Producción de mixopironina y de sus derivados.

Proceso para producir un compuesto que tiene una primera cadena (cadena occidental) y una segunda cadena (cadena oriental) que se condensan formando un anillo pirona al proporcionar a un microorganismo las enzimas de la ruta sintética que catalizan la síntesis del compuesto,

en donde el microorganismo se manipula genéticamente para comprender genes que codifican las enzimas de la ruta sintética que comprenden las enzimas MxnA (SEQ ID NO: 1), MxnB (SEQ ID NO: 2), MxnC (SEQ ID NO: 3), MxnD (SEQ ID NO: 4), MxnE (SEQ ID NO: 5), MxnF (SEQ ID NO: 6), MxnG (SEQ ID NO: 7), MxnH (SEQ ID NO: 8), Mxnl (SEQ ID NO: 9), MxnJ (SEQ ID NO: 10) y MxnK (SEQ ID NO: 11), incubar el microorganismo y separar el compuesto del microorganismo,

caracterizado por que

al menos un dominio catalítico de una enzima está ausente o inactivado, dominio que se selecciona del grupo que consiste en

a) la cetosintasa (KS) del módulo 1E de Mxnl que comprende los aminoácidos No. 694-885 de SEQ ID NO: 9,

b) la cetosintasa (KS) del módulo 2E de Mxnl que comprende los aminoácidos No. 1945-2135 de SEQ ID NO: 9,

c) la cetosintasa (KS) del módulo 3E de Mxnl que comprende los aminoácidos No. 3442-3633 de SEQ ID NO: 10,

d) la cetosintasa (KS) del módulo 4E de MxnJ que comprende los aminoácidos No. 605-795 de SEQ ID NO: 10,

e) la cetosintasa (KS) del módulo 5E de MxnJ que comprende los aminoácidos No. 2476-2660 de SEQ ID NO: 10,

f) la cetosintasa (KS) del módulo 6E de MxnJ que comprende los aminoácidos No. 3208-3399 de SEQ ID NO: 10,

g) la cetosintasa (KS) del módulo 1W de MxnK que comprende los aminoácidos No. 180-364 de SEQ ID NO: 11,

h) la cetosintasa (KS) del módulo 2W de MxnK que comprende los aminoácidos No. 1926-2110 de SEQ ID NO: 11,

i) la cetosintasa (KS) del módulo 3W de MxnK que comprende los aminoácidos No. 2684-2875 de SEQ ID NO: 11,

j) la cetosintasa (KS) del módulo 4W de MxnK que comprende los aminoácidos No. 3504-3688 de SEQ ID NO: 11,

k) la cetosintasa (KS) del módulo 5W de MxnK que comprende los aminoácidos No. 5409-5593 de SEQ ID NO: 11,

I) la cetorreductasa (KR) del módulo 2E de Mxnl que comprende los aminoácidos No. 2903-3050 de SEQ ID NO: 9,

m) la cetorreductasa (KR) del módulo 4E de MxnJ que comprende los aminoácidos No. 1568-1715 de SEQ ID NO: 10,

n) la cetorreductasa (KR) del módulo 1W de MxnK que comprende los aminoácidos No. 1418-1560 de SEQ ID NO: 11,

o) la cetorreductasa (KR) del módulo 4W de MxnK que comprende los aminoácidos No. 4470-4617 de SEQ ID NO: 11,

p) la proteína transportadora (CP) del módulo L de Mxnl que comprende los aminoácidos No. 424-433 de SEQ ID NO:9,

q) la proteína transportadora (CP) del módulo 1E de Mxnl que comprende los aminoácidos No. 1720-1726 de SEQ ID NO: 9,

r) la proteína transportadora (CP) del módulo 2E de Mxnl que comprende los aminoácidos No. 3192-3198 de SEQ ID NO: 9,

s) la proteína transportadora (CP) del módulo 3E de MxnJ que comprende los aminoácidos No. 366-372 de SEQ ID NO: 9,

t) la proteína transportadora (CP) del módulo 4E de MxnJ que comprende los aminoácidos No. 2238-2244 de SEQ ID NO: 10,

u) la proteína transportadora (CP) del módulo 5E de MxnJ que comprende los aminoácidos No. 2967-2973 de SEQ ID NO: 10,

v) la proteína transportadora (CP) del módulo 6E de MxnJ que comprende los aminoácidos No. 3810-3816 de SEQ ID NO: 10,

w) la proteína transportadora (CP*) del módulo 6E de MxnJ que comprende los aminoácidos No. 3566-3572 de SEQ ID NO: 12,

x) la proteína transportadora (CP) del módulo 1W de MxnK, que comprende los aminoácidos No. 1683-1689 de SEQ ID NO: 11

y) la proteína transportadora (CP) del módulo 2W de MxnK que comprende los aminoácidos No. 2429-2435 de SEQ ID NO: 11,

z) la proteína transportadora (CP) del módulo 3W de MxnK que comprende los aminoácidos No. 3234-3240 de SEQ ID NO: 11,

aa) la proteína transportadora (CP) del módulo 4W de MxnK que comprende los aminoácidos No. 5165-5171 de SEQ ID NO: 11,

bb) la proteína transportadora (CP*) del módulo 5W de MxnK que comprende los aminoácidos No. 5894-5900 de SEQ ID NO: 11,

cc) la proteína transportadora (CP) del módulo 5W de MxnK que comprende los aminoácidos No. 5984-5990 de SEQ ID NO: 11,

dd) la deshidratasa (DH) del módulo 2E de Mxnl que comprende los aminoácidos No. 2402-2414 de SEQ ID NO: 9,

ee) la deshidratasa (DH) del módulo 3E de MxnJ que comprende los aminoácidos No. 53-65 de SEQ ID NO: 9,

ff) la deshidratasa (DH) del módulo 4E de MxnJ que comprende los aminoácidos No. 1091-1103 de SEQ ID NO: 10,

gg) la deshidratasa (DH) del módulo 1W de MxnK que comprende los aminoácidos No. 955-967 de SEQ ID NO: 11,

hh) la deshidratasa (DH) del módulo 4W de MxnK que comprende los aminoácidos No. 3980-3992 de SEQ ID NO: 11,

ii) la metiltransferasa (MT) del módulo 4E de MxnJ que comprende los aminoácidos No. 1982-1987 de SEQ ID NO: 10,

jj) la metiltransferasa (MT) del módulo 4W de MxnK que comprende los aminoácidos No. 4914-4919 de SEQ ID NO: 11,

en donde en las realizaciones en las que al menos un dominio catalítico está inactivado en las enzimas de la ruta sintética MxnK y/o MxnI-MxnJ, en donde el dominio catalítico inactivado es un dominio catalítico cuya inactivación en ausencia de precursor da lugar a una parada de la síntesis por la enzima cuando se expresa en un microorganismo, un precursor de la cadena occidental, y/o un precursor de la cadena oriental se añade a un microorganismo que expresa las enzimas de la ruta sintética, o en donde en las realizaciones en las que la inactivación es por intercambio de al menos un centro catalítico, dominio, módulo o enzima seleccionada de las enzimas CorJ (SEQ ID NO: 25), CorK (SEQ ID NO: 26), CorL (SEQ ID NO: 27), Orf1 (SEQ ID NO: 27), CorM (SEQ ID NO: 28), CorM (SEQ ID NO: 28), CorN (SEQ ID NO: 29) y CorO (SEQ ID NO: 30) y sus centros catalíticos, dominios y módulos, o la enzima MxnI (SEQ ID NO: 9) se reemplaza por la enzima CorI (SEQ ID NO: 24).

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2014/059677.

Solicitante: HELMHOLTZ-ZENTRUM FUR INFEKTIONSFORSCHUNG GMBH.

Nacionalidad solicitante: Alemania.

Dirección: INHOFFENSTRASSE 7 38124 BRAUNSCHWEIG ALEMANIA.

Inventor/es: MULLER, ROLF, HARTMANN, ROLF, WENZEL,SILKE, SUCIPTO,HILDA, SAHNER,JAN HENNING, GROH,MATTHIAS.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12N15/52 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Genes que codifican enzimas o proenzimas.
  • C12N9/02 C12N […] › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.; Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › Oxidorreductasas (1.), p. ej. luciferasa.
  • C12N9/10 C12N 9/00 […] › Transferasas (2.) (ribonucleasas C12N 9/22).
  • C12P17/06 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA.C12P 17/00 Preparación de compuestos heterocíclicos que contienen O, N, S, Se o Te como únicos heteroátomos del ciclo (C12P 13/04 - C12P 13/24 tienen prioridad). › que contienen un ciclo de seis miembros, p. ej. fluoresceína.

PDF original: ES-2713437_T3.pdf

 

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