COMPOSICIONES DE EXTRACTO DE ROMERO PARA EL TRATAMIENTO DE CÁNCER.

Composiciones de extracto de romero para el tratamiento de cáncer.

La presente invención se refiere al uso de un extracto de romero en la preparación de una composición para el tratamiento de un cáncer en el que existe una alteración en la señalización por estrógenos o en el metabolismo lipídico, a una composición que comprende extracto de romero y un agente quimioterapéutico, así como a un método in vitro para la predicción de la respuesta clínica a una terapia antitumoral mediante el empleo de dicha composición.

Composiciones de extracto de romero para el tratamiento de cáncer

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a nuevas composiciones de extracto de romero, a su uso en el tratamiento del cáncer, así como a un método in vitro para la predicción de la respuesta clínica a una terapia antitumoral mediante dichas composiciones.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El romero (Rosmarinus officinalis L) , utilizado desde hace décadas en la cocina o como infusión, es una planta que crece en muchas partes del mundo, a la que se han atribuido diversas funciones biológicas como antioxidantes, antiinflamatorias, antimicrobianas o antitumorales [Altinier et al., J. Agric. Food Chem., 2007, 55, 1718-1723; Aruoma et al., Food Chem. Toxicol., 1996, 34, 449-456; Bastianetto et al. Neurobiol. Aging, 2002, 23, 891-897; Singletar y et al., Cancer Lett., 1996, 104, 43-48]. Entre los constituyentes responsables de estas actividades destacan diterpenos fenólicos como ácido carnósico, carnosol, rosmanol, epirosmanol y rosmadial y otros ácidos como el rosmarínico y el cafeico, y se ha propuesto que sus funciones biológicas están ligadas a la capacidad de reducir el daño oxidativo causado por radicales libres [Singletar y et al., Cancer Lett., 1996, 104, 43-48; Singletar y et al., Plant Foods Hum. Nutr., 1997, 50, 47-53; Dörrie et al., Cancer Lett., 2001, 170, 33-39; Debersac et al., Food Chem Toxicol 2001, 39, 907-918, Offord et al., Free Radic. Biol. Med., 2002, 32, 1293-1303; Lo et al., Carcinogenesis, 2002, 23, 983-991].

Estas evidencias sugieren un posible efecto beneficioso de componentes del romero en cáncer. En este sentido, en los últimos años se ha demostrado un efecto preventivo del extracto de romero en la carcinogénesis inducida por carcinógenos químicos como DMBA o benzopireno [Singletar y et al., Cancer Lett., 1996, 104, 43-48; Slamenova et al., Cancer Lett., 2002, 177, 145-153; Alexandrov et al., Cancer Res., 2006, 66, 11938-11945]. Un número considerablemente menor de estudios se ha realizado sobre su efecto en la progresión tumoral, siendo la leucemia el sistema en el que se han centrado la mayor parte de estos estudios, en los que se ha observado de forma consistente un efecto antiproliferativo tanto del romero como de dos de sus componentes principales, acido carnósico y carnosol [Steiner et al., Nutr. Cancer, 2001, 41, 135-144; Danilenko et al., J. Natl. Cancer Inst., 2001, 93, 1224-1233]. Además, se ha demostrado en este sistema que el ácido carnósico extraído del romero potencia in vitro de forma significativa el efecto antiproliferativo de la vitamina D3 y sus derivados [Danilenko et al., Cancer Res., 2003, 63, 1325-1332; Steiner et al., Nutr. Cancer, 2001, 41, 135-144]. También se ha demostrado que el tratamiento oral con ácido carnósico en combinación con una dosis intraperitoneal de un análogo de vitamina D3 resulta en una fuerte inhibición in vivo del crecimiento tumoral de células murinas de leucemia WEHI-3B, sugiriendo que un aporte de ácido carnósico podría tener un efecto beneficioso en el tratamiento de leucemia mieloide aguda [Shabtay et al., Oncology, 2008, 75, 203-214]. Además de en leucemias, se han realizado estudios en hepatomas y melanomas. Su efecto antiproliferativo, sin profundizar en su efecto real como inhibidor de la carcinogénesis, se ha sugerido también en células derivadas de tumores de mama y de próstata [Yesil-Celiktas et al., Plant Foods Hum. Nutr., 2010, 65, 158-163]. En todos estos casos, se ha sugerido que su actividad antioxidante constituye la base de su efecto, sin realizar estudios que identifiquen realmente el mecanismo de acción del extracto de romero.

Por último, recientemente se ha descrito también que el extracto de romero tiene un efecto inhibitorio sobre la Pglicoproteína, implicada en la resistencia a fármacos [Nabekura et al., Pharmacol. Res., 2010, 61, 259-263; Plouzek et al., Eur. J. Cancer, 1999, 35, 1541-1545;], y que ejerce un efecto modulador de los efectos de la radiación, sugiriéndose un papel beneficioso en el tratamiento con radioterapia [Sancheti et al., Afr J Tradit Complement Altern Med. 2006, 4, 165-172; Soyal et al., Phytomedicine, 2007, 14, 701-705]. Sin embargo, no se ha realizado ningún estudio del extracto de romero como posible potenciador del efecto de agentes utilizados convencionalmente en quimioterapia.

Por otra parte, la causa fundamental de muerte por cáncer es el fallo en la respuesta a tratamiento que se produce en gran parte por el desarrollo de resistencia a quimioterapia. Por otro lado, los efectos secundarios derivados del tratamiento con agentes quimioterapéuticos ejercen un efecto negativo en la respuesta, por lo que aún es necesaria la identificación de agentes que puedan potenciar su efecto permitiendo, o bien disminuir el tiempo de tratamiento aumentando su eficacia, o bien disminuir la dosis utilizada del agente quimioterapeútico reduciendo así su toxicidad y, por tanto, sus efectos secundarios.

La tecnología de extracción con fluidos supercríticos (SFE) es una técnica de separación basada fundamentalmente en la capacidad que tienen determinados fluidos en estado supercrítico (es decir, en condiciones de temperatura y presión por encima de su punto crítico) de modificar su poder solvente. Este poder solvente depende, en gran parte, de su densidad, la que puede ser modificada en forma continua simplemente variando la presión y/o la temperatura. Por otro lado, la viscosidad y la difusividad de los fluidos supercríticos son similares a la de los gases, por lo que la transferencia de materia en estos procesos es elevada, lo cual permite una extracción rápida y eficaz del extracto de su matriz. Particularmente, es reconocido que la extracción de antioxidantes de matrices vegetales utilizando dióxido de carbono (CO2) supercrítico produce extractos de mayor actividad comparados con los que se obtienen utilizando disolventes líquidos orgánicos (etanol, hexano) o hidrodestilación [Schwarz y Ternes, Z Lebensm Unters Forsch, 1992, 195, 99-103; Ibáñez et al., J. Agric. Food Chem., 2003, 51, 375-382]. Concretamente, la extracción de romero utilizando CO2 supercrítico puro o con modificadores ha sido ampliamente estudiada en la literatura [Ibáñez et al., J. Agric. Food Chem., 1999, 47, 1400-1404; Cavero et al., J. Food Prot., 2005, 68, 790-795; entre otros]. Por otro lado, la cromatografía de fluidos supercríticos (SFC) es una técnica de separación que combina las ventajas que ofrecen la cromatografía de gases (GC) y la cromatografía de líquidos (HPLC) , permitiendo la separación de mezclas en las que no es adecuada la aplicación de otras técnicas convencionales. El CO2 es la fase móvil más utilizada en SFC debido a sus propiedades físicas y químicas, bajas temperaturas y presiones críticas (31 ºC, 73, 9 bar) , inerte, no inflamable, no contaminante y relativamente económico, con la limitación de su apolaridad, que impide la separación de compuestos polares, pero que se suple fácilmente por la adición de pequeñas cantidades de sustancias polares (modificadores) . En esta técnica, se pueden variar fácilmente parámetros cromatográficos como retención, selectividad y resolución optimizando así la separación. A nivel o escala preparativa (SFC-prep) , ofrece numerosas ventajas como el menor consumo de disolventes, la rapidez de la separación o la facilidad de recuperar los compuestos aislados y sin disolventes con una simple descompresión, manteniendo así intactas sus propiedades originales [Yaku et al., J.Biochem. Biophys. Methods, 2000, 43, 59-76; Toribio et al., J. Chromatogr. A, 2003, 1011, 155-161]. Recientemente se ha descrito que ambas técnicas pueden ser aplicadas al fraccionamiento de extractos de matrices vegetales, y, concretamente a la extracción de compuestos antioxidantes del romero, como tecnologías innovadoras, más limpias, y con la ventaja de producir fracciones más bioactivas [Ramírez et al., J. Chromatogr. A, 2004, 1057, 241-245; Ramírez et al., J. Pharm. Biomed. Anal., 2006, 41, 1606-1613; Soler-Rivas et al., J Agric. Food Chem., 2010, 58, 1144-1152].

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona un nuevo uso de un extracto de romero en el tratamiento de determinados cánceres, concretamente en aquellos en los que existe una alteración del metabolismo lipídico o en la ruta de señalización por estrógenos. Además dicha composición se puede combinar con un agente antitumoral convencional obteniéndose un efecto sinérgico.

En un primer aspecto, la presente invención se refiere al uso de un extracto de romero en la preparación de una composición para el tratamiento de un cáncer en el que existe una alteración en la señalización por estrógenos o en el metabolismo lipídico.

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1. Uso de un extracto de romero en la preparación de una composición para el tratamiento de un cáncer en el que existe una alteración en la señalización por estrógenos o en el metabolismo lipídico.

2. Uso según la reivindicación 1, en que el cáncer se selecciona de cáncer de esófago, cáncer de estómago, cáncer de hígado, cáncer de páncreas, cáncer de vesícula biliar, cáncer de intestino delgado, cáncer de recto, cáncer de colon, cáncer colorrectal, cáncer de próstata, pulmón, cáncer ovárico y cáncer de mama.

3. Uso según la reivindicación 2, en que el cáncer es cáncer de colon.

4. Uso según la reivindicación 2, en que el cáncer es cáncer de mama.

5. Uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en que el extracto de romero se obtiene mediante extracción con fluidos supercríticos.

6. Uso según la reivindicación 5, en que el fluido supercrítico es dióxido de carbono.

7. Uso según la reivindicación 6, en que el dióxido de carbono está a una temperatura comprendida entre 30 ºC y 70 ºC y a una presión comprendida entre 200 y 300 bar.

8. Uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en que la composición es una composición farmacéutica.

9. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en que la composición es una composición alimentaria o suplemento nutricional.

10. Uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en que el extracto de romero se administra en combinación con un agente quimioterapéutico.

11. Uso según la reivindicación 10, en que el agente quimioterapéutico se selecciona de cisplatino, carboplatino, oxaliplatino, mercloretamina, ciclofosfamida, clorambucil, ifosfamida, metotrexato, 6-mercaptopurina, 5fluorouracilo (5-FU) , ara-c, capecitabina, vincristina, vinblastina, vinorelbina, vindesina, paclitaxel, docetaxel, irinotecan, topotecan, amsacrina, etopósido, etopósido fosfato, tenipósido, actinomicina, doxorrubicina, daunorubicina, valrubicina, idarubicina, epirrubicina, bleomicina, plicamicina, mitimicina y tamoxifeno.

12. Uso según la reivindicación 11, en que el agente quimioterapéutico se selecciona de 5-fluorouracilo, tamoxifeno.

13. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, en que el agente quimioterapéutico se administra en forma de una composición separada para su administración simultánea o no a la de la composición farmacéutica, composición alimentaria o suplemento nutricional que comprende el extracto de romero.

14. Una composición que comprende extracto de romero y un agente quimioterapéutico.

15. La composición según la reivindicación 14, en que el agente quimioterapéutico se selecciona de cisplatino, carboplatino, oxaliplatino, mercloretamina, ciclofosfamida, clorambucil, ifosfamida, metotrexato, 6mercaptopurina, 5-fluorouracilo (5-FU) , ara-c, capecitabina, vincristina, vinblastina, vinorelbina, vindesina, paclitaxel, docetaxel, irinotecan, topotecan, amsacrina, etopósido, etopósido fosfato, tenipósido, actinomicina, doxorrubicina, daunorubicina, valrubicina, idarubicina, epirrubicina, bleomicina, plicamicina, mitimicina y tamoxifeno.

16. La composición según la reivindicación 15, en que el agente quimioterapéutico se selecciona de 5fluorouracilo y tamoxifeno.

17. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 16, en que el extracto de romero se obtiene mediante extracción con fluidos supercríticos.

18. La composición según la reivindicación 17, en que el fluido supercrítico es dióxido de carbono.

19. La composición según la reivindicación 18, en que el dióxido de carbono está a una temperatura comprendida entre 30 ºC y 70 ºC y a una presión comprendida entre 200 y 300 bar.

20. Uso de la composición según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 19 para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de cáncer.

21. Uso según la reivindicación 20, en que el cáncer se selecciona de cáncer de esófago, cáncer de estómago, cáncer de hígado, cáncer de páncreas, cáncer de vesícula biliar, cáncer de intestino delgado, cáncer de recto, cáncer de colon, cáncer colorrectal, cáncer de próstata, pulmón, cáncer ovárico y cáncer de mama.

22. Uso según la reivindicación 21, en que el cáncer es cáncer de colon.

23. Uso según la reivindicación 21, en que el cáncer es cáncer de mama.

24. Un método in vitro para la predicción de la respuesta clínica a una terapia antitumoral con la composición según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 19 en un paciente diagnosticado de cáncer que presenta alta probabilidad de responder a una terapia con la composición según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 19, que comprende:

(i) determinar los niveles de expresión de los genes GCNT3, AKR1B10, LOC344887, ABCC6, SLFN5, ENTPD8, GRB10, STC2 y ESR2 en una muestra de dicho paciente antes de la administración de la terapia,

(ii) comparar los niveles de expresión obtenidos en la etapa (i) con un valor de referencia,

en donde una alteración de los niveles de expresión de los genes GCNT3, AKR1B10, LOC344887, ABCC6, SLFN5, ENTPD8, GRB10, STC2 y ESR2 con respecto al valor de referencia es indicativa de una mejor respuesta clínica a la terapia con la composición según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 19 o de que el paciente tiene una alta probabilidad de responder a la terapia con dicha composición.

25. El método según la reivindicación 24, en que el valor de referencia se calcula a partir de los valores de expresión de los genes GCNT3, AKR1B10, LOC344887, ABCC6, SLFN5, ENTPD8, GRB10, STC2 y ESR2 en una población de pacientes que no responden a la terapia con la composición según las reivindicaciones 14 a 19.

26. El método según la reivindicación 25, en que el valor de referencia es la mediana de los valores obtenidos a partir de la población de muestras de pacientes que no responden a la terapia con la composición según las reivindicaciones 14 a 19.

27. El método según cualquiera de las reivindicaciones 24 a 26, en que la respuesta clínica se selecciona de supervivencia libre de enfermedad, respuesta objetiva y supervivencia global por enfermedad.

28. El método según cualquiera de las reivindicaciones 24 a 27, en que la determinación de los niveles de expresión de los genes GCNT3, AKR1B10, LOC344887, ABCC6, SLFN5, ENTPD8, GRB10, STC2 y ESR2 se lleva a cabo mediante la medida de los niveles de ARN mensajero de dichos genes.

29. El método según cualquiera de las reivindicaciones 24 a 28, en que el cáncer se selecciona del cáncer de colon y cáncer de mama.