Control eficaz de enfermedades virales de plantas con cepas de Pseudomonas oleovorans.

Una cepa KBPF-004 de Pseudomonas oleovorans (KCTC 10159BP) que tiene actividad de control contraenfermedades virales de plantas.

Control eficaz de enfermedades virales de plantas con cepas de Pseudomonas oleovorans Campo de la invención La presente invención se refiere a una cepa de Pseudomonas oleovorans que tiene una actividad de control contra 5 enfermedades virales de plantas; y a un agente microbiano para controlar enfermedades virales de plantas que la comprenden.

Antecedentes de la invención El area total de cultivo de los cultivos de jardin ha estado aumentando cada ano, sin embargo, se han producido diversas enfermedades virales de plantas en la mayoria de los cultivos de jardin, lo que ha dado como resultado 10 graves perjuicios económicos.

Los virus vegetales que perjudican los cultivos de jardin incluyen el virus del mosaico del pepino (CMV) , el virus del mosaico del tabaco (TMV) y el virus Y de la patata (PVY) . Con el fin de controlar estos virus, se han desarrollado metodos de control agronómico tales como los que utilizan semillas libres de enfermedades y la generación de nuevos cultivares resistentes a los virus, pero los efectos de los mismos son insignificantes.

Mientras tanto, se han desarrollado plantas transgenicas resistentes a los virus mediante la introducción de un gen, tal como un gen de la proteina de la envoltura, un gen asociado a la replicación, un gen del ARN satelite y un gen antisentido en las plantas, pero se necesitara mas tiempo para lograr un exito industrial (Fitchen, J.H. y Beachy, R.N., Annu. Rev. Microbiol., 47:739-763, 1993) .

Recientemente, ha habido muchos estudios para desarrollar nuevos agentes microbianos que utilizan microorganismos para el control de los virus vegetales. Especialmente, los agentes microbianos son respetuosos con el medio ambiente lo que significa que son capaces de preservar los ecosistemas naturales y no tienen toxicidad para los mamiferos y, por lo tanto, esta aumentando la demanda de agentes microbianos.

Compendio de la invención Por consiguiente, un objeto de la presente invención es proporcionar un microorganismo eficaz en el control de las 25 enfermedades virales de plantas; y un agente microbiano que lo comprenda.

De acuerdo con el objeto anterior, la presente invención proporciona Pseudomonas oleovorans KBPF-004 (KCTC 10159BP) que tiene una actividad de control contra enfermedades virales de plantas; un cultivo del mismo; un polvo seco del cultivo, y un agente microbiano para el control de las enfermedades virales de plantas que comprende la cepa, un cultivo de la misma, o un polvo seco del cultura como ingrediente activo.

Breve descripción de los dibujos Los anteriores y otros objetos y caracteristicas de la presente invención resultaran evidentes a partir de la siguiente descripción de la invención, cuando se toma junto con los dibujos adjuntos, que muestran, respectivamente:

Fig. 1: el arbol filogenetico de la cepa KBPF-004;

Fig. 2: la actividad de control de la dilución 1:1000 del polvo mojable (PM) de KBPF-004 al 25% contra el virus del 35 mosaico del tabaco;

Fig. 3: el efecto inhibidor del PM de KBPF-004 al 25% contra el virus del mosaico del tabaco confirmado mediante RT-PCR;

Fig. 4: el efecto inhibidor del PM de KBPF-004 al 25% contra la infección sencilla o multiple de virus confirmado mediante RT-PCR (C: pimiento rojo Chungyang; D: pimiento Daemyung; M: marcador de tamano, H: planta sana; N:

grupo no tratado, y 1, 2: Grupos tratados con KBPF-004) ;

Fig. 5: la fotografia de las particulas de virus tratadas con PM de KBPF-004 al 25% confirmada mediante microscopia electrónica (TMV: virus del mosaico del tabaco y PVY: virus Y de la patata) ;

Fig. 6: el efecto inhibidor la infección de PM de KBPF-004 al 25% contra el virus del mosaico del tabaco;

Fig. 7: el efecto de control de PM de KBPF-004 al 25% contra el virus del moteado del pimiento;

Fig. 8: el efecto de control del PM de KBPF-004 al 25% contra el virus del rayado del arroz (A: el grupo no tratado, y

B: grupo tratado con PM de KBPF-004 al 25% diluido 500 veces) ;

Fig. 9: el efecto de control de los granulos de KBPF-004 al 2, 5% contra el virus del mosaico del tabaco, y

Fig. 10: el efecto de control de suspensiones acuosas (SA) de KBPF-004 al 70% contra el virus del rizado amarillo del tomate (A: no tratado (grupo tratado con insecticida comercial) , y B: grupo tratado con la dilución 1:500 de suspensiones acuosas KBPF - 004 al 70% y con insecticida comercial) .

Descripción detallada de la invención La presente invención proporciona la cepa KBPF-004 Pseudomonas oleovorans (KCTC 10159BP) que tiene una actividad de control contra enfermedades virales de plantas.

Pseudomonas oleovorans KBPF-004 (KCTC 10159BP) forma colonias redondas de color amarillo que tienen bandas pectinadas en el contorno. La cepa tiene la forma de una varilla de 2 - 3 !m de largo y 0, 3 - 0, 5 !m de ancho, y tiene un solo flagelo largo.

La cepa de la invención tiene un ADNr 16S con una secuencia de nucleótidos de 1479 pb representada por el SEQ 1D NO: 1, que tiene una homologia de secuencia de 99, 05% con la de Pseudomonas oleovorans 1AM 1508T. La posición taxonómica de la cepa de la invención se investig6 mediante la construcción de un arbol filogenetico (Fig. 1) de acuerdo con el metodo Clustal (Thompson JD et al., Nuc. Acid. Res. 25: 4876-82, 1997) .

La cepa de la invención es diferente de las cepas de Pseudomonas oleovorans existentes en cuanto a sus actividades antivirales especificas.

Por lo tanto, la cepa fue denominada Pseudomonas oleovorans KBPF-004, y depositada el 11 de Enero de 2002 en la Colección de Cultivos Tipo de Corea (KCTC) bajo el numero de acceso KCTC 10159BP.

La presente invención tambien proporciona un cultivo de Pseudomonas oleovorans KBPF-004 (KCTC 10159BP) eficaz en el control de las enfermedades virales de las plantas.

El cultivo se puede preparar mediante la inoculación de celulas de Pseudomonas oleovorans KBPF-004 (KCTC 10159BP) en un medio y sometiendolas a fermentación.

El medio puede comprender los ingredientes convencionales de un medio para el cultivo de bacterias gram negativas sin ninguna limitación. Preferiblemente, el medio puede comprender de 1 g a 20 g de glucosa, de 1 g a 30 g de extracto de levadura, de 0, 1 g a 1 g de sulfato de magnesio, de 0, 5 g a 5 g de dihidrogenofosfato de potasio y de 0, 5 g a 5 g de monohidrogenofosfato de potasio basado en 1 V de agua. Mas preferiblemente, el medio puede comprender de 7 g a 14 g de glucosa, de 15 g a 25 g de extracto de levadura, de 0, 1 g a 0, 2 g de sulfato de magnesio, de 1 g a 2 g de dihidrogenofosfato de potasio y de 1 g a 2 g de monohidrogenofosfato de potasio basado en 1 V de agua.

La fermentación se puede llevar a cabo a una temperatura de 20°C a 40°C, preferiblemente, de 26°C a 34°C, con una velocidad de aireación de 50 V min a 200 V min, preferiblemente, 100 V min a 120 V min, y una velocidad de rotación de 100 rpm a 250 rpm, preferiblemente de 120 rpm a 200 rpm. Con el fin de preparar el agente microbiano de la invención, se prefiere emplear tanto celulas de la cepa como productos filtrados de cultivo.

Adicionalmente, la presente invención proporciona un polvo seco del cultivo.

El polvo seco se puede preparar por medio de las etapas de esterilización, concentración y pulverización (liofilización y molienda) .

La etapa de esterilización se puede llevar a cabo calentando el cultivo celular, una vez completado el cultivo, a una temperatura de 80°C a 120°C durante 1 a 20 minutos, preferiblemente, de 90°C a 100°C durante 5 a 10 min.

La etapa de concentración se puede llevar a cabo mediante la concentración del cultivo esterilizado a presión reducida a una temperatura de 40°C a 80°C durante 12 a 48 horas, preferiblemente, de 65°C a 75°C durante 24 a 36 horas.

La etapa de pulverización se puede llevar a cabo, pero sin limitarse a esto, sometiendo el cultivo concentrado al procedimiento de secado mediante liofilización o secado mediante pulverización, y moliendolo despues para preparar un cultivo en polvo.

El proceso de liofilización se puede llevar a cabo secando el cultivo concentrado aumentando sucesivamente la temperatura de partida desde -80°C durante 48 a 96 horas, preferiblemente, de 60 a 80 horas.

El proceso de molienda se lleva a cabo mediante trituración de los productos liofilizados resultantes utilizando un molino de puas para que tengan tamanos de particula de 2 mm o menos.

Se puede preparar un agente microbiano formulando las celulas, el cultivo o el polvo seco del cultivo combinados con agentes tensioactivos, nutrientes, y portadores.

Ademas, la presente invención proporciona un agente microbiano para controlar enfermedades virales de plantas que comprende... [Seguir leyendo]

1. Una cepa KBPF-004 de Pseudomonas oleovorans (KCTC 10159BP) que tiene actividad de control contra enfermedades virales de plantas.

2. Un cultivo de la cepa de Pseudomonas oleovorans de la reivindicación 1.

3. Un polvo seco del cultivo de la reivindicación 2.

4. El polvo seco de la reivindicación 3, en donde el polvo seco se prepara mediante liofilización o secado por pulverización.

5. Un agente microbiano para controlar enfermedades virales de plantas que comprende la cepa KBPF-004 de

Pseudomonas oleovorans (KCTC 10159BP) , un cultivo de la misma, o un polvo seco del cultivo como ingrediente 10 activo.

6. El agente microbiano de la reivindicación 5, que comprende de 2, 5 a 70% en peso de la cepa de Pseudomonas oleovorans, un cultivo de la misma, o un polvo seco del cultivo; de 2 a 30% en peso de un agente tensioactivo; y una cantidad residual de un vehiculo.

7. El agente microbiano de la reivindicación 6, en donde el tensioactivo es un tensioactivo aniónico, un tensioactivo 15 no iónico, o una mezcla de los mismos.

8. El agente microbiano de la reivindicación 6, en donde el vehiculo se selecciona del grupo que consiste en bentonita, talco, arcilla, caolin, carbonato de calcio, silice, piedra p6mez, tierra de diatomeas, arcilla ferruginosa y calcarea blanca acida, zeolita, perlita, hulla blanca, sulfato de amonio, urea, glucosa, dextrina, agua, y una mezcla de los mismos.

9. El agente microbiano de la reivindicación 5, que esta en una forma seleccionada del grupo que consiste en polvos mojables (PM) , granulos dispersables en agua (GA) , productos concentrados en suspensión (CS) , granulos, suspensiones acuosas (SA) , polvos solubles (PS) , granulos solubles en agua (GA) y capsulas.

10. El agente microbiano de la reivindicación 5, en donde la enfermedad viral vegetal es causada por un grupo de virus vegetales seleccionado del grupo que consiste en Alexivirus, Alfamovirus, Ampelovirus, Bimovirus,

Begomovirus, Capilovirus, Carlavirus, Carmovirus, Caulimovirus, Closterovirus, Comovirus, Cucumovirus, Crinivirus , Citorabdovirus, Fabavirus, Flexiviridae, Foveavirus, Furovirus, Geminivirus, Hordeivirus, 1larvirus, Luteovirus, Maculavirus, Nepovirus, Potexvirus, Potivirus, Fitoreovirus, Polerovirus, Pomovirus, Sadwavirus, Taastrupvirus, Tenuivirus, Tobamovirus, Tobravirus, Tombusvirus, Tospovirus, Tricovirus y una combinación de los mismos.