Composición que contiene una bacteria del ácido láctico que produce ecuol.

Composición que contiene Lactococcus garvieae productor de ecuol que comprende,

como componente esencial de la misma, un Lactococcus garvieae que presenta la capacidad de utilizar por lo menos un compuesto de daidzeina seleccionado de entre el grupo que consiste en glucosidos de daidzeina, daidzeina y dihidrodaidzeina, para producir ecuol.

Composicion que contiene una bacteria del acido lactico que produce ecuol.

Campo de la invencion La presente invencion se refiere a una cepa bacteriana productora de ecuol, a una composicion que comprende dicha cepa bacteriana, y a un metodo de produccion de ecuol mediante la utilizacion de dicha cepa bacteriana.

Antecedentes de la invencion Hasta el momento se ha informado principalmente en Europa y en los Estados Unidos de que la isoflavona (isoflavona de soja) contenida en las semillas de soja presenta propiedades profilacticas (efecto antiestrogeno) en el cancer de mama, el carcinoma de prostata y otras enfermedades, y que presenta propiedades de alivio (efecto de tipo estrogenico) en la osteoporosis climaterica y posmenopausica, la hiperlipidemia, la hipertension, etc. (H. Adlercreutz et al., Lancet 339:1233, 1992; H. Adlercreutz et al., Lancet 342:1209-1210, 1992; D.D. Baird et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. 80:1685-1690, 1995; A.L. Murkies et al., Maturitas 21:198-195, 1995; y D. Agnusdei et al., Bone and Mineral 19 (supl.) :S43-S48, 1995) . Sin embargo, recientemente se ha puesto en duda la eficacia clinica de la isoflavona de soja y, por el contrario, se ha informado de que el ecuol como metabolito activo de la isoflavona de soja es un factor clave en las propiedades esperadas en la aplicacion clinica. De esta manera, se dispone de varios informes que argumentan que en el cancer de mama, el carcinoma de prostata y la osteoporosis climaterica y posmenopausica, la eficacia de la isoflavona de soja resulta superada por la del ecuol, el metabolito de la isoflavona de soja (D. Ingram et al., Lancet 350:990-994,

1997; A.M. Duncan et al., Cancer Epidemiology, Biomarkers & Prevention 9:581-586, 2000; C. Atkinson et al., J. Nutr. 32 (3) :595S, 2002; H. Akaza et al., Jpn. J. Clin. Oncol. 32 (8) :296-300, 2002, y S. Uchiyama et al., Ann. Nutr. Metab. 45:113 (abs) , 2001) . Ademas, se presentaron muchas ponencias sobre el tema del ecuol en el IV Simposio Internacional sobre el papel de la soja en la prevencion y tratamiento de enfermedades cronicas (San Diego, USA, 2001) , y en diciembre de 2002 tambien se publico una revision completa de los estudios realizados sobre el ecuol. De esta manera, se acepta cada vez mas en circulos academicos que el ecuol es la entidad real responsable de las propiedades de la isoflavona de soja (K.D.R. Settchell et al., J. Nutr. 132:3577-3584, 2002) .

Ademas, en comparacion con la isoflavona de soja, el ecuol se libera en tejidos tales como el tejido mamario y el tejido prostatico con una eficiencia mucho mayor y este hecho respalda la significancia fisiologica del ecuol (J. Maubach et al., J. Chromatography B. 784:137-144, 2003; T.E. Hedlund et al., The Prostate 154:68-78, 2003) . El ecuol es producido por la flora intestinal y se ha informado de que existen diferencias individuales en su produccion. Tambien se ha publicado que aproximadamente 50% de los japoneses son productores de ecuol (S. Uchiyama et al., Ann. Nutr. Metab. 45:113 (abs) , 2001) . Se cree que los individuos que no pueden producir ecuol no presentan bacterias productoras de ecuol en su intestino. En estos individuos se sospecha que los efectos antiestrogeno y de tipo estrogenico esperados podrian no producirse aunque se ingiriesen alimentos de soja procesados. Con el fin de que se puedan expresar los efectos esperados en estos individuos, aparentemente es un 45 curso razonable de accion que ingieran bacterias productoras de ecuol o ecuol mismo. Basandose en la idea anteriormente indicada, se llevaron a cabo investigaciones intensivas y aislaron a partir de heces humanas 3 nuevas cepas de microorganismos y las identificaron: Bacterioides E-23-15 (nO FERM BP-6435) , Streptococcus E-23-17 (nO FERM BP-6436) y Streptococcus A6G225 (nO FERM BP-6437) , como bacterias productoras de ecuol adecuadas para la expresion de dichos efectos antiestrogeno y de tipo estrogenico, entre otros efectos, y solicitaron una patente que reivindicaba invenciones referentes a dichas cepas de microorganismos productoras de ecuol y a la utilizacion de los microorganismos (documento WO nO 99/07392) .

Exposicion de la invencion 55 Se llevaron a cabo estudios adicionales y pudieron aislar y caracterizar una cepa de bacteria del acido lactico perteneciente al genero Lactococcus que puede utilizar el glucosido daidzeina, daidzeina o dihidrodaidzeina para producir ecuol, como nueva cepa de microorganismo que es fundamentalmente diferente de los microorganismos aislados e identificados con anterioridad. La presente invencion se ha desarrollado basandose en el aislamiento y la identificacion anteriormente indicados de esta nueva cepa de bacteria del acido lactico. La presente invencion presenta las invenciones siguientes, resumidas en los parrafos 1 a 13. item 1. Composicion que contiene bacterias del acido lactico productoras de ecuol, como componente esencial de la 65 misma, una cepa de bacteria del acido lactico perteneciente a la especie Lactococcus garvieae que presenta la capacidad de utilizar por lo menos un compuesto de daidzeina seleccionado de entre el grupo que consiste en glucosidos de daidzeina, daidzeina y dihidrodaidzeina para producir ecuol.

item 2. Composicion segun el item 1, en la que dicha cepa de bacteria del acido lactico perteneciente a Lactococcus es Lactococcus 20-92 depositada con el nO FERM BP-10036.

item 3. Composicion segun el item 1, que comprende ademas por lo menos un elemento seleccionado de entre el grupo que consiste en compuestos de daidzeina e ingredientes que contienen compuesto de daidzeina.

item 4. Composicion segun el item 3, en la que el ingrediente que contiene compuesto de daidzeina es harina de soja o leche de soja.

item 5. Composicion segun el item 3, que se encuentra en forma de una bebida o de un producto lacteo.

item 6. Composicion segun el item 3, que comprende ademas ecuol.

item 7. Composicion segun el item 6, que se encuentra en forma de un producto de fermentacion de leche de soja.

item 8. Metodo para producir ecuol que comprende la etapa de dejar que una cepa de bacteria del acido lacteo perteneciente a la especie Lactococcus garvieae que presenta la capacidad de utilizar un compuesto de daidzeina para producir ecuol, actue sobre por lo menos un elemento seleccionado de entre el grupo que consiste en compuestos de daidzeina e ingredientes que contienen compuesto de daidzeina.

item 9. Metodo segun el item 8, en el que dicha cepa de bacteria del acido lactico perteneciente al genero Lactococcus es Lactococcus 20-92, depositada con el nO FERM BP-10036.

item 10. Metodo segun el item 8, en el que el ingrediente que contiene compuesto de daidzeina es harina de soja o leche de soja.

item 11. Cepa de bacteria del acido lactico perteneciente a la especie Lactococcus garvieae depositada con el nO FERM BP-10036.

La composicion que contiene una bacteria del acido lactico productora de ecuol de la invencion se describe en detalle a continuacion.

(1) Cepa de bacteria del acido lactico perteneciente al genero Lactococcus La composicion que contiene una bacteria del acido lactico productora de ecuol de la invencion comprende, como componente esencial de la misma, una cepa de bacteria del acido lactico perteneciente a la especie Lactococcus garvieae que presenta la capacidad (actividad metabolica) de utilizar por lo menos un compuesto de daidzeina seleccionado de entre el grupo que consiste en glucosidos de daidzeina, daidzeina y dihidrodaidzeina y producir de esta manera ecuol.

Un ejemplo especifico de dicha cepa de bacteria del acido lactico es Lactococcus 20-92 (nO FERM BP-10036) , se ha aislado a partir de heces humanas y que han identificado de novo.

Las caracteristicas bacteriologicas de la cepa de bacteria del acido lactico se describen en detalle a continuacion.

I. Estado de crecimiento en el medio Dicha cepa muestra un crecimiento bueno o normal en agar EG (Eggerth-Gagnon) , agar BL (sangre-higado) y GAM (medio anaerobico Gifu) al cultivarla anaerobicamente en un frasco anaerobico con lana de acero a 37OC durante 48 horas o al cultivarla aerobicamente a 37OC durante 48 horas. La morfologia de las colonias es elevada de manera circular o convexa, siendo lisos la superficie y borde perimetral, y adopta un color gris-blanco sobre agar EG y un color pardo-marron sobre agar BL. Morfologicamente es un diplococcus Gram-positivo. Esta cepa no es esporogenica.

II. Caracteristicas bioquimicas

(1) Temperatura de crecimiento optima: 37OC

(2) pH optimo de crecimiento: 7, 0

(3) Licuefaccion de la gelatina: -

(4) Produccion de acetoina a partir de acido piruvico: +

(5) Hidrolisis de acido hipurico: -

(6) Hidrolisis de esculina: +

(7) Pirrolidonil-arilamidasa: +

1. Composicion que contiene Lactococcus garvieae productor de ecuol que comprende, como componente esencial de la misma, un Lactococcus garvieae que presenta la capacidad de utilizar por lo menos un compuesto de daidzeina seleccionado de entre el grupo que consiste en glucosidos de daidzeina, daidzeina y dihidrodaidzeina, para producir ecuol.

2. Composicion segun la reivindicacion 1, en la que dicho Lactococcus garvieae es Lactococcu.

2. 92 depositado como FERM BP-10036. 10

3. Composicion segun la reivindicacion 1, que comprende ademas harina de soja o leche de soja.

4. Composicion segun la reivindicacion 1, que se encuentra en forma de una bebida o de un producto lacteo.

5. Composicion segun la reivindicacion 1, que se encuentra en forma de un producto de fermentacion de leche de soja.

6. Lactococcus garvieae que presenta la capacidad de utilizar por lo menos un compuesto de daidzeina seleccionado de entre el grupo que consiste en glucosidos de daidzeina, daidzeina y dihidrodaidzeina, para producir 20 ecuol.

7. Lactococcus garvieae segun la reivindicacion 6, como se ha depositado como FERM BP-10036.

8. Utilizacion de una composicion que contiene Lactococcus garvieae productor de ecuol que comprende como

componente esencial de la misma Lactococcus garvieae para la produccion de ecuol utilizando por lo menos un compuesto de daidzeina seleccionado de entre el grupo que consiste en glucosidos de daidzeina, daidzeina y dihidrodaidzeina.

9. Utilizacion segun la reivindicaicon8, en la que dicho Lactococcus garvieae es Lactococcu.

2. 92, depositado con 30 el nO FERM BP-10036.

10.Utilizacion segun la reivindicacion 8, en la que la composicion comprende ademas harina de soja o leche de soja.

11.Utilizacion segun la reivindicacion 8, en la que la composicion se encuentra en forma de una bebida o de un 35 producto lacteo.