Compuestos biológicamente activos obtenibles a partir de Sorangium cellulosum.

Compuesto que comprende una estructura según la fórmula IX:**Fórmula**

Compuestos biológicamente activos obtenibles a partir de Sorangium cellulosum

La presente invención se refiere a un nuevo grupo de compuestos que tienen propiedades antibióticas, antifúngicas y/o citostáticas, que son obtenibles a partir de mixobacterias, especialmente del género Sorangium, preferiblemente de Sorangium cellulosum. Los compuestos se denominan actualmente Disorazol Z y Disorazol Z-epóxido, respectivamente, con una configuración específica de enlaces insaturados con su estructura de núcleo cíclico.

Se sabe que las mixobacterias producen una gran variedad de compuestos biológicamente activos, que también se denominan metabolitos secundarios. De entre estos metabolitos secundarios, el grupo de los Disorazoles ha atraído la atención como inhibidores de la polimerización de la tubulina, para la inducción de la apoptosis y para la detención del ciclo celular o la inhibición de la proliferación celular, incluso a bajas concentraciones.

Aunque los compuestos de la presente invención pueden aislarse a partir de cepas productoras del género Sorangium, tienen una estructura de esqueleto sustancialmente diferente de los Disorazoles o los Chivosazoles conocidos.

Estado de la técnica Los metabolitos secundarios aislados a partir de mixobacterias del género Sorangium, que se han denominado Disorazoles, pueden encontrarse en Jansen y col., Liebigs Ann. Chem. 1994, 759 - 773. Una fórmula estructural representativa de los Disorazoles, denominada Disorazol A1 hasta A7, dependiendo de sus sustituyentes, se proporciona a continuación:

Los Disorazoles comprenden un grupo heterogéneo que incluye dos oxazoles en un anillo macrólido. En general, los Disorazoles tienen un esqueleto con una estructura circular simétrica, que puede subdividirse en dos mitades 30 conectadas por grupos éster, formando un anillo macrólido que comprende un total de 34 átomos, parte del cual porta grupos sustituyentes adicionales. Adyacente a uno de estos grupos éster, cada una de estas mitades de moléculas comprende un anillo de oxazol y una cadena de 10 ó 12 átomos de carbono, seguido de un grupo éster que forma la conexión con la otra mitad de la molécula. La cadena de 10 a 12 átomos de carbono muestra un amplio intervalo de variaciones con respecto a la disposición y el número de los dobles enlaces y de los sustituyentes adicionales, por ejemplo, grupos epoxi, grupos hidroxilo y sustituyentes adicionales de grupos alquilo saturados o parcialmente insaturados.

Otro grupo de metabolitos secundarios obtenibles a partir de las mixobacterias, especialmente de Sorangium cellulosum, se denominan Chivosazoles, cuya estructura de esqueleto se proporciona a continuación, según identificaron Jansen y col. (Liebigs Ann./Recueil 1997, 1725 - 1732 (1997) ) . En general, los Chivosazoles pueden describirse como glucósidos de derivados de 6-desoxiglucopiranosa de un aglicón que incluye un oxazol en su anillo macrólido de 31 miembros. El propio aglicón se denomina Chivosazol F, mostrando actividades antibióticas y citotóxicas:

Arriba: aglicón de Chivosazol (F) , en el que R1 es H o -CH3. Los sustituyentes de R2 se denominan derivados de chinovosilo. 5

Objetivos de la invención En vista de los metabolitos secundarios conocidos obtenibles a partir de mixobacterias del género Sorangium, es un objetivo de la presente invención proporcionar nuevos compuestos que tienen actividades biológicas, por ejemplo, 10 propiedades antifúngicas, antibióticas y/o citotóxicas.

Descripción general de la invención Con el fin de conseguir los objetivos mencionados anteriormente, la presente invención proporciona los compuestos Disorazol Z y Dizorazola Z. epóxido con actividad biológica, su uso para fines médicos y composiciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos. Además, la presente invención proporciona un proceso para la producción de los compuestos mediante la fermentación de microorganismos.

Este compuesto se denomina actualmente Disorazol Z: 20

Para el Disorazol Z-epóxido, se determinó una fórmula molecular de C40H46N2O13 dando un peso de fórmula de 762, 79884 y una masa monoisotópica de 762, 29999 Da, a partir de lo cual se dedujo la estructura según la fórmula 25 X:

En los nuevos compuestos según las anteriores fórmulas XI y X, los átomos de carbono asimétricos pueden estar presentes cada uno en la configuración R o S, en la configuración sintetizada por una cepa productora del género Sorangium. Sin embargo, una persona experta en la técnica es capaz de determinar la configuración que está presente en el producto biosintético de Sorangium, y determinar adicionalmente las actividades biológicas dé cada estereoisómero.

Para la producción del nuevo compuesto puede emplearse una síntesis química según procedimientos estándar

conocidos por la persona experta en la técnica y, preferiblemente, se lleva a cabo una fermentación de una cepa de mixobacteria, preferiblemente del género Sorangium, que es una cepa productora del compuesto, seguida de unos procedimientos de aislamiento y purificación.

Los compuestos según la presente invención son adecuados para su uso médico, es decir, como componentes de preparaciones farmacéuticas, por ejemplo, para el tratamiento de enfermedades inflamatorias crónicas, por ejemplo, artritis, o como fármacos o pro-fármacos eficaces frente a células tumorales.

Aparte de proporcionar una nueva estructura cíclica de núcleo como base para los compuestos biológicamente activos, una de las ventajas de los compuestos según la presente invención, por ejemplo, sobre los Disorazoles conocidos, es su estabilidad mejorada a largo plazo, por ejemplo, en preparaciones sólidas o en formulaciones líquidas. Con respecto al grupo epoxi asimétrico contenido en el Disorazol Z-epóxido , el grupo epoxi reactivo puede usarse ventajosamente tanto para derivatizaciones adicionales del compuesto como para proporcionar una actividad biológica diferente y/o mejorada.

Descripción detallada de la invención La presente invención se describe ahora con mayor detalle mediante referencia a las figuras, en las que − la Figura 1 muestra el transcurso de la saturación de oxígeno, el pH y la velocidad de agitación de una fermentación típica de Sorangium cellulosum, y

− las Figuras 2A hasta H muestran los resultados del análisis para el Disorazol Z obtenidos mediante cromatografía HPLC-EM HPLC, espectrometría de UV y espectrometría de masas, respectivamente, para un extracto procedente de una fermentación de Sorangium cellulosum, a saber, en detalle

• en la Figura 2 A, el cromatograma de la corriente iónica total (TIC) 200 - 1000 Da,

• en la Figura 2 B, el cromatograma DAD-UV en el intervalo de 200 - 400 nm,

• en la Figura 2 C, el cromatograma de la corriente iónica positiva extraída (XIC) ajustado al ión M+H del Disorazol Z y los isómeros Z (746, 9 - 747, 4 Da) ,

• en la Figura 2, el cromatograma de la corriente iónica negativa extraída (XIC) ajustado al ión M-H+AcOH del Disorazol Z y los isómeros Z (804, 8 - 805, 3 Da) ,

• en la Figura 2 E, el cromatograma de la corriente iónica negativa extraída (XIC) ajustado al ión del fragmento m/z = 675 del Disorazol Z y los isómeros Z (674, 7 - 675, 2 Da) ,

• en las Figuras 2 F y G, los espectros de UV de un isómero Z y del Disorazol Z,

• en las Figuras 2 H e I, los espectros de EM (ES1, modo positivo) de un isómero Z y del Disorazol Z, con m/z 747 como el ión molecular [M + H]+, m/z 764 = 746 + 18 como el ión [M + NH4]+, y m/z 769 = 746 + 23 como el ión [M + Na]+,

• en la Figuras 2 J y K, los espectros de EM (ESI, modo negativo) de un isómero Z y del Disorazol Z, con m/z 805 = 746 + 59 como el agregado de iones moleculares [M+AcO -]-, y un fragmento a m/z 675 = 746 - H - 70

(= C4H6O) = C36H39N2O11 como el ión [M-H-cadena lateral] -. En los ejemplos, los porcentajes son de peso por volumen, salvo que se especifique de otro modo. 5 Ejemplo 1: Disorazol Z Como ejemplo de los nuevos compuestos que comprenden la estructura cíclica de núcleo de 25 miembros se analiza el Disorazol Z, portando sustituyentes idénticos en los átomos de carbono C13 y C13’, átomos de carbono que se numeran como 25 y 33 en la siguiente fórmula IX’, respectivamente. A partir de la RMN en acetona-D6 10 (600/150 MHz, acetona a 2, 05/29, 80 ppm) , se obtuvieron los datos de la tabla 1. Tabla 1: datos de la RMN del Disorazol Z en acetona-D6:

M J C oc m

- - - 1, 13 162, 35 s

- - - 2, 14 135, 72 s

8, 53 S - 3, 15 145, 05 d

- - - 4, 16 159, 65 s

6, 19 D 15, 5 5, 17 116, 49... [Seguir leyendo]

1. Compuesto que comprende una estructura según la fórmula IX:

2. Compuesto según la reivindicación 1, caracterizado por una estructura según la fórmula X:

3. Composición farmacéutica, caracterizada por que comprende al menos un compuesto según una de las reivindicaciones anteriores.

4. Proceso para producir un compuesto según la reivindicación 1 o 2, caracterizado por que implica la fermentación 15 de una mixobacteria del género Sorangium a una temperatura de 20 a 32 °C con aireación durante entre 8 y 20 días.