Métodos y composiciones para el tratamiento de defectos óseos con poblaciones de células placentarias.

Células adherentes placentarias osteogénicas (OPAC) aisladas para su uso en un método para el tratamiento de un individuo que padece mieloma múltiple,

mediante la administración a dicho individuo de dichas OPAC aisladas, en donde dichas OPAC se obtienen de corion y son adherentes al plástico para cultivo tisular, y en donde dichas OPAC son negativas para CD200 o son CD200tenue, y positivas para CD105, y en donde dicha administración reduce notoriamente el avance, detiene el avance o mejora uno o más síntomas de dicho mieloma múltiple.

Métodos y composiciones para el tratamiento de defectos óseos con poblaciones de células placentarias.

1. Campo En la presente se proporcionan poblaciones aisladas de células placentarias adherentes osteogénicas (OPAC) y OPAC aisladas para su uso en un método para el tratamiento de un individuo que padece mieloma múltiple mediante la administración de dichas OPAC aisladas a dicho individuo y en donde la administración reduce el avance, detiene el avance o mejora uno o más síntomas de dicho mieloma múltiple.

2. Antecedentes El mieloma múltiple (también conocido como MM, mieloma, mieloma de células plasmáticas o enfermedad de Kahler) es un tipo de cáncer de las células plasmáticas, que son células del sistema inmune que producen anticuerpos. Los síntomas del mieloma múltiple incluyen dolor óseo, infección, insuficiencia renal, anemia y lesiones óseas. La enfermedad es considerada incurable y sólo unos pocos tratamientos, tales como lenalidomida (REVLIMID®) están disponibles y parecen prometedores. En este sentido, existe una necesidad de nuevos tratamientos para el mieloma múltiple.

3. Compendio La presente invención se refiere a células adherentes placentarias osteogénicas (OPAC) aisladas para su uso en un método para el tratamiento de un individuo que padece mieloma múltiple mediante la administración a dicho individuo de dichas OPAC aisladas, en donde dichas OPAC se obtienen de corion, y son adherentes al plástico para cultivo tisular, y en donde dichas OPAC son negativas para CD200 o son CD200tenue, y positivas para CD105, y en donde dicha administración reduce notoriamente el avance, detiene el avance o mejora uno o más síntomas de dicho mieloma múltiple.

La presente invención adicionalmente se refiere a una célula adherente placentaria osteogénica (OPAC) , en donde dicha célula se obtiene de corion, y es adherente al plástico para cultivo tisular, y en donde dicha célula es negativa para CD200 o es CD200tenue, y positiva para CD105.

La presente invención adicionalmente proporciona poblaciones aisladas de las células de la presente invención.

En la presente se proporcionan células adherentes placentarias osteogénicas (OPAC) aisladas, poblaciones de OPAC y poblaciones de células que comprenden OPAC, en donde las OPAC están presentes en el corion y se aíslan del mismo. En ciertas realizaciones, las OPAC no están aisladas del contorno coriónico (liso) . Las OPAC exhiben una o más características de las células madre o células multipotentes (por ejemplo, exhiben marcadores asociados con las células madre o células multipotentes, se replican al menos 10-20 veces en cultivo en un estado no diferenciado, se diferencian en células adultas representativas de al menos una de las tres capas germinales, etc.) y pueden adherirse a un sustrato para cultivo tisular (por ejemplo, plástico para cultivo tisular tal como la superficie de un plato o placa de múltiples pocillos para cultivo tisular) . En la presente se proporcionan además OPAC para su uso en un método para el tratamiento de mieloma múltiple y OPAC para su uso en un método para reducir, detener o revertir la pérdida ósea asociada con mieloma múltiple o causada por el mismo.

En un aspecto, en la presente se proporciona una OPAC aislada, es decir, una célula adherente placentaria osteogénica aislada que es adherente a plástico para cultivo tisular, osteogénica y aislada del corion, excluyendo el contorno coriónico (liso) . Las OPAC no son trofoblastos, citotrofoblastos, células madre embrionarias ni células germinales embrionarias, ya que esas células son conocidas y se entienden en la técnica.

En una realización, una OPAC es una célula CD200- o CD200tenue aislada, por ejemplo, una que está aislada del corion, pero no del contorno coriónico (liso) . En una realización específica, una OPAC es osteogénica. En una realización específica, una OPAC es positiva para la secreción de osteoprotegerina (OPG) , por ejemplo, según se detecta por citometría de flujo. La osteoprotegerina es un receptor señuelo secretado por osteoblastos que se une específicamente al factor de diferenciación de osteoclastos (ODF) e inhibe la maduración de osteoclastos. Por lo tanto, las OPAC promueven la formación ósea y reducen la pérdida ósea mediada por osteoclastos. En otra realización específica, una OPAC no expresa RANKL (Receptor activador del ligando del factor nuclear κ B; ver, por ejemplo, No. de acceso de GenBank AAB86811.1) , por ejemplo, según se detecta por RT-PCR cuantitativa. RANKL es una proteína que activa osteoclastos, que participan en la resorción ósea. Por lo tanto, las OPAC no promueven la resorción ósea. En otra realización específica, una OPAC es CD200- o CD200tenue y CD105+. En otra realización específica, una OPAC es negativa para la expresión de α-actina de músculo liso (ver, por ejemplo, No. de acceso de GenBank NP_001604) , negativa para RANKL o positiva para la expresión de NG2 (proteoglicano de sulfato de condroitina de célula neuroglial 2) , por ejemplo, según se determina por la tinción de anticuerpos. En ciertas realizaciones, la tinción para dicho NG2 en las OPAC es difusa, en comparación con células madre placentarias adherentes al plástico para cultivo tisular CD200+ (no tenue) , en las cuales la tinción de NG2 está enfocada. En otra realización específica, una OPAC es negativa para la expresión de α-actina de músculo liso, negativa para RANKL, positiva para la expresión de NG2 y positiva para la secreción de osteoprotegerina. En otra realización específica, una OPAC exhibe actividad de fosfatasa alcalina inducible, por ejemplo, según se determina por un ensayo colorimétrico. En una realización más específica, una OPAC es CD200- o CD200tenue, CD105+, según se detecta mediante citometría de flujo, y es negativa para la expresión de α-actina de músculo liso, negativa para RANKL, positiva para la expresión de NG2, positiva para la expresión de osteoprotegerina o exhibe actividad de fosfatasa alcalina inducible. En otra realización más específica, una OPAC es CD200- o CD200tenue, CD105+ y es negativa para la expresión de α-actina de músculo liso, positiva para la expresión de NG2, positiva para la expresión de osteoprotegerina y exhibe actividad de fosfatasa alcalina inducible.

En otra realización específica, una OPAC es SSEA3+ o SSEA4+. En una realización más específica, una OPAC es SSEA3+ y SSEA4+. En otra realización más específica, una OPAC es CD200-, CD105+, SSEA3+ y también es negativa para la expresión de α-actina de músculo liso, negativa para la expresión de RANKL, positiva para la expresión de NG2, positiva para la expresión de osteoprotegerina o exhibe actividad de fosfatasa alcalina inducible. En otra realización más específica, una OPAC es CD200-, CD105+, SSEA4+ y también es negativa para la expresión de α-actina de músculo liso, negativa para RANKL, positiva para la expresión de NG2, positiva para la expresión de osteoprotegerina o exhibe actividad de fosfatasa alcalina inducible. En una realización más específica, una OPAC es CD200-, CD105+, SSEA3+, SSEA4+ y también es negativa para la expresión de α-actina de músculo liso, negativa para RANKL, positiva para la expresión de NG2, positiva para la expresión de osteoprotegerina o exhibe actividad de fosfatasa alcalina inducible.

En ciertas realizaciones, la OPAC, población de OPAC o población de células que comprenden las OPAC facilita la formación de una matriz mineralizada en una población de células placentarias cuando dicha población se cultiva en condiciones que permiten la formación de una matriz mineralizada.

En la presente también se proporcionan poblaciones de OPAC, en donde la población de células es CD200-o CD200tenue. Por lo tanto, en una realización, en la presente se proporciona una población aislada de OPAC, en donde dicha población de células no está aislada del contorno coriónico (liso) y en donde dicha población de células es CD200- o CD200tenue. En una realización específica, la población de células consiste esencialmente en OPAC. En una realización específica, dicha población de células es osteogénica. En otra realización específica, dicha población de células es CD200- y CD105+ según se detecta por citometría de flujo. En otra realización específica, dicha población de células es CD200tenue y CD105+ según se detecta por citometría de flujo. En otra realización específica, dicha población de células es negativa para la expresión de α-actina de músculo liso, positiva para la expresión de NG2 o positiva para la secreción de osteoprotegerina. En ciertas realizaciones, la tinción para dicho NG2 en las OPAC es difusa en comparación... [Seguir leyendo]

1. Células adherentes placentarias osteogénicas (OPAC) aisladas para su uso en un método para el tratamiento de un individuo que padece mieloma múltiple, mediante la administración a dicho individuo de dichas OPAC aisladas, en donde dichas OPAC se obtienen de corion y son adherentes al plástico para cultivo tisular, y en donde dichas OPAC son negativas para CD200 o son CD200tenue, y positivas para CD105, y en donde dicha administración reduce notoriamente el avance, detiene el avance o mejora uno o más síntomas de dicho mieloma múltiple.

2. Las OPAC aisladas para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dichas OPAC son SSEA3+ o SSEA4+ o en donde dichas OPAC son SSEA3+ y SSEA4+.

3. Las OPAC aisladas para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dichas OPAC:

expresan uno o más genes a un nivel notoriamente más alto que un número equivalente de células madre mesenquimales derivadas de médula ósea, en donde dicho gen o genes comprenden uno o más de BMP4, BMP6, CD36, CDH11, COL14A1, COL15A1, COL1A1, COL3A1, COL5A1, CSF2, CTSK, FGF2, FGFR1, FLT1, ITGA1, MINPP1, MMP9, MSX1, PDGFA, SERPINH1, TGFB3 y TGFBR1, en donde dichas OPAC y dichas células madre mesenquimales se han sometido a un número equivalente de pases; o expresan uno o más genes a un nivel notoriamente más alto que un número equivalente de células de fibroblastos, en donde dicho gen o genes comprenden uno o más de BMP4, BMP6, CDH11, COL14A1, COL15A1, COL1A1, COL3A1, COL5A1, FLT1, IGF1R, ITGA1, MINPP1, PDGFA, SERPINH1, SMAD3, TGFB1, TGFB2, TGFB3, TGFBR1, TNF, TUFT1, VCAM1 y VEGFA, en donde dichas OPAC y dichas células de fibroblastos se han sometido a un número equivalente de pases.

4. Las OPAC aisladas para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dichas OPAC secretan una o más de las proteínas decorina, epirregulina, IGFBP-3, IGFBP-6, IL-2 R alfa, IL-17RC, IL-27, proteína de unión a TGF-beta latente 1 (LTBP) , NCAM-1, Smad4, TFPI, TGF-beta R1/ALK5 o TIMP-2, o

en donde dichas OPAC secretan las proteínas decorina, epirregulina, IGFBP-3, IGFBP-6, IL-2 R alfa, IL-17RC, IL-27, proteína de unión a TGF-beta latente 1 (LTBP) , NCAM-1, Smad4, TFPI, TGF-beta R1/ALK5 y TIMP-2.

5. Las OPAC aisladas para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho síntoma o síntomas son dolor óseo, lesiones osteocíticas, anemia o insuficiencia renal.

6. Las OPAC aisladas para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dichas OPAC se preparan para administrarse en una cantidad de al menos 1 x 108 de OPAC/kg a dicho individuo.

7. Una célula adherente placentaria osteogénica (OPAC) , en donde dicha célula se obtiene de corion y es adherente al plástico para cultivo tisular, y en donde dicha célula es negativa para CD200 o es CD200tenue y positiva para CD105.

8. La célula aislada de la reivindicación 7, en donde dicha célula es SSEA3+ o SSEA4+, o SSEA3+ y SSEA4+.

9. La célula aislada de la reivindicación 7, en donde dicha célula produce osteoprotegerina.

10. La célula aislada de la reivindicación 7, en donde dicha célula es adicionalmente negativa para la expresión de αactina de músculo liso, negativa para la expresión de RANKL, positiva para la expresión de NG2, positiva para la expresión de osteoprotegerina o exhibe actividad de la fosfatasa alcalina inducible.

11. La célula aislada de la reivindicación 9, en donde dicha célula es adicionalmente negativa para la expresión de αactina de músculo liso, negativa para la expresión de RANKL, positiva para la expresión de NG2, positiva para la expresión de osteoprotegerina y exhibe actividad de la fosfatasa alcalina inducible.

12. La célula aislada de la reivindicación 7, en donde dicha célula:

expresa uno o más genes a un nivel notoriamente más alto que una célula madre placentaria adherente CD200+, en donde dicho gen o genes comprenden uno o más de BMP6, CDH11, COL10A1, COL14A1, COL15A1, COL1A1, COL1A2, COL3A1, COL4A3, COL5A1, CSF3, CTSK, IGF1R, MINPP1, MMP2, MMP9, MSX1, SMAD1, SMAD3, TGFB3, TGFBR1 y VEGFB, en donde dicha OPAC y dicha célula madre placentaria adherente CD200+se han sometido a un número equivalente de pases;

expresa uno o más genes a un nivel notoriamente más alto que una célula madre mesenquimal derivadas de médula ósea, en donde dicho gen o genes comprenden uno o más de BMP4, BMP6, CD36, CDH11, COL14A1, COL15A1, COL1A1, COL3A1, COL5A1, CSF2, CTSK, FGF2, FGFR1, FLT1, ITGA1, MINPP1, MMP9, MSX1, PDGFA, SERPINH1, TGFB3 y TGFBR1, en donde dicha OPAC y dicha célula madre mesenquimal se han sometido a un número equivalente de pases; y/o expresan uno o más genes a un nivel notoriamente más alto que una células de fibroblasto, en donde dicho gen o genes comprenden uno o más de BMP4, BMP6, CDH11, COL14A1, COL15A1, .COL1A1, COL3A1, COL5A1, FLT1, IGF1R, ITGA1, MINPP1, PDGFA, SERPINH1, SMAD3, TGFB1, TGFB2, TGFB3, TGFBR1, TNF, TUFT1, VCAM1 y VEGFA, en donde dicha OPAC y dicha célula de fibroblasto se han sometido a un número equivalente de pases.

13. La célula aislada de la reivindicación 7, en donde dicha célula secreta una o más de las proteínas decorina, epirregulina, IGFBP-3, IGFBP-6, IL-2 R alfa, IL-17RC, IL-27, proteína de unión a TGF-beta latente 1 (LTBP) , NCAM1, Smad4, TFPI, TGF-beta R1/ALK5 o TIMP-2.

14. La célula aislada de la reivindicación 12, en donde dicha célula secreta las proteínas decorina, epirregulina, IGFBP-3, IGFBP-6, IL-2 R alfa, IL-17RC, IL-27, proteína de unión a TGF-beta latente 1 (LTBP) , NCAM-1, Smad4, TFPI, TGF-beta R1/ALK5 y TIMP-2.

15. Una población aislada de las células de la reivindicación 7.

16. Las células adherentes placentarias osteogénicas aisladas (OPAC) para su uso de acuerdo con la reivindicación 1 o la población aislada de las células de la reivindicación 15, en donde dichas células:

expresan uno o más genes a un nivel notoriamente más alto que un número equivalente de células madre placentarias CD200+ adherentes, en donde dicho gen o genes comprenden uno o más de BMP3 (proteína morfogenética ósea 3) CDH11, COL11A1, COL14A1, COL15A1, DMP1 (fosfoproteína ácida de la matriz de la dentina 1) , DSPP (sialofosfoproteína de la dentina) , ENAM (enamelina) , FGFR2 (receptor 2 del factor de crecimiento de fibroblastos) , MMP10 (metaloproteasa de la matriz 10 (estromelisina 2) , TGFB3 y/o TGFBR1 cuando dichas OPAC y dichas células madre placentarias CD200+ se cultivan en un medio de crecimiento, según se evalúa mediante valores Ct de PCR cuantitativa en tiempo real;

expresan uno o más genes a un nivel notoriamente más alto que un número equivalente de células madre placentarias CD200+ adherentes, en donde dicho gen o genes comprenden uno o más de AMBN (ameloblastina (proteína de la matriz del esmalte) ) , BMP2 (proteína morfogenética ósea 2) , CALCR (receptor de calcitonina) , CDH11, COL11A1, COL14A1, COL15A1, COL2A1, CSF2, CSF3, DMP1, DSPP, ENAM, FGF3, GDF10 (factor 10 de diferenciación de crecimiento) , IGF1 (factor 1 de crecimiento similar a la insulina) , ITGA1 (integrina, alfa 1 (CD49) ) , ITGA2 (integrina, alfa 2 (CD49B) ) , MMP10, MMP8 (metaloproteasa de la matriz 8 (colagenasa de neutrófilos) ) , MMP9, PDGFA (factor de crecimiento A derivado de plaquetas) , SMAD1, TGFB3, TGFBR1 y/o TGFBR2 (factor de transformación de crecimiento beta, receptor 2) cuando dichas OPAC y dichas células madre placentarias CD200+ se cultivan en un medio osteogénico, según se evalúa mediante valores Ct de PCR cuantitativa en tiempo real;

expresan uno o más genes a un nivel notoriamente más alto que un número equivalente de células madre placentarias CD200+ adherentes que no son trofoblastos ni citotrofoblastos, en donde dicho gen o genes comprenden uno o más o todos de CDH11, COL14A1, COL15A1, DMP1, DSPP, ENAM, MMP10, TGFB3 y/o TGFBR1, independientemente de si dichas OPAC y dichas células madre placentarias CD200+ se cultivan en un medio de crecimiento o medio osteogénico, según se evalúa mediante valores Ct de PCR cuantitativa en tiempo real;

expresan uno o más genes a un nivel notoriamente más bajo que un número equivalente de células madre placentarias CD200+ adherentes que no son trofoblastos ni citotrofoblastos, en donde dicho gen o genes comprenden uno o más o todos de AHSG (glicoproteína alfa-2-HS) , ALPL (fosfatasa alcalina de hígado/hueso/riñón) , EGF (factor de crecimiento epidérmico) , FLT1 (tirosina quinasa 1 relacionada con fms (factor de crecimiento endotelial vascular/receptor del factor de permeabilidad vascular) ) , IGF2, ITGA2, ITGAM (integrina, alfa M (subunidad 3 del receptor del componente 3 del complemento) ) , SCARB1 (receptor depurador clase B, miembro 1) , SOX9 (SRY (región de determinación sexual Y) -caja 9) , TNF, TWIST1 (homólogo 1 de Twist; anteriormente blefarofimosis, epicanto inverso y ptosis 3, acrocefalosindactilia 3) , VCAM1 (molécula 1 de adhesión celular vascular 1) y/o VDR (receptor de vitamina D (1, 25- dihidroxivitamina D3) ) cuando dichas OPAC y dichas células madre placentarias CD200+ se cultivan en un medio de crecimiento, según se evalúa mediante valores Ct de PCR cuantitativa en tiempo real;

expresan uno o más genes a un nivel notoriamente más bajo que un número equivalente de células madre placentarias CD200+ adherentes que no son trofoblastos ni citotrofoblastos, en donde dicho gen o genes comprenden uno o más o todos de BGN (biglicano) , COL11A1, COMP (proteína oligomérica de la matriz del cartílago) FGF1 y/o VCAM1 cuando dichas OPAC y dichas células madre placentarias CD200+ se cultivan en un medio osteogénico, según se evalúa mediante valores Ct de PCR cuantitativa en tiempo real;

expresan VCAM1 a un nivel notoriamente más bajo que un número equivalente de células madre placentarias CD200+ adherentes que no son trofoblastos ni citotrofoblastos, independientemente de si dichas OPAC y dichas células madre placentarias se cultivan en un medio de crecimiento o medio osteogénico, según se evalúa mediante valores Ct de PCR cuantitativa en tiempo real;

expresan uno o más genes a un nivel notoriamente más alto que un número equivalente de células madre mesenquimales derivadas de médula ósea, en donde dicho gen o genes comprenden uno o más o todos de BMP4, CALCR, CD36, CDH11, COL12A1, COL14A1, COL15A1, COL3A1, COL5A1, DMP1, DSPP, FLT1, MSX1, PDGFA, TGFB3, TGFBR1 y/o TUFT1 (Tuftelina 1) , cuando dichas OPAC y dichas células madre mesenquimales se cultivan en un medio de crecimiento, según se evalúa mediante valores Ct de PCR cuantitativa en tiempo real;

expresan uno o más genes a un nivel notoriamente más alto que un número equivalente de células madre mesenquimales derivadas de médula ósea, en donde dicho gen o genes comprenden uno o más o todos de AMBN, CALCR, COL14A1, COL15A1, CSF3, DMP1, DSPP, ITGA1, ITGA2, MMP10, MMP9, MSX1, PDGFA, TGFB1, TGFB3, TGFBR1 y/o TGFBR2, cuando dichas OPAC y dichas células madre mesenquimales se cultivan en un medio osteogénico, según se evalúa mediante valores Ct de PCR cuantitativa en tiempo real;

expresan uno o más genes a un nivel notoriamente más alto que un número equivalente de células madre mesenquimales derivadas de médula ósea, en donde dicho gen o genes comprenden uno o más o todos de CALCR, COL14A1, COL15A1, DMP1, DSPP, MSX1, PDGFA, TGFB3 y/o TGFBR1, independientemente de si dichas OPAC y dichas células madre mesenquimales se cultivan en un medio de crecimiento o medio osteogénico, según se evalúa mediante valores Ct de PCR cuantitativa en tiempo real;

expresan uno o más genes a un nivel notoriamente más bajo que un número equivalente de células madre mesenquimales derivadas de médula ósea, en donde dicho gen o genes comprenden uno o más o todos de ALPL, BGLAP (proteína (gla) ósea gamma-carboxiglutamato) , IGF2, ITGA2, ITGAM, SCARB1 y/o SOXl, cuando dichas OPAC y dichas células madre mesenquimales se cultivan en un medio de crecimiento, según se evalúa mediante valores Ct de PCR cuantitativa en tiempo real;

expresan uno o más genes a un nivel notoriamente más bajo que un número equivalente de células madre mesenquimales derivadas de médula ósea, en donde dicho gen o genes comprenden uno o más o todos de AHSG, ALPL, BGLAP, BGN, BMP3, BMP5, CD36, COL10A1, COL11A1, COL12A1, COL2A1, COL4A3, COMP, EGF, FGF1, FGFR2, IGF2, MMP8, PHEX (homólogo de la endopeptidasa reguladora de fosfato, ligada a X) , RUNX2 (factor de transcripción 2 relacionado con Runt) , SCARB1, SOX1, VCAM1 y/o VEGFB, cuando dichas OPAC y células madre mesenquimales se cultivan en un medio osteogénico, según se evalúa mediante valores Ct de PCR cuantitativa en tiempo real; o expresan uno o más genes a un nivel notoriamente más bajo que un número equivalente de células madre mesenquimales derivadas de médula ósea, en donde dicho gen o genes comprenden uno o más o todos de ALPL, BGLAP, IGF2, SCARB1 y/o SOX9, independientemente de si dichas OPAC y dichas células madre mesenquimales se cultivan en un medio de crecimiento o medio osteogénico, según se evalúa mediante valores Ct de PCR cuantitativa en tiempo real.

17. La población de células aisladas de la reivindicación 15, en donde dicha población de células expresa una o más de las proteínas decorina, epirregulina, IGFBP-3, IGFBP-6, IL-2 R alfa, IL-17RC, IL-27, proteína de unión a TGF-beta latente 1 (LTBP) , NCAM-1, Smad4, TFPI, TGF-beta R1/ALK5 o TIMP-2, o

en donde las células en dicha población de células expresan las proteínas decorina, epirregulina, IGFBP-3, IGFBP6, IL-2 R alfa, IL-17RC, IL-27, proteína de unión a TGF-beta latente 1 (LTBP) , NCAM-1, Smad4, TFPI, TGF-beta R1/ALK5 y TIMP-2.

18. La célula aislada de la reivindicación 7, en donde dicha célula es CD200tenue .

19. Una población aislada de las células de la reivindicación 18.

FIG.1 FIG. 2 FIG. 3 FIG. 4 FIG. 5 FIG. 6 FIG. 7 FIG. 8 FIG. 9 FIG. 10 FIG. 11 FIG. 12 FIG. 13 FIG. 14 FIG. 15 FIG. 16 FIG. 17 FIG. 18 FIG. 19 FIG. 20 FIG. 21