Método de análisis de sangre.

Método para analizar sangre mediante un dispositivo de cartucho (20),

que comprende las etapassiguientes:

proporcionar un soporte de electrodo (14) que presenta dos pares de hilos de electrodo o electrodos (16, 24)incorporados simétricamente para dos resultados de medición separados independientes;medir la impedancia eléctrica entre por lo menos dos pares diferentes de hilos de electrodo o electrodos (16, 24, 25,26);

comparar los valores medidos de impedancia eléctrica;

descartar y repetir las mediciones en el caso de variación fuera de un intervalo umbral predeterminado; o

indicar los valores medidos de impedancia eléctrica y/o el valor medio o de la mediana de los mismos en el caso deque la variación se encuentre comprendida dentro del intervalo umbral predeterminado.

Método de análisis de sangre La presente invención se refiere a un método para el análisis de sangre.

Aunque la presente invención puede utilizarse en muchos campos de medición de líquidos, a continuación se describirá en relación a la medición de la función plaquetaria de la sangre.

La sangre consiste de células suspendidas en la denominada plasma, un líquido rico en proteínas. Los grupos principales de células en la sangre son los glóbulos rojos, los glóbulos blancos y las plaquetas. Las plaquetas son responsables de taponar huecos u orificios en las paredes de los vasos sanguíneos. Lo anterior se consigue mediante un mecanismo denominado reacción de agregación-adhesión. Al agregarse las plaquetas, se vuelven pegajosas y, como resultado de ello, se enganchan entre sí y al tejido dañado. Habitualmente lo anterior ocurre al entrar en contacto las plaquetas con determinados materiales y compuestos químicos, especialmente los relacionados con las células dañadas.

La adhesión plaquetaria a los vasos sanguíneos dañados es una propiedad esencial para cerrar heridas y de esta manera garantizar la supervivencia del organismo tras, por ejemplo, un traumatismo. Sin embargo, la adhesión y la agregación de las plaquetas también pueden resultar extremadamente peligrosas en el caso de que las plaquetas confundan un vaso envejecido o inflamado por una lesión vascular y de esta manera dificulten el flujo sanguíneo en tejidos de importancia vital. Dichos procesos tienen lugar durante un infarto de miocardio o un ictus, enfermedades que explican más muertes en las naciones industrializadas que las enfermedades infecciosas o el cáncer.

Un número creciente de pacientes que han sufrido un infarto de miocardio o un ictus, así como pacientes con alto riesgo de dichos sucesos, es tratado para una tendencia reducida de sus plaquetas de agregarse utilizando sustancias denominadas “agentes antiplaquetarios”. Aparte de su efecto beneficioso (reducir la incidencia de que las plaquetas cierren vasos vitalmente importantes) , estos fármacos también pueden inducir el sangrado. Sin embargo, un peligro mayor se debe al hecho de que en algunos de los pacientes los fármacos aparentemente no funcionan correctamente. Algunos estudios actuales han demostrado que hasta 25% de los pacientes tratados no responden adecuadamente a este tratamiento.

De esta manera, no sólo resulta de interés científico, sino también de elevada importancia clínica poder someter a ensayo la función de las plaquetas y la respuesta individual a fármacos que interfieren con su activación. Se utilizan varias técnicas según la técnica anterior para analizar funciones plaquetarias o la acción de fármacos antiplaquetarios.

Un desarrollo temprano y todavía ampliamente utilizado es el agregómetro de Born, que mide el cambio de la transmisión de luz del plasma rico en plaquetas (PRP) durante el proceso de agregación. El plasma rico en plaquetas se obtiene mediante centrifugación de sangre anticoagulada a una velocidad relativamente baja, lo que elimina los glóbulos rojos pesados (llenos de hemoglobina) del plasma, pero deja las plaquetas, mucho más ligeras, en la solución. Debido al contenido de plaquetas, la transmisión de la luz del PRP es relativamente bajo. Al agregarse las plaquetas, se reduce la densidad óptica, debido a que las plaquetas forman pocos agregados de gran tamaño, que interfieren mucho menos con la luz transmitida a través de la muestra.

Una desventaja de esta técnica es la necesidad de producir PRP, cuya extracción es un procedimiento complicado, laborioso y, de esta manera, caro. Además, la agregación de las plaquetas no se mide en su entorno natural, la sangre; de esta manera, no se mide la influencia de los glóbulos rojos y blancos sobre las plaquetas.

Otros métodos dados a conocer en los documentos nº US 4.604.894, de Kratzer y Born, nº US 6.010.911, de Baugh et al., y nº US 5.922.511, de Durbin et al., requieren cartuchos relativamente complejos y caros, que interfieren con la utilización de dichas técnicas para ensayos rutinarios.

El documento de patente US nº 4.319.194, de Cardinal et al., da a conocer un análisis de la agregación plaquetaria típicamente llevado a cabo en sangre completa mediante la medición de la impedancia eléctrica entre dos electrodos, sumergiéndolos en una muestra. Durante el contacto inicial con la sangre o PRP, los electrodos se recubren con una monocapa de plaquetas. Al añadir un agente agregante, las plaquetas se acumulan gradualmente sobre el recubrimiento monocapa, incrementando la impedancia entre los electrodos. El cambio de impedancia se registra como función del tiempo. Resulta preferente que los electrodos comprendan metales preciosos, ya que los metales básicos derivan en mezclas de sangre-solución salina.

El documento nº DE 33 14 10, de Siemens AG, describe una celda con tres electrodos situados de manera coaxial

entre sí.

El documento de patente US nº 4.591.793, de Freilich, describe una sustitución de los electrodos de hilo por una tinta conductora impresa sobre una base plástica no reactiva.

Sin embargo, dicho dispositivo resulta perjudicial debido al hecho de que las plaquetas presentan dificultades para adherirse a la superficie conductora expuesta del dispositivo de Freilich. En ocasiones las plaquetas agregadas se desprenden de la superficie, provocan un cambio súbito de impedancia. Por lo tanto, los resultados medidos por el dispositivo son inconsistentes y no reproducibles.

Un ensamblaje adicional de celdas de medición según la técnica anterior se da a conocer en el documento de patente US nº 6.004.818, de Freilich et al., que se muestra en las figs. 11A y 11B.

La fig. 11A ilustra una vista explosiva de una parte de un dispositivo de celda de medición que comprende un aislante 1, interpuesto entre dos electrodos en forma de bandera 2. Cada electrodo 2 incluye una pestaña de conexión 3 en un extremo y una punta 4 en el otro extremo de la misma, con un surco 5 que une la pestaña 3 y la punta 4, respectivamente. Tras unir los dos electrodos 2 y el aislante 1, se aplica un recubrimiento no conductor en el aislante 1 y en los surcos 5 del electrodo.

La fig. 11B ilustra una vista en perspectiva de un dispositivo de celda de medición según la técnica anterior. Tal como se muestra en la fig. 11B, el ensamblaje de electrodos se fija dentro de una cubeta 56 utilizando un clip posicional 7. Antes y durante la medición, se activa una barra de agitación 8 para generar un flujo circular de muestra dentro de la cubeta 6.

Una desventaja del dispositivo de celda de medición anteriormente indicado es la utilización de lámina de metal perforada para los electrodos 2. La silueta de los electrodos puede producirse económicamente mediante el procedimiento de punzonado o métodos relacionados. Sin embargo, las calidades superficiales producidas mediante dichos métodos son relativamente pobres y varían durante la producción de grandes cantidades (debido al desgaste de las cuchillas punzonadoras utilizadas durante el procedimiento) . De esta manera, la calidad de las superficies, las cuales afectan mucho a la medición, varían fuertemente, resultando en grandes variaciones entre diferentes electrodos desechables.

Una desventaja adicional se debe al hecho de que el dispositivo de celda de medición completo consiste de seis elementos diferentes: los dos electrodos 3, el aislante 1, el recubrimiento, una cubeta 6, un clip posicional 7 y una barra de agitación 8. Lo anterior resulta en un procedimiento de producción complejo y caro, que resulta laborioso o que requiere elevadas inversiones en una línea automatizada de ensamblaje.

Además, el dispositivo de celda de medición de Freilich no resuelve la variación relativamente elevada que se informa de la agregometría de sangre completa. En el documento nº US 6.004.818 se informa de una variación de aproximadamente 10% a 15% entre múltiples mediciones para dicho ensamblaje de celdas de medición.

Es un objetivo de la presente invención eliminar la limitada reproducibilidad de métodos anteriores según la técnica anterior para la medición de la agregación en sangre completa.

Descripción resumida de la invención La presente invención proporciona un método para analizar la sangre, que comprende las características indicadas en la reivindicación 1.

Las reivindicaciones dependientes dan a conocer características y ventajas adicionales de la presente invención.

Breve descripción de los dibujos La invención podrá entenderse mejor en referencia a los dibujos, en los que:

la fig. 1 es una vista en perspectiva de una celda utilizada para la presente... [Seguir leyendo]

1. Método para analizar sangre mediante un dispositivo de cartucho (20) , que comprende las etapas siguientes:

proporcionar un soporte de electrodo (14) que presenta dos pares de hilos de electrodo o electrodos (16, 24) incorporados simétricamente para dos resultados de medición separados independientes; medir la impedancia eléctrica entre por lo menos dos pares diferentes de hilos de electrodo o electrodos (16, 24, 25, 26) ; comparar los valores medidos de impedancia eléctrica; descartar y repetir las mediciones en el caso de variación fuera de un intervalo umbral predeterminado; o indicar los valores medidos de impedancia eléctrica y/o el valor medio o de la mediana de los mismos en el caso de que la variación se encuentre comprendida dentro del intervalo umbral predeterminado.

2. Método para analizar sangre mediante un dispositivo de cartucho (20) , que comprende las etapas siguientes: proporcionar un soporte de electrodo (14) que presenta tres o cuatro pares de electrodo (16, 24, 25) incorporados linealmente para tres resultados de medición separados; medir la impedancia eléctrica entre por lo menos dos pares de hilos de electrodo o electrodos diferentes (16, 24, 25, 26) ; comparar los valores medidos de impedancia eléctrica; descartar y repetir las mediciones en el caso de que la variación se encuentre fuera de un intervalo umbral predeterminado; o indicar los valores medidos de impedancia eléctrica y/o el valor medio o de la media de los mismos en el caso de que la variación se encuentre comprendida dentro del intervalo umbral predeterminado.

3. Método para analizar sangre mediante un dispositivo de cartucho (20) , que comprende las etapas siguientes: proporcionar una celda (9) que presenta una parte receptora (10) para recibir una muestra de sangre, en la que se disponen simétricamente en la misma posición radial en la parte receptora (10) por lo menos tres pares de electrodo (16, 24, 25) ; medir la impedancia eléctrica entre por lo menos dos pares de hilos de electrodo o electrodos diferentes (16, 24, 25, 26) ; comparar los valores medidos de impedancia eléctrica; descartar y repetir las mediciones en el caso de que la variación se encuentre fuera de un intervalo umbral predeterminado; o indicar los valores medidos de impedancia eléctrica y/o el valor medio o de la mediana de los mismos en el caso de que la variación se encuentre comprendida dentro del intervalo umbral predeterminado.

4. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque sólo se rechazan aquellos valores medidos que se encuentren fuera de un intervalo umbral predeterminado, en el que se indican los valores medidos restantes y/o los valores medios de los mismos.

5. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque los hilos de electrodo presentan un diámetro de entre aproximadamente 0, 1 mm y 0, 5 mm, preferentemente de 0, 3 mm.

6. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 4 ó 5, caracterizado porque cada hilo de electrodo sobresale del soporte de electrodo (14) mediante la formación de una parte de sensor, en el que la longitud de los extremos de los hilos de electrodo que sobresalen del soporte de electrodo (14) se encuentra comprendida entre 2 y 6 mm, preferentemente es de 4 mm.