiere que si ciertos criterios están presentes, entonces debería iniciarse una investigación inmediata, estos incluyen: 1) muy baja estatura, definida como una altura de 10 más de 3 desviaciones estándar (SD) por debajo de la media; 2) altura de más de 1.5 SD por debajo de la altura media-parental; 3) altura de más de 2 SD por debajo de la media y una velocidad de altura durante un año más de 1 SD por debajo de la media para edad cronológica, o una disminución en SD de altura de más de 0.5 durante 1 año en niños de más de 2 años de edad; 4) en ausencia de pequeña estatura, una velocidad de altura de más de 2 SD por debajo de la media durante 1 año o más de 1.5 SD mantenida durante 2 años; 5) indicios indicativos de una lesión intracraneal; 6) indicios de trastornos múltiples de hormonas pituitarias (MPHD) ; y 7) síntomas neonatales e indicios de GHD (Sociedad de Investigación de la Hormona del Crecimiento, J. Clin. Endocrinol. Metab. (2000) , 85 (11) , p 3990-3993) .

Sin embargo, la GHD no se considera ya que sea simplemente una afección pediátrica asociada con pobre velocidad de crecimiento. Los adultos todavía necesitan niveles adecuados de GH para mantener una 20 composición y metabolismo corporal sanos. Adultos con GHD tienen grasa abdominal aumentada, función cardiaca deteriorada, niveles elevados de colesterol, y reducida capacidad de ejercicio, pobre masa corporal y contenido mineral óseo (Sociedad de Investigación de Hormona del Crecimiento, J. Clin. Endocrinol. Metab. (1998) , 83 (2) , p 379-381) . Un ensayo que provoca que la pituitaria libere GH se utiliza para diagnosticar GHD tanto en adultos como en niños. Existe una variedad de agentes que provocan la liberación de hormona de crecimiento, incluyendo levodopa, clonidina, arginina, insulina, hormona de liberación de hormona de crecimiento (GHRH) y diversos análogos de GHRH han sido utilizados, bien individualmente o en combinación, para valorar la capacidad secretoria de la GH en niños de pequeña estatura y adultos con una variedad de afecciones asociadas con GHD, (ver Greenspan, F. and Baxter, J.D., Chapter 3, Basic & Clinical Endocrinology, 4th Ed. (1994) Prentice Hall, USA; WO 94/11396; y WO 94/11397) .

Aparte de la insulina y la combinación de GHRH más arginina, los agentes anteriores bien sufren de una baja sensibilidad (“sensibilidad” es la proporción de sujetos que son diagnosticados correctamente con GHD) o una baja especificidad ("especificidad" es la proporción de sujetos que son valorados correctamente como que no tienen GHD) , esto se debe principalmente a la considerable variabilidad en la respuesta de la GH entre sujetos y también un alto índice de resultados positivos falsos. Un resumen de las sensibilidades y

especificidades se incluye en la Table 1 abajo; idealmente, un agente provocador debería tener tanto sensibilidad como especificidad º95% (ver Biller, B. M. K. et al. J. Clin. Endocrinol. Metab. (2002) , 87 (5) , p20672079) .

Ensayo Sensibilidad Especificidad

ITT (i.v.) 96% 92%

ARG-GHRH (i.v.) 95% 91%

ARG-L-DOPA (p.o) 97% 79%

ARG (i.v.) 87% 91%

L-Dopa (p.o.) 100% 62%

El ensayo intravenoso de intolerancia a la insulina (ITT) es considerado el mejor método de detección para el diagnóstico de GHD (Mahajan et al. J. Clim. Endocrin. & Metab. (2000) , p1473-1476) . Sin embargo, este ensayo tiene el riesgo de causar al sujeto serios daños (por ejemplo provocando un coma diabético debido a hipoglucemia) y en consecuencia el sujeto deba ser continuamente observado durante un periodo prolongado de tiempo en una unidad de investigación apropiadamente provista de personal. Esto hace muy costosa la ITT como 45 procedimiento de control detección fuera de centros muy especializados.

El ensayo de la GHRH más L-arginina se considera ahora que es casi tan predictivo como el ensayo ITT. Sin embargo, puede provocar una variedad de efectos secundarios que incluye vasodilatación o soplado, parestesias, náuseas y sensación anormal del gusto (Biller, B. M. K. et al. J. Clin. Endocrinol. Metab. (2002) , 87 (5) , p2067-2079) .

En todos los ensayos anteriores, deben tomarse múltiples muestras durante un periodo de horas a fin de establecer un diagnóstico. Adicionalmente, los otros ensayos mencionados antes producen efectos secundarios que incluyen náuseas, vómito, parestesias, mareo, astenia y dolores de cabeza (ibid) .

En los últimos pocos años, diversos investigadores han demostrado que la secreción de GH puede estimularse por oligopéptidos sintéticos denominados péptidos de liberación de GH (GHRP) tales como hexarelina y diversos análogos de hexarelina (Ghigo et al., Revista Europea de Endocrinología, 136, 445-460, 1997) . Estos compuestos actúan mediante un mecanismo que es distinto del de la GHRH (C.Y. Bowers, en "Secretagogos de Hormona del Crecimiento Xenobióticos ", Eds. B.Bercu y R.F. Walker, Pg. 9-28, Springer-Verlag, New York 1996) y por interacción con receptores específicos localizados en el hipotálamo y glándula pituitaria ( (a) G. Muccioli et al., Revista de Endocrinología, 157, 99-106, 1998; (b) G. Muccioli, "Distribución de Tejido de Receptores de GHRP en Humanos", Resúmenes IV Congreso Europeo de Endocrinología, Sevilla, España, 1998) . Recientemente se demostró que los receptores de GHRP están presentes no solamente en el sistema pituitario-hipotálamo sino también en diversos tejidos humanos asociados con la liberación de GH (G. Muccioli et al., ver arriba (a) ) .

GHRPs y sus antagonistas se describen, por ejemplo, en las siguientes publicaciones: C.Y. Bowers, supra, R. Deghenghi, "Péptidos de Liberación de Hormona del Crecimiento ", ibid, 1996, pg. 85-102; R. Deghenghi et al., "Pequeños Péptidos como Potentes Liberadores de Hormona del Crecimiento ", J. Ped. End. Metab., 8, pg. 311-313, 1996; R. Deghenghi, "El Desarrollo de Péptidos Impermeables como Secretagogos de la Hormona del crecimiento Secretagogues", Acta Paediatr. Suppl., 423, pg. 85-87, 1997; K. Veeraraganavan et al., "Péptidos Liberadores de la Hormona del Crecimiento (GHRP) que se Unen a Pituitaria Porcina Anterior y Membranas Hipotalámicas ", Life Sci., 50, Pg. 1149-1155, 1992; y T.C. Somers et al., "Secretagogos de la Hormona del Crecimiento de Peptidomiméticos de Bajo Peso Molecular ", WO 96/15148 (May 23, 1996) , WO 95/14666, WO 01/96300, WO 91/18016, WO 96/10040, WO 97/22620, WO 99/62539, US 5, 646, 301, US 5, 955, 421, US 5, 872, 100, US 5, 668, 254, UD 5, 635, 379, US 6, 025, 471.

El péptido de liberación de la hormona del crecimiento 6 (GHRP-6) se ha usado como un agente provocador para el diagnóstico de GHD conjuntamente con la GHRH (US 5, 811, 074) . Este método se apoya en la administración intravenosa de GHRP-6 y GHRH e implica un periodo prolongado de prueba con múltiples muestras necesarias para llegar a un diagnóstico.

El péptido de liberación de la hormona del crecimiento 2 (GHRP-2) ha mostrado que tiene alguna utilidad en el diagnóstico de GHD cuando se administra a un sujeto mediante inyección intravenosa o administración intranasal (Pihoker et al. J. Clin. Endocrin. & Metab. (1995) , p2987-2992) . También se observó que cuando GHRP-2 se combinaba con la GHRH, mediante administración intravenosa, se producía un efecto sinérgico, produciéndose resultados más exactos. Sin embargo, la metodología descrita requiere un periodo de horas y múltiples muestras del sujeto antes de que pueda hacerse un diágnostico.

En un refinamiento del ensayo anterior (Mahajan et al. J. Clin. Endorin. & Metab. (2000) , p1473-1476) , la GHRP-2 y la GHRH se administran juntas intravenosamente y se toma una sola muestra de sangre para proporcionar un diagnóstico. Ninguna sugerencia se ha hecho en el documento de que la administración oral sería efectiva para el tratamiento de combinación.

La compañía farmacéutica Kaken ha hecho disponible recientemente un kit de diagnóstico para GHD en el mercado Japonés, utilizando GHRP-2, que está aprobado para administración intravenosa.

WO 96/29002 revela un método de diagnóstico de deficiencia pituitaria de la hormona del crecimiento.

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1. Un método de valoración de deficiencia de hormona del crecimiento relacionada con la pituitaria en un sujeto humano o animal, el método comprendiendol proporcionar al menos una muestra post-administración de un sujeto al que se ha administrado oralmente HAib- D-Trp-D-gTrp-CHO (EP 1572) , determinar el nivel de hormona del crecimiento en la muestra o muestras y valorar si el nivel de hormona del crecimiento es indicativo de deficiencia de hormona del crecimiento relacionada con la pituitaria en el sujeto comparando el nivel de hormona del crecimiento en al menos una muestra post-administración con el nivel que puede encontrarse en una muestra post-administración equivalente de un sujeto que se sabe que no tiene deficiencia de hormona del crecimiento y/o al nivel que puede hallarse en una muestra post-administración equivalente de un sujeto que se sabe que tiene deficiencia de hormona del crecimiento relacionada con la pituitaria, donde:

la muestra es una muestra de sangre, una muestra de suero o muestra de plasma;

el nivel de hormona del crecimiento en la muestra se mide utilizando un inmunoensayo; se proporciona una o más muestra o muestras post-administración tomadas después de un intervalo de tiempo entre 15 y 120 minutos; y

la cantidad de EP 1572 administrada es de entre 18 y 75 mg.

2. Un método conforme a la reivindicación 1 donde se proporciona una muestra procedente del sujeto previa a la administración de EP 1572.

3. Un método conforme a la reivindicación 1 donde la una o más muestra o muestras post-administración se toman tras un intervalo de tiempo de entre 15 y 30 minutos.

4. Un método conforme a la reivindicación 1 donde se proporcionan muestras tomadas a los -30 o -15, 0, 15, 30, 60, 90 y 120 minutos respecto al momento de administración oral de EP 1572.

5. Un método conforme a las reivindicaciones 1 a 4 donde se utiliza la valoración del nivel máximo de hormona del crecimiento liberada durante el marco de tiempo para indicar deficiencia de hormona del crecimiento relacionada con pituitaria en el sujeto.

6. Un método conforme a cualquiera de las reivindicaciones precedentes donde el sujeto humano o animal puede ser bien un niño o un adulto.

7. Un método conforme a cualquiera de las reivindicaciones precedentes donde el sujeto animal es un caballo, vaca, oveja, cerdo, cabra, gato o perro.