Inmunización intralinfática para inducir respuestas de CTL efectores prolongadas.

El uso de un antígeno peptídico o un ácido nucleico que codifica dicho antígeno para la fabricación de unmedicamento para el tratamiento del cáncer o de infecciones crónicas,

comprendiendo dicho medicamento unacomposición que contienen antígenos fisiológicamente aceptable para la administración directamente al bazo, a unnódulo linfático o a un vaso linfático de un mamífero,

en el que dicho antígeno induce una respuesta de CTL efectores específicos de antígeno en el mamífero, yen el que el antígeno se administra al mamífero a un nivel suficiente como para inducir la respuesta de CTLefectores específicos de antígeno en el mamífero, y

en el que el nivel del antígeno en el sistema linfático del mamífero se mantiene a lo largo de un tiempo suficientepara mantener la respuesta de CTL efectores específicos de antígeno.

Inmunización intralinfática para inducir respuestas de CTL efectores prolongadas Campo de la invención La invención se refiere al uso de un antígeno peptídico o un ácido nucleico que codifica dicho antígeno para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer o de infecciones crónicas, comprendiendo dicho medicamento una composición que contienen antígenos fisiológicamente aceptable para la administración directamente al bazo, a un nódulo linfático o a un vaso linfático de un mamífero,

en el que dicho antígeno induce una respuesta de CTL efectores específicos de antígeno en el mamífero, y

en el que el antígeno se administra al mamífero a un nivel suficiente como para inducir la respuesta de CTL efectores específicos de antígeno en el mamífero, y

en el que el nivel del antígeno en el sistema linfático del mamífero se mantiene a lo largo de un tiempo suficiente para sostener la respuesta de CTL efectores específicos de antígeno.

Antecedentes de la invención Los linfocitos T citotóxicos (CTL) son células blancas sanguíneas que se encuentran en la sangre, el bazo y la linfa. Los CTL tienen la capacidad de atacar y matar otras células del cuerpo de una manera muy específica. Cuando los CTL son estimulados por un antígeno específico, migran a través de los tejidos del cuerpo en una misión de quot;búsqueda y destrucciónquot; de células que portan el antígeno específico. Tanto de origen vírico como asociado a un tumor, los CTL detectan el antígeno que está unido a complejos de histocompatibilidad mayor (MHC) sobre la superficie de células diana potenciales. Cuando los CTL han identificado el antígeno sobre la superficie celular, su función es asestar un golpe letal a la célula.

Aunque existen cientos de millones de CTL que residen en el bazo, cada CTL individual responde exclusivamente a un antígeno exclusivo y específico. Estos CTL individuales, denominados precursores de CTL (CTLp) , sufren una división celular o proliferan tras la activación por un antígeno específico para producir células hijas precisamente con la misma especificidad de antígeno que la célula de origen. Esta proliferación aumenta el número total y, por tanto, la frecuencia, de CTLp específicos en el cuerpo. Una proporción de estos CTL recién generados, durante un breve tiempo, recirculan a través del cuerpo (denominados CTL efectores) , y tienen la capacidad para identificar y destruir las células que portan el antígeno específico que reconocen. Un significativo conjunto de pruebas experimentales sugiere que los CTL específicos para antígenos tumorales pueden inhibir el crecimiento tumoral. Por desgracia, la mayoría de los tumores solo tienen una capacidad muy débil para estimular respuestas de CTL y no se ha podido inducir una respuesta de CTL y después mantenerla durante un periodo de tiempo suficiente para que inhiba, de forma continua, el crecimiento tumoral. Aunque se han realizado muchos intentos para aumentar directamente la capacidad de las células tumorales para estimular respuestas de CTL para eliminar tumores en pacientes, estos intentos han tenido un éxito limitado. Sin embargo, los avances técnicos a lo largo de los últimos diez años han permitido la identificación de antígenos peptídicos naturales que están presentes sobre células tumorales y que son reconocidos por CTL. Estas dianas de antígenos incluyen proteínas expresadas en una sobreabundancia significativa, proteínas embrionarias expresadas de modo anómalo, productos de proteínas procedentes de oncogenes mutados o genes supresores, o proteínas derivadas de virus que provocan cáncer presentes en células tumorales. El desafío ha sido encontrar una forma en la cual administrar un antígeno de modo que induzca una respuesta de CTL antitumoral y se mantenga a lo largo del tiempo. Aunque en la actualidad se han realizado muchos intentos para utilizar estos antígenos de modo clínico en una vacuna, los resultados han sido menos que satisfactorios.

Una explicación de por qué las terapias de CTL han sido en gran medida ineficaces para erradicar o controlar tumores en un entorno clínico incluye lo siguiente:

(a) Los diseños de las vacunas no han sido adecuados para iniciar una fuerte respuesta de CTL;

(b) Las células tumorales pueden infrarregular moléculas de MHC, dando como resultado la pérdida de presentación de antígenos desde la superficie de las células, escapando con ello a la detección por CTL;

(c) Después de la inducción, la recirculación de CTL efectores a través del cuerpo es muy transitoria;

(d) Después de la recirculación, los CTL vuelven al bazo en donde residen en un estado no activo o de reposo, y un aumento en el número de CTLp que residen en el bazo no refleja una inmunidad de CTL activa;

(e) En el caso de tumores, el recrecimiento de células tumorales residuales después de la inmunización pasa indetectatada por los CTLp que residen en el bazo en un estado quot;de reposoquot;;

(f) Debido a que las células presentadoras de antígenos (APC) que estimulan los CTL son establecidas como

Se está descubriendo un repertorio creciente de antígenos asociados a tumores que son reconocidos por los CTL. Se ha sugerido una diversidad de técnicas para hacer que estos antígenos sean eficaces en vacunas de CTL. Estas incluyen la inmunización utilizando antígenos peptídicos sintéticos mezclados con un adyuvante inmunoestimulador, tal como la toxina bacteriana BCG; la inmunización con sistemas de péptidos antigénicos múltiples (MAPS) ; la inmunización con células presentadoras de antígenos quot;profesionalesquot;, que se aislan a partir del paciente, se pulsan con un antígeno peptídico y se inoculan de nuevo al paciente como vacuna; la inmunización con péptidos diseñados para estimular poblaciones de células CTL y T auxiliares; la inmunización con virus o bacterias modificados para que expresen antígenos tumorales; y la inmunización con vectores de expresión polinucleotídicos (las denominadas vacunas de ADN) . Por desgracia, ninguna de estas estrategias ha tenido un éxito total. Tal como se analizó anteriormente, la falta de efectos terapéuticos vigorosos con estas plataformas de vacunas refleja, al menos hasta cierto grado, los problemas asociados con la inducción de una respuesta inicial fuerte de CTL y el mantenimiento de una inmunidad de CTL quot;activaquot; en curso.

Los estudios de Glenny durante el primer cuarto de siglo han revelado que los compuestos de aluminio pueden potenciar la potencia de las vacunas de difteria. Esto supuso, en apariencia, la primera de una larga serie de observaciones que apoyan la teoría quot;depotquot; (liberación lenta) de la inmunización, que postula que el antígeno, que lentamente se introduce en los tejidos a lo largo de un tiempo largo, se correlaciona con la potencia antigénica de una vacuna. En la actualidad, este paradigma quot;depotquot; de antígenos constituye el telón de fondo intelectual de la mayoría de los programas de desarrollo de adyuvantes. De una forma o de otra, se pretende que los adyuvantes de tipo quot;depotquot; prolonguen el curso de la administración del antígeno, formando una lesión en el sitio de la inyección, o simplemente por la degradabilidad lenta del propio adyuvante que, mezclado con el antígeno específico, forma un quot;depotquot; en el sitio de la inyección. Una segunda función generalmente atribuida a los adyuvantes es su efecto inmunoestimulador, que parece activar al sistema inmunológico para que responda a la vacuna. Sin embargo, los adyuvantes son un arma de doble filo. Tienen toxicidades inherentes. Pero una característica de estas toxicidades es que se logra un efecto inmunoestimulador y/o quot;depotquot; deseado. Los efectos secundarios, tales como daños en los tejidos y reacción granulomatosa en el sitio de la inyección, fiebre y, en algunos casos, reacciones sistémicas, tales como síntomas de tipo síndrome de Reiter, uveitis y artritis, son algunos de los riesgos asociados con el uso de adyuvantes. En la actualidad, el único adyuvante aprobado por la FDA es el alumbre. Es relativamente seguro, pero tiene efectos secundarios, tales como eritema, nódulos subcutáneos, hipersensibilidad por contacto e inflamación granulomatosa. De manera más importante, el alumbre solo actúa para potenciar un número limitado de antígenos y, de modo muy predominante, estimula las respuestas de anticuerpos humorales, en lugar de una inmunidad de CTL. Asi, hasta la fecha, los adyuvantes han demostrado ser componentes muy ineficaces para las vacunas dirigidas a inducir respuestas de CTL clínicamente pertinentes.

Recientes intentos para inducir respuestas de CTL utilizando células dendríticas u otras células... [Seguir leyendo]

º º ºl uso de un antig eno peptidico o un acido nucl eico que co difica dicho antige no para la fa bricacion de u n medicamento para el tratami ento d el canc er o de i nfecciones cronicas comprend iendo dic ho me dicamento u na composicion que contienen antigenos fisiologicamente aceptable para la administracion directamente al bazo a un nodulo linfatico o a un vaso linfatico de un mamifero

en el que dicho antigeno induce una respuesta de CTL efectores especificos de antigeno en el mamifero y

en el que el antigeno s e administra a l m amifero a u n nivel sufic iente como par a inducir la resp uesta d e CT L efectores especificos de antigeno en el mamifero y

en el que el nivel del antigeno en el sistema linfatico del mamifero se mantiene a lo largo de un tiempo suficiente para mantener la respuesta de CTL efectores especificos de antigeno

º º ºl uso segun la reivindicacion º en el que el acido nucleico que codifica dicho antigeno comprende un plasmido un vector o un vector virico recombinante

º º ºl uso segun la reivindicacion º en el que el nivel del antigeno se mantiene mediante la administracion regular y sostenida del antigeno

ººl uso segun cualquiera de las reivindicaciones º a º en el que la respuesta de CTL se mantiene administrando el antigeno directamente a un nodulo linfatico o a un vaso linfatico

ººl uso se gun l a reiv indicacion 4 en el qu e la respuesta de CT L se manti ene admi nistrando el a ntigeno directamente a un nodulo inguinal o axilar

º º ºl uso segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que el medicamento se administra implantando una bomba de liberacion sostenida implantable en un sitio o cerca de un sitio de un organo o un vaso linfatico

º º ºl uso segun la reivindicacion º en el que la bomba es una bomba osmotica

ººl uso seg un cualquiera de las re ivindicaciones º a 5 en el qu e el medicamento se administra bombeando el medicamento desde un dispositivo que se mantiene en el exterior del cuerpo del mamifero a traves de una linea de transmision y un cateter colocado para administrar el medicamento de modo que el antigeno alcanza el sistema linfatico del mamifero

º º ºl uso segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que la concentracion del antigeno es tal que se administraran de º microgramos a ºº ººº microgramos en º4 horas

ºº º ºl uso segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que el antigeno corresponde a una enfermedad especifica

ºº º ºl uso segun la reivindicacion ºº en el que la enfermedad es cancer y el antigeno es un antigeno asociado a un tumor

ºº º ºl uso segun la reivindicacion ºº en el que el antigeno se selecciona del grupo que consiste en un antigeno de diferenciacion un antigeno multilinaje especifico de tumor un antigeno embrionario un antigeno de un oncogen expresado un antigeno de un gen supresor de tumor mutado expresado y un antigeno virico

ºº º ºl uso segun la reivindicacion º o º en el que el antigeno se selecciona del grupo que consiste en MART

ºMMelanA gpºººMPmel ºº tirosinasa TRPºº TRPºº MAGººº MAGººº AAGº GAGººº GAGººº CºA p5º Ras HºRººMneu ACRºAAL ººAº PRL H4º RºT GGHºGGK MS LºRAR ºAVA antigenos ºº y de HPV TAPºº8º MAGºº4 MAGºº5MAGººº RAGº YSººAO pº85erbAº pº8ºerbAºº c ºmet nmººº Hº PAA TAGººº CA º CA ººº4CAM ºº ºYuMa Kº ras Hºras 1 ºcatenina CDK4 Mumºº pº5 y pºº

º4 ººl uso segun la reivindicacion º en el que la enfermedad es una enfermedad infecciosa y en el que el antigeno se deriva de proteinas del patogeno

º5 ººl uso segun la reivindicacion º4 en el que la enfermedad es una enfermedad virica

ºº º ºl uso s egun c ualquiera de las r eivindicaciones anteriores en el q ue el m edicamento com prende un so lo antigeno

ºº º ºl uso se gun cualquiera de las reivi ndicaciones º a º5 en el q ue el medicam ento comprende mas de un antigeno

º8 ººl uso segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que el antigeno es un peptido con una longitud de 8 a º5 aminoacidos

ºº º ºl uso segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores º a º8 en el que el medicamento comprende ademas una citoquina capaz de potenciar la respuesta de CTL

ºº º ºl uso segun la reivindicacion ºº en el que la citoquina se selecciona del grupo que consiste en GMºCAF GLº GLºº TYF GFYy GLºº8 GLº GLº4 GLº8 GLºº GLººº GLººº GLºº4 GLºº5 Gº ACF GFY alfa GFY beta TGF alfa TGF beta