Poblaciones de células madre placentarias.

Un método de producción de una población de células que comprende aislar células madre placentarias de otras células placentarias,

en el que las células madre placentarias se adhieren a un sustrato, y determinar que dichas células madre placentarias expresan CD200; en el que dichas células madre placentarias aisladas constituyen dicha población de células.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2006/049491.

Solicitante: ANTHROGENESIS CORPORATION.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 7 Powder Horn Drive Warren NJ 07059 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: EDINGER,JAMES W, HARIRI,ROBERT J, WANG,JIA-LUN, YE,QIAN, FALECK,HERBERT, ABRAMSON,SASCHA DAWN, LABAZZO,KRISTEN S, PERIERA,MARIAN.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A61K35/12 SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L;   composiciones a base de jabón C11D). › A61K 35/00 Preparaciones medicinales que contienen sustancias de constitución indeterminada o sus productos de reacción. › Sustancias procedentes de mamíferos; Composiciones que comprenden tejidos o células indeterminadas; Composiciones que comprenden células madre no embrionarias; Células modificadas genéticamente (células madre no caracterizadas A61K 35/545; vacunas o preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00).
  • A61K35/50 A61K 35/00 […] › Placenta; Células madre de la placenta; Fluido amniótico; Amnios; Células madre del líquido amniótico.
  • A61K35/64 A61K 35/00 […] › Insectos, p. ej., abejas, avispas o pulgas.
  • A61K38/21 A61K […] › A61K 38/00 Preparaciones medicinales que contienen péptidos (péptidos que contienen ciclos beta-lactama A61K 31/00; dipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina 2,5-dionas, A61K 31/00; péptidos basados en la ergolina A61K 31/48; que contienen compuestos macromoleculares que tienen unidades aminoácido repartidas estadísticamente A61K 31/74; preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00; preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos, p. ej. péptidos como soportes de fármacos, A61K 47/00). › Interferones.
  • A61K45/06 A61K […] › A61K 45/00 Preparaciones medicinales que contienen ingredientes activos no previstos en los grupos A61K 31/00 - A61K 41/00. › Mezclas de ingredientes activos sin caracterización química, p. ej. compuestos antiflojísticos y para el corazón.
  • C12N5/073 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células o tejidos embrionarios; Células o tejidos fetales.
  • C12N5/074 C12N 5/00 […] › Células madre adultas.

PDF original: ES-2549111_T3.pdf

 


Fragmento de la descripción:

Poblaciones de células madre placentarias Esta solicitud reivindica el beneficio de la solicitud provisional de Estados Unidos Nº 60/754.968, presentada el 29 de diciembre de 2005; y reivindica el beneficio de la solicitud provisional de Estados Unidos Nº 60/846.641, presentada el 22 de septiembre de 2006.

1. Campo de la invención La presente invención proporciona células madre placentarias aisladas, poblaciones de células madre placentarias, composiciones que comprenden las células madre y métodos de obtención de las células madre.

2. Antecedentes de la invención Las células madre humanas son células precursoras totipotentes o pluripotentes capaces de generar diversos linajes de células humanas maduras. Existen pruebas que demuestran que las células madre pueden emplearse para repoblar muchos, si no todos, los tejidos y restaurar la funcionalidad fisiológica y anatómica.

Se han caracterizado muchos tipos diferentes de células madre de mamífero. Véase, por ejemplo, Caplan et al., patente de Estados Unidos Nº 5.486.359 (células madre mesenquimatosas humanas) ; Boyse et al., patente de Estados Unidos Nº 5.004.681 (células madre y progenitoras hematopoyéticas fetales y neonatales) ; Boyse et al., U.S. 5.192.553 (lo mismo) ; Beltrami et al., Cell 114 (6) : 763-765 (2003) (células madre cardiacas) ; Forbes et al., J. Pathol. 197 (4) : 510-518 (2002) (células madre hepáticas) . Sangre del cordón umbilical, y células nucleadas totales obtenidas a partir de sangre del cordón umbilical, se han usado en trasplantes para restaurar, parcial o completamente, la función hematopoyética en pacientes que han sido sometidos a terapia de ablación.

3. Sumario de la invención La presente invención se refiere, en general, a células madre placentarias adherentes aisladas, poblaciones de células madre placentarias, composiciones que comprenden las células madre, y métodos de obtención de las células madre.

Específicamente, la presente invención proporciona un método de producción de una población de células que comprende aislar células madre placentarias de otras células placentarias, en el que las células madre placentarias se adhieren a un sustrato, y determinar que dichas células madre placentarias expresan CD200; en el que dichas células madre placentarias aisladas constituyen dicha población.

De acuerdo con una realización, el método comprende adicionalmente determinar que dichas células madre placentarias son CD10+, CD34-y CD105+.

De acuerdo con otra realización, el método comprende adicionalmente determinar que dichas células madre placentarias son CD90+ y CD44+.

De acuerdo con una realización adicional, al menos 70% de las células en dicha población de células son dichas células madre placentarias.

De acuerdo con una realización adicional, al menos 90%, o al menos 99% de las células en dicha población de células son dichas células madre placentarias.

De acuerdo con una realización adicional, al menos 90% de dichas células madre placentarias son de origen no materno.

De acuerdo con una realización adicional, dicha población de células se expande después de dicho aislamiento.

De acuerdo con una realización adicional, el método comprende adicionalmente transformar dichas células madre placentarias en dicha población de células con una secuencia de ADN que codifica una proteína promotora del crecimiento; y exponer a dichas células madre placentarias a condiciones que promueven la producción de dicha proteína promotora del crecimiento.

De acuerdo con una realización adicional, dichas células madre placentarias están determinadas para expresar un gen para dicha CD200 a un nivel notoriamente más elevado que una célula madre mesenquimatosa obtenida a partir de médula ósea que se ha sometido al mismo número de pases en cultivo que dichas células madre placentarias.

En otro aspecto, la invención proporciona un método de preparación de un banco de células madre placentarias, que comprende:

(a) expandir células madre placentarias de cultivo primario procedentes de una placenta postparto humana que se adhieren a un sustrato para una primera pluralidad de duplicaciones de la población y crioconservar dichas células madre placentarias expandidas para formar un banco de células patrón;

(b) expandir una pluralidad de células madre placentarias procedentes del banco de células patrón para una segunda pluralidad de duplicaciones de la población y crioconservar dichas células madre placentarias expandidas para formar un banco de células de trabajo;

(c) expandir una pluralidad de células madre placentarias procedentes del banco de células de trabajo para una tercera pluralidad de duplicaciones de la población; determinar que dichas células madre placentarias procedentes de la etapa (a) , (b) y/o (c) expresan CD200; y crioconservar dichas células madre placentarias expandidas en dosis individuales,

en el que dichas dosis individuales componen colectivamente un banco de células madre placentarias.

En otro aspecto, la invención proporciona una población de células madre placentarias adherentes aisladas, en la que dichas células madre placentarias son CD200+.

De acuerdo con una realización, las células madre placentarias en la población de células de la invención son adicionalmente CD10+, CD34-y CD105+.

De acuerdo con una realización, las células madre placentarias en la población de células de la invención son adicionalmente CD90+ y CD44+.

De acuerdo con una realización adicional, las células madre placentarias se han sometido a un pase al menos 6 veces.

De acuerdo con una realización adicional, las células madre placentarias se han sometido a un pase al menos de 5 a 10 veces.

De acuerdo con una realización adicional, las células madre placentarias se han sometido a un pase no más de 5 a 10 veces.

De acuerdo con una realización adicional, al menos 90% de las células en la población de células de la invención son dichas células madre placentarias.

De acuerdo con una realización adicional, al menos 90%, o al menos 99% de dichas células madre placentarias en la población de células de la invención son de origen no materno.

En otro aspecto, la invención proporciona una composición que comprende la población de células de la invención, y un medio condicionado por dicha población, o un vehículo farmacéuticamente aceptable.

En una realización, la composición está en una forma adecuada para administración intravenosa.

Dentro de los límites de la presente invención, referencia a células madre placentarias de la invención en la siguiente descripción implica que dichas células son CD200+. Las células pueden ser opcionalmente positivas o negativas para otros marcadores celulares.

Por lo tanto, la invención se refiere en primer lugar a células madre aisladas, y poblaciones de células que comprenden dichas células madre, en las que las células madre están presentes, y aislables a partir de tejido placentario (por ejemplo, amnios, corion, cotiledones placentarios, etc.) . Las células madre placentarias muestran una o más características de una célula madre (por ejemplo, muestran marcadores asociados con células madre, se replican al menos 10-20 veces en cultivo en un estado indiferenciado, se diferencian en células adultas representativas de las tres capas germinales, etc.) , y se pueden adherir a un sustrato para cultivo tisular (por ejemplo, plástico para cultivo tisular tal como la superficie de una placa para cultivo tisular o una placa de múltiples pocillos) .

En una realización, la invención se refiere a una célula madre placentaria aislada que es CD200+. Dicha célula madre puede ser CD200+ y HLA-G+. Dicha célula madre puede ser además CD73+ y CD105+ o CD34-, CD38-o CD45-. Dicha célula madre puede ser además CD34-, CD38-y CD45-. Dicha célula madre puede ser además CD34-, CD38-, CD45-, CD73+ y CD105+. Dicha célula madre facilita la formación de uno o más cuerpos de tipo embrioide a partir de una población de células placentarias aisladas que comprende células madre placentarias, cuando dicha población se cultiva en condiciones que permiten la formación de cuerpos de tipo embrioide.

En otra realización, la invención proporciona una población de células placentarias aisladas que comprende, por ejemplo, que está enriquecida en, células madre CD200+. En diversas realizaciones, al menos 10%, al menos 20%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 50% al menos 60%, al menos 70%, al menos 80%, al menos 90% o al menos 95% o más de dichas células placentarias aisladas son células madre CD200+. Dichas células... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un método de producción de una población de células que comprende aislar células madre placentarias de otras células placentarias, en el que las células madre placentarias se adhieren a un sustrato, y determinar que dichas células madre placentarias expresan CD200; en el que dichas células madre placentarias aisladas constituyen dicha población de células.

2. El método de la reivindicación 1, que comprende adicionalmente determinar que dichas células madre placentarias son CD10+, CD34-y CD105+.

3. El método de la reivindicación 2, que comprende adicionalmente determinar que dichas células madre placentarias son CD90+ y CD44+.

4. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que al menos 70%, al menos 90%, o al menos 99% de las células en dicha población de células son dichas células madre placentarias.

5. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que al menos 90% de dichas células madre placentarias aisladas son de origen no materno.

6. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que dicha población de células se expande después de dicho aislamiento.

7. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-6, que comprende adicionalmente transformar dichas células madre placentarias en dicha población de células con una secuencia de ADN que codifica una proteína promotora del crecimiento; y exponer a dichas células madre placentarias a condiciones que promueven la producción de dicha proteína promotora del crecimiento.

8. El método de la reivindicación 1, en el que se determina que dichas células madre placentarias expresan un gen para dicha CD200 a un nivel notoriamente más elevado que una célula madre mesenquimatosa obtenida a partir de médula ósea que se ha sometido al mismo número de pases en cultivo que dichas células madre placentarias.

9. Un método de preparación de un banco de células madre placentarias, que comprende:

(a) expandir células madre placentarias de cultivo primario procedentes de una placenta postparto humana que se adhieren a un sustrato para una primera pluralidad de duplicaciones de la población y crioconservar dichas células madre placentarias expandidas para formar un banco de células patrón;

(b) expandir una pluralidad de células madre placentarias procedentes del banco de células patrón para una segunda pluralidad de duplicaciones de la población y crioconservar dichas células madre placentarias expandidas para formar un banco de células de trabajo;

(c) expandir una pluralidad de células madre placentarias procedentes del banco de células de trabajo para una tercera pluralidad de duplicaciones de la población; determinar que dichas células madre placentarias procedentes de la etapa (a) , (b) y/o (c) expresan CD200; y crioconservar dichas células madre placentarias expandidas en dosis individuales,

en el que dichas dosis individuales componen colectivamente un banco de células madre placentarias.

10. Una población de células madre placentarias adherentes aisladas, en la que dichas células madre placentarias son CD200+.

11. La población de células madre placentarias adherentes aisladas de la reivindicación 10, en la que dichas células madre placentarias son adicionalmente CD10+, CD34-y CD105+.

12. La población de células madre placentarias adherentes aisladas de la reivindicación 11, en la que dichas células madre placentarias son adicionalmente CD90+ y CD44+.

13. La población de células madre placentarias adherentes aisladas de cualquiera de las reivindicaciones 10-12, en la que dichas células madre placentarias se han sometido a un pase al menos 6 veces, al menos de 5 a 10 veces, o no más de 5 a 10 veces.

14. La población de células madre placentarias adherentes aisladas de cualquiera de las reivindicaciones 10-13, en el que al menos 90% de las células en dicha población de células son dichas células madre placentarias.

15. La población de células madre placentarias adherentes aisladas de cualquiera de las reivindicaciones 10-14, en la que al menos 90%; o al menos 99% de dichas células madre placentarias son de origen no materno.

16. Una composición que comprende la población de células madre placentarias adherentes aisladas de cualquiera de las reivindicaciones 10-15, y un medio condicionado por la población de células madre placentarias adherentes aisladas de cualquiera de las reivindicaciones 10-15 o un vehículo farmacéuticamente aceptable.

17. La composición de la reivindicación 16, que está en una forma adecuada para administración intravenosa.


 

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