Formulaciones de bacteriófagos estabilizados.

Composición antibacteriana comprendiendo una o más cepas de bacteriófago adsorbidas en una matriz seca,

donde la matriz se selecciona en el grupo que consiste en polvo de leche desnatada, proteína de soja ypeptona vegetal.

Formulaciones de bacteriófagos estabilizados [0001] La presente invención se refiere a formulaciones de bacteriófagos estabilizados y a su uso en forma de sistemas de entrega. Más particularmente, la presente invención se refiere a formulaciones de bacteriófagos estabilizados, a métodos para preparar estas formulaciones de bacteriófagos estabilizados, y a usos de formulaciones de bacteriófagos estabilizados en forma de sistemas de entrega.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La terapia bacteriófaga tiene la capacidad de proporcionar un método eficaz para controlar específicamente la multiplicación de varias cepas de bacterias. No obstante, para ser comercialmente viables, los bacteriófagos deben mostrar un cierto grado de estabilidad para permitir su almacenamiento.

Se han utilizado varios métodos para el almacenamiento de fagos, incluyendo refrigeración a bajas temperaturas, liofilización, y almacenamiento en medio líquido. Todos los métodos han demostrado tener varios niveles de éxito en cuanto al mantenimiento de un alto título de bacteriófagos viables.

Prouty (1953, Appl Microbiol, 1:250-351) reportó que los bacteriófagos desecados de Streptococci que producen ácido láctico se mantenían viables a 0°C durante 42 meses, a 37°C durante 72 meses y a 12°C y 25°C durante al menos 78 meses. No obstante, no se menciona el efecto de almacenamiento de bacteriófagos desecados en la título del bacteriófago.

Keogh y Pettingill (1966, Appl Microbiol, 14:4421-424) muestran que los bacteriófagos para los Streptococci que producen ácido láctico en presencia de una proteína de lactosuero son resistentes a la congelación y al almacenamiento en frío. Unos fagos almacenados a 4°C y -18°C exhibieron una pequeña reducción del título de bacteriófago; los ciclos de congelación-descongelación tampoco exhibieron ninguna pérdida significativa de título. Warren y Hatch (1969, Appl Microbiol, 17:256-261) revelaron una reducción significante del título y viabilidad de una suspensión de bacteriófagos almacenados (sin estabilizadores) a 4°C, mientras que el almacenamiento a -20°C y a 20°C permitía la mayor supervivencia de fagos. También revelaron que el almacenamiento a largo plazo de bacteriófagos a -20°C tenía tendencia a producir la formación de aglutinaciones.

Wadddell et al. (US 2004/0208854) describen una forma de dosificación farmacéutica de liberación controlada para bacteriófagos. Los bacteriófagos se estabilizan por liofilización en presencia de un polímero metacrílico y un lioprotector.

Loomis y Fischetti (WO 2004/064732) revelan métodos y composiciones para tratar infecciones bacterianas con proteínas de fagos asociadas a bacterias, enzimas o péptidos y/o fragmentos peptídicos de los mismos y revelan la adsorción de lisinas de fagos mediante pulverización de la proteína en el alimento.

Jepson y March (2004, Vaccine, 22:2413-2419) revelan que una suspensión líquida de bacteriófagos (en un tampón SM o en una dilución 1/200 de tampón SM en agua) era estable durante 6 meses a 4°C y -70°C, con el fago manteniendo intacto por congelación-descongelación. La temperatura aumentada, entre 20°C y 42°C, producía una pérdida significante del título. La liofilización y reconstitución inmediata de bacteriófagos en presencia o en ausencia de estabilizadores producía una pérdida del título de 80-95%. De los bacteriófagos restantes después de la liofilización en presencia de polvo de leche desnatada seco, el almacenamiento a temperaturas entre 20°C y 42°C producía una pérdida de título similar a la de la suspensión líquida. No obstante, la liofilización en presencia de trehalosa producía un aumento de la vida media del bacteriófago de entre 20°C y 42°C. El efecto del pH del medio de almacenamiento también fue examinado. No se produjo ningún cambio del título de bacteriófago después de un periodo de 24 horas en un pH de 3 a 11. No obstante, del título se redujo rápidamente cuando se almacenaba durante 5 minutos en valores de pH inferiores a 2, 4.

Scott et al (WO 03/093462) divulga la estabilización e inmovilización de virus, incluyendo bacteriófagos, por enlace covalente del virus con un sustrato. Este proceso requiere el uso de productos químicos para activar el sustrato y agentes de acoplamiento para ayudar a la formación de enlaces covalentes entre el sustrato y el virus. El uso de estos reactivos aumenta los gastos necesarios para la inmovilización. Además, los virus o bacteriófagos no son capaces de liberarse en el entorno debido a su unión covalente con el sustrato. Por lo tanto, el fago inmovilizado sólo puede actuar en lugares discretos.

La congelación o liofilización de suspensiones de bacteriófagos, o suspensiones de bacteriófagos que contienen opcionalmente estabilizadores, son métodos poco adecuados que requieren equipamiento especializado e incrementan los costes de una preparación comercial. Aunque es deseable almacenar los bacteriófagos en un estado desecado, el proceso de liofilización da lugar a una pérdida significante del título. Además, la unión covalente de bacteriófagos a un sustrato no permite la liberación de los bacteriófagos del sustrato y limitan su utilidad para nuestras aplicaciones.

Métodos alternativos para estabilización de bacteriófagos son necesarios.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a formulaciones de bacteriófagos estabilizados y a su uso en forma de sistemas de entrega. Más particularmente, la presente invención se refiere a formulaciones de bacteriófagos estabilizados, a métodos para preparar formulaciones de bacteriófagos estabilizados, y a los usos de formulaciones de bacteriófagos estabilizados.

Un objeto de la presente invención consiste en proporcionar una formulación de bacteriófagos estabilizada con una estabilidad mejorada.

La presente invención proporciona un método para la producción de una composición antibacteriana comprendiendo la adsorción de una solución acuosa de uno o más bacteriófagos sobre una matriz sólida o en polvo para producir una composición, y el secado de la composición para producir una composición antibacteriana.

La presente invención también pertenece al método descrito anteriormente donde la matriz puede ser seleccionada en el grupo que consiste en polvo de leche desnatada, polvo de proteína de soja, y peptona vegetal.

La presente invención también provee una composición antibacteriana comprendiendo una o más cepas de bacteriófago adsorbido en la matriz.

La presente invención incluye el material antibacteriano tal como se ha definido anteriormente, donde la matriz soluble se selecciona en el grupo que consiste en polvo de leche desnatada y proteína de soja.

Las composiciones antibacterianas de la presente invención son fáciles de preparar y muestran la propiedad de ser estables durante varios periodos de tiempo en un frigorífico y a temperatura ambiente, de aproximadamente -10°C hasta aproximadamente 25°C, o de cualquier temperatura comprendida entre éstas. Además, uno o más bacteriófagos, componentes de fago, o ambos, pueden ser liberados fácilmente de las composiciones antibacterianas de la presente invención con poca o ninguna pérdida de título. Las composiciones antibacterianas de la presente invención se pueden utilizar en lociones, lubricantes, geles y cremas, pasta dental, mezclar con un soporte farmacéuticamente aceptable para aplicaciones orales, nasales o tópicas por ejemplo pero sin limitarse a éstos, en aplicaciones sobre la piel, vaginales, oftálmicas, nasales, auditivas, anales, rectales, y otros tipos de administración, o bien ser usadas al interior de apósitos para heridas, y exhibir una actividad antimicrobiana.

La presente invención provee preparaciones de fagos estabilizadas en una forma seca como un sistema de entrega para inhaladores en polvo. La presente invención provee también una matriz adecuada para preparar fagos o composiciones de fagos para la encapsulación y la entrega en el intestino pasando por los ácidos de estómago.

Las composiciones antibacterianas de la presente invención se pueden utilizar para fines humanos, veterinarios, agrícolos o acuícolos. Además las composiciones como se describen en este caso, se pueden utilizar para el tratamiento de árboles y plantas, y en aplicaciones medioambientales. La composición antibacteriana se puede utilizar al interior de una crema, loción o gel, ser mezclada con un soporte farmacéutico y ser administrada tópicamente, por vía oral, nasal, usada como un inhalador en polvo, o la composición antibacteriana se puede añadir a un alimento usado en piensos animales, aviares o acuáticos.... [Seguir leyendo]

1. Composición antibacteriana comprendiendo una o más cepas de bacteriófago adsorbidas en una matriz seca, donde la matriz se selecciona en el grupo que consiste en polvo de leche desnatada, proteína de soja y peptona vegetal.

2. Composición antibacteriana según la reivindicación 1, donde la matriz es la proteína de soja.

3. Composición antibacteriana según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el bacteriófago es eficaz contra una bacteria objetivo, donde la bacteria objetivo es un bacteria de d'Escherichia coli, Streptococci, Humicola, Salmonella, Campylobacter, Listeria, Staphylococcus, Pasteurella, Mycobacterium, Hemophilius, Helicobacter, Mycobacterium, Mycoplasmi, Nesseria, Klebsiella, Enterobacter, Proteus, Bactercides, Pseudomonas, Borrelius, Citrobacter, Propionobacter, Treponema, Chlamydia, Trichomonas, Gonorrhea, Clostridium, Shigella, Enterococcus, Leptospirex o Bacillii comprendiendo Bacillus anthracis

4. Composición antibacteriana según la reivindicación 3, donde la bacteria objetivo es Escherichia coli.

5. Composición antibacteriana según la reivindicación 4, donde la bacteria objetivo es E. coli O157:H7.

6. Composición antibacteriana según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde la composición antibacteriana se reviste con una sustancia que aumenta la resistencia de fagos a las tensiones físico-químicas de su entorno.

7. Composición antibacteriana según la reivindicación 6, donde la sustancia es un polímero para la liberación controlada, preferiblemente un polímero a base de metacrilato.

8. Composición antibacteriana según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde la composición antibacteriana se formula en una cápsula.

9. Composición comprendiendo un alimento para animales, mezclada con una composición antibacteriana según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

10. Composición antibacteriana según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o la composición de la reivindicación 9 para su uso en el tratamiento de una infección bacteriana en un animal.

11. Composición antibacteriana según las reivindicaciones 1 a 9 para el uso según la reivindicación 10, donde el animal es un ser humano; aves de corral, como el pollo o el pavo, etc; el cerdo; todos los animales ungulados como caballos, ganado, cabras, y ovejas, etc; o animales domésticos como los gatos y los perros.

12. Método para la producción de una composición antibacteriana según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8

comprendiendo, la adsorción de uno o más bacteriófagos, en una solución acuosa sobre una matriz seca para producir una composición estabilizada; y el secado de la composición estabilizada para producir la composición antibacteriana; y donde la matriz se selecciona en el grupo que consiste en polvo de leche desnatada, proteína de soja y peptona vegetal.

13. Método de producción de una composición antibacteriana según la reivindicación 12, donde la matriz permanece en un estado seco.