Medio de cultivo adecuado para la proliferación de células madre neurales.

Medio de cultivo adecuado para la proliferación de células madre neurales.



Esta invención está relacionada con el empleo del compuesto 3,l2-di-O-acetil-8-O-tigloilingol (de aquí en adelante ELAF) o una sal farmacológicamente activa de dicho compuesto, para favorecer la proliferación de precursores neurales o células madre neurales en cultivo. Concretamente está relacionada con un medio de cultivo adecuado pan la proliferación de células madre neurales o precursores neurales in vitro que comprende el compuesto 3,12-di-O-acetil-8-O-tigloilingol y/o una sal farmacológicamente activa del mismo.

Tipo: Patente de Invención. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: P201201149.

Solicitante: UNIVERSIDAD DE CADIZ.

Nacionalidad solicitante: España.

Inventor/es: MACIAS SANCHEZ,ANTONIO JOSE, CASTRO GONZÁLEZ,CARMEN, ECHEVERRI,FERNANDO, HERNANDEZ GALAN,Rosario, GERIBALDI DOLDÁN,Noelia, AGUILERA DÍAZ,Almudena, DOMÍNGUEZ RISCART,Jesús, MURILLO CARRETERO,Maribel, CASTILLO RODRIGUEZ,Angeles.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A61K31/336 SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L;   composiciones a base de jabón C11D). › A61K 31/00 Preparaciones medicinales que contienen ingredientes orgánicos activos. › teniendo ciclos de tres eslabones, p. ej. oxirano, fumagilina.
  • A61P25/28 A61 […] › A61P ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS O DE PREPARACIONES MEDICINALES.A61P 25/00 Medicamentos para el tratamiento de trastornos del sistema nervioso. › de los problemas neurodegenerativos del sistema nervioso central, p. ej. noótropos, activadores del conocimiento, medicamentos para el tratamiento del Alzheimer o de otras formas de demencia.
  • C12N5/0797 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células madre; Células progenitoras.

PDF original: ES-2404481_A2.pdf

 


Fragmento de la descripción:

MEDIO DE CULTIVO ADECUADO PARA LA PROLIFERACIÓN DE CÉLULAS MADRE NEURALES.

SECTOR DE LA TÉCNICA

Esta invención está relacionada con el empleo del compuesto 3, 12-di-O-acetil-8-0tigloilingol (de aquí en adelante ELAF) o una sal farmacológicamente activa de dicho compuesto, para favorecer la proliferación de precursores neurales o células madre neurales en cultivo.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La existencia de regeneración de lesiones a partir de células madre neurales en el sistema nervioso central, se ha descrito principalmente en modelos de isquemia transitoria global o focal, epilepsia y en lesiones por traumatismo craneal, entre otras. Así en modelos de isquemia, se ha comprobado que en la zona lesionada, aparecen nuevas neuronas que se han podido generar in situ por activación de células madre locales, o como resultado de la migración de precursores desde las áreas neurogénicas (giro dentado y zona subventricular) . En un modelo de isquemia transitoria global se ha observado un aumento de la proliferación de precursores neurales en el giro dentado (Liu, J. et al. Increased neurogenesis in the dentate gyrus after transient global ischemia in gerbils. J Neurosci 18:7768-7778, 1998) y un efecto similar puede observarse en modelos de isquemia focal (Jin, K. et al. Neurogenesis in dentate subgranular zone and rostral subventricular zone after focal cerebral ischemia in the rato Proc Natl Acad Sci USA 98:4710-4715, 2001) , así como en modelos de epilepsia (Parent, J.M et al. Dentate granule cell neurogenesis is increased by seizures and contributes to aberrant network reorganization in the adult rat hippocampus. J Neurosci.17:3727-3738, 1997) . De forma similar, el efecto se observa en otra de las zonas neurogénicas, la zona subventricular (Fallon, J. et al. In vivo induction o[massive proliferation, directed migration, and differentiation o[ neural cells in the adult mammalian brain. Proc Natl Acad Sci USA 97:14, 68614, 691, 2000) . Los precursores neurales proliferantes en estas regiones neurogénicas, estimulados tras la lesión, dan lugar a la producción de nuevos neuroblastos que, eventualmente, migran en dirección a la zona lesionada. Cualquiera que sea su origen, la capacidad de regeneración es muy escasa, habiéndose descrito una reposición neuronal entre 0, 2 y 10%, según el área afectada y el tipo de lesión (Arvidsson, A. et al. Neuronal replacement [rom endogenous precursors in the adu/t brain after stroke. Nat Med 8:963-970, 2002; Nakatomi, H et al. Regeneration o[ hippocampal pyramidal neurons after ischemic brain injur y , by recruitment o[ endogenous neural progenitors. Cell 110:429-441, 2002; Teramoto, T. et al. EGF

amplifies the replacement of parvalbuminexpressing striatal interneurons after ischemia. J Clin Invest. 111:1125-1132, 2003) . El hecho de que haya una respuesta neurogénica a la lesión hace pensar que la formación de nuevas neuronas sea un mecanismo eficaz en la reparación de pequeñas lesiones, que permanecen silentes precisamente porque las neuronas que hacen apoptosis son reemplazadas, al menos en parte, por neuronas de nueva formación. Un estudio reciente demuestra que en los animales que han sufrido un traumatismo craneal, se incrementa la neurogénesis en el giro dentado del hipocampo y posteriormente estos animales recuperan su capacidad de realizar tareas de memoria especial. Sin embargo, si en estos animales se eliminan selectivamente las células madre que comienzan a dividirse en el hipocampo como consecuencia del daño inducido por el traumatismo, estos animales no pueden recuperar la capacidad para realizar tareas de memoria espacial (Blaiss CA, Yu TS, Zhang G, Chen J, Dimchev G, Parada LF, Powell CM, Kernie SG. Temporally specified genetic ablation of neurogenesis impairs cognitive recover y after traumatic brain injur y . J N eurosci. 2011 31 :4906-4916) , demostrando así que la reposición neuronal en estas regiones tiene un efecto sobre la recuperación de la memoria tras un traumatismo craneal. Adicionalmente, la aparición de neurogénesis en lesiones cerebrales, se ha demostrado también en humanos, concretamente se ha podido observar que en muestras de cerebro de pacientes sometidos a cirugía tras una lesión por traumatismo craneal, aparecen en la zona de la corteza cerebral alrededor de la lesión, células madre neurales proliferantes y neuroblastos (Zheng W, Zhuge Q, Zhong M, Chen G, Shao B, Wang H, Mao X, Xie L, Jin K. Neurogenesis in Adult Human Brain after Traumatic Brain Injur y . J Neurotrauma. 2011. [Epub ahead of print]

Sin embargo, las lesiones graves o las experimentales con mayor pérdida neuronal no pueden ser resueltas, a menos que se establezcan medidas terapéuticas eficaces para incrementar de forma significativa el proceso neurogénico. Una de las alternativas que podría contribuir a resolver, los problemas clínicos que plantean las enfermedades que cursan con pérdida neuronal es el transplante de células madre que puedan posteriormente generar nuevas neuronas. Varios laboratorios han intentado esta estrategia en modelos animales a los que se han transplantado células madre de origen embrionario (Cao et al. Pluripotent stem cells engrafted into the normal or lesioned adu/t rat spinal cord are restricted to a gliallineage. Exp Neurol.167:48-58, 2001) , células madre neurales de animales adultos (Pluchino, S. et al. Injection of adu/t neurospheres induces recover y in a chronic model ofmultiple sclerosis. Nature 422: 688-694, 2003) , o bien células procedentes de células madre sometidas a diferentes grados de diferenciación in vitro. El fenómeno más generalmente observado es que, las células madre que se implantan en las zonas neurogénicas del cerebro (por ejemplo, la zona subventricular o el bulbo olfativo en roedores) se diferencian a neuroblastos y se convierten en neuronas maduras pero no ocurre este mismo fenómeno en las zonas no neurogénicas del cerebro. (Herrera, D. G. et al. Adult-derived neural precursors transplanted into multiple regions in the adult brain. Ann Neurol. 46:867-77, 1999; Mligiliche, NL.. et al. Survival of neural progenitor cells from the subventricular zone of the adult rat after transplantation into the host spinal cord of the same strain of adult rato Anat Sci Int. 80:229-34, 2005) .

Por 10 tanto uno de los problemas con el que se enfrenta la presente invención, es que, si bien las células madre que se implantan en las zonas neurogénicas del cerebro (por ejemplo, la zona subventricular o el bulbo olfativo en roedores) se diferencian a neuroblastos y se convierten en neuronas maduras, cuando el transplante se produce en otras zonas, inician la ruta de diferenciación glial. En las lesiones que ocurren en zonas no neurogemcas aparecen precursores neurales proliferantes que posteriormente podrían diferenciarse y la fuente endógena de precursores neurales en estas regiones es la glía parenquimal. Estas células de glía se activan tras una lesión y dan lugar a precursores neurales la mayoría de los cuales se diferencian a células de glía y muy pocas a neuronas.

Adicionalmente y sin peIjuicio de lo anterior, la presente invención también se enfrenta al problema de elegir la fuente de los precursores a trasplantar a la hora de realizar este tipo de trasplantes. Las células madre embrionarias diferenciadas in vitro a células madre neurales o los precursores neurales fetales son una de las fuentes más abundante. Sin embargo, no es fácil encontrar donantes de precursores embrionarios y fetales por lo que sería de gran utilidad poder aislar precursores neurales de cerebro adulto, cultivarlas y expandirlas in vitro para su posterior uso en trasplantes. Así, identificar agentes que favorezcan la expansión de los precursores neurales en cultivo resultará de gran utilidad en el desarrollo de terapias regenerativas del sistema nervioso.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

Fig 1. Ensayo de neuroesferas: efecto de ELAF sobre cultivos de precursores neurales in vitro. A. Imágenes de microscopía de contraste de fase representativas de cultivos de precursores neurales crecidos en presencia y ausencia de ELAF (10 J.lM) . En todos los casos la proliferación se estimulaba mediante la adición de los factores de crecimiento EGF+bFGF al medio de cultivo. B. Efecto de concentraciones crecientes de ELAF sobre el tamaño de las neuroesferas (* p<O.OI en Test T -student en relación al control sin ELAF) . C. Efecto de ELAF (10 J.lM) sobre el número total de células en los cultivos de neuroesferas.

Fig 2. Ensayo de neuroesferas: efecto de ELAF sobre cultivos de precursores neurales in vitro en presencia del inhibidor de las isoformas clásicas y nóveles de PKC G06850. A. Imágenes de microscopía de contraste de fase representativas de cultivos... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Medio de cultivo adecuado para la proliferación de células madre neurales o precursores neurales in vitro, que comprenda el compuesto 3, 12-di-O-acetil5 8-0-tigloilingol y/o una sal farmacológicamente activa del mismo.

2. Medio de cultivo según la reivindicación 1, que además comprenda el factor de crecimiento epidérmico (EGF) y/o el factor básico de crecimiento de fibroblastos (bFGF) y donde el compuesto 3, 12-di-O-acetil-8-0-tigloilingol y/o la sal farmacológicamente activa del mismo se hallen en el medio en un rango de concentración de 1 pmol/L a 40 ¡..tmollL.

3. Uso del medio de cultivo según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, para favorecer la proliferación de precursores neurales o células madre neurales en cultivo.


 

Patentes similares o relacionadas:

Tratamientos de combinación que comprenden imidazopirazinonas para el tratamiento de trastornos psiquiátricos y/o cognitivos, del 29 de Julio de 2020, de H. LUNDBECK A/S: Un compuesto de Fórmula (I) **(Ver fórmula)** en donde n es 0 o 1; q es 0 o 1; R1 se selecciona del grupo que consiste en bencilo, indanilo, indolina y heteroarilos […]

Imagen de 'Composiciones y métodos para el tratamiento de trastornos de…'Composiciones y métodos para el tratamiento de trastornos de células plasmáticas y trastornos prolinfocíticos de células b, del 29 de Julio de 2020, de Knopp Biosciences LLC: Una composición que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de dexpramipexol para su uso en el tratamiento de un trastorno de células B caracterizado por niveles elevados […]

Composición farmacéutica basada en nanoestructura de grafeno para prevenir o tratar enfermedades neurodegenerativas, del 22 de Julio de 2020, de Seoul National University R & DB Foundation: Una composición farmacéutica para su uso en la prevención o el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas, que comprende puntos cuánticos de grafeno como […]

Composición para el tratamiento de enfermedades isquémicas o trastornos inflamatorios neurogénicos, que contienen el secretoma de células progenitoras neurales como ingrediente activo, del 22 de Julio de 2020, de S-BIOMEDICS: Una composición para uso en el tratamiento de enfermedad cerebrovascular isquémica, cardiopatía isquémica, infarto de miocardio, enfermedad de Alzheimer, enfermedad […]

Triple combinación de antagonistas del receptor 5-HT6 puros, inhibidores de la acetilcolinesterasa y antagonista del receptor NMDA, del 15 de Julio de 2020, de SUVEN LIFE SCIENCES LIMITED: Una combinación que comprende un antagonista del receptor 5-HT6 puro, un inhibidor de la acetilcolinesterasa y un antagonista del receptor NMDA, en el que el antagonista […]

Antagonistas del receptor p2x7 derivados de N-[2-(4-fenoxipiperidin-1-il)-2-(1,3-tiazol-5-il)etil]benzamida y N-[2-(4-benciloxipiperidin-1-il)-2-(1,3-tiazol-5-il)etil]benzamida sustituidas, del 15 de Julio de 2020, de AXXAM S.P.A: Un compuesto de la siguiente fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo: **(Ver fórmula)** incluyendo cualquier forma estereoquímicamente […]

Composición que comprende cinamaldehído y cinc, del 8 de Julio de 2020, de SOCIETE DES PRODUITS NESTLE S.A.: Composición que comprende cinamaldehído y cinc para la utilización en la mejora de uno o más de rendimiento cognitivo, cognición, humor o memoria en un […]

Composiciones para modular la expresión de SOD-1, del 24 de Junio de 2020, de Biogen MA Inc: Un compuesto antisentido según la siguiente fórmula: mCes Aeo Ges Geo Aes Tds Ads mCds Ads Tds Tds Tds mCds Tds Ads mCeo Aes Geo mCes Te (secuencia […]

Utilizamos cookies para mejorar nuestros servicios y mostrarle publicidad relevante. Si continua navegando, consideramos que acepta su uso. Puede obtener más información aquí. .