CCR4 como marcador de cáncer.

Un método de obtención de información de carácter predictivo o diagnóstico para un paciente de cáncer,

que comprende la etapa de medir la cantidad y/o la actividad del receptor de quimiocina CCR4 expresado porcélulas tumorales epiteliales en una muestra de tumor sólido o en una muestra de tumor celular no hematológicotomada del paciente, proporcionando la cantidad y/o actividad de CCR4 la información de carácter predictivo odiagnóstico.

CCR4 como marcador de cáncer

Campo de la invención La invención se refiere a la oncología y los métodos de diagnóstico del cáncer. El campo de la invención por lo tanto se refiere a marcadores de valor predictivo o clínico en el diagnóstico y el tratamiento del cáncer.

Antecedentes de la invención Los receptores de quimiocinas y sus ligandos dirigen el tráfico de células en la homeostasis del tejido normal y en la enfermedad, influyendo en la motilidad, la invasividad y la supervivencia celular [1]. En la inflamación y en el cáncer, las quimiocinas en los tejidos enfermos contribuyen a la rodadura, la inmovilización y la invasión de leucocitos desde los vasos sanguíneos a través de la membrana basal de las células endoteliales y al parénquima [2].

CCR4 es uno de los 18 receptores de quimiocinas conocidos. Los receptores de quimiocinas se expresan generalmente en las células inmunes y en el microentorno del tumor están presentes varios receptores y sus ligandos en el producto infiltrado de células inmunes.

En muchos tipos de cáncer, las células malignas también expresan ciertos receptores de quimiocina, receptores que no se encuentran usualmente en sus contrapartes normales. Se cree que las células cancerosas metastásicas obtienen características de los leucocitos que expresan el receptor de quimiocinas, utilizando las quimiocinas para ayudar a su migración hacia, y a su supervivencia en, sitios distantes del tumor original [3, 4, 5]. La presencia inapropiada en las células cancerosas de receptores de quimiocina que normalmente tienen un patrón muy restringido de expresión también apoya la hipótesis de que los receptores de quimiocina específicas pueden ayudar a las células a propagarse hacia, y/o sobrevivir en, diferentes sitios de metástasis [8]. En los carcinomas, melanomas y tumores malignos hematológicos, la expresión de los receptores de quimiocina, especialmente CXCR4 y CCR7, en las células malignas en una enfermedad avanzada, se correlaciona con el aumento de metástasis en los ganglios linfáticos, una mayor diseminación de la enfermedad, una supervivencia sin enfermedad y/o supervivencia general más bajas [6, 7, 8]. CXCR5 normalmente se restringe a las células B y algunos subtipos de células T, pero que también es expresado por las células de cáncer de páncreas en las que está implicado en el establecimiento de las metástasis hepáticas; siendo el hígado el un sitio de producción del ligando de CXCR45, CXCL13 [9]. Las células de melanoma que se han metastatizado en el intestino expresan CCR9 [10]. En la homeostasis, el ligando de CCR9 CCL25 recluta subconjuntos de células T raras al intestino. En el cáncer de páncreas, se ha observado la expresión de CCR6 [38] [39]. También se ha informado sobre la expresión de CCR6 en el carcinoma renal humano, junto con CCR3 y CXCR2 [40].

Esto demuestra que unos pocos receptores de quimiocina son conocidos por estar regulados al alza en células epiteliales tumorales en la carcinogénesis de fase avanzada, incluyendo el CXCR4, y se piensa que desempeñan un papel en la invasión y la metástasis. En contraste, solamente se ha informado previamente de que CCR4 está regulado al alza en algunos cánceres de la sangre, concretamente en linfomas de células T.

Como se describió anteriormente, CXCR4 se encuentra comúnmente en células malignas en muchos cánceres humanos avanzados. Además, Woerner et al. encontraron que CXCR4 también estaba presente en las fases tempranas de la enfermedad en el glioblastoma [20]. Sin embargo, utilizando un anticuerpo anti-CXCR4 específico del grupo fosfo, encontraron que en las lesiones de Grado 1 menos malignas, el nivel de activación del receptor era mucho menor.

Aunque en general se ha informado de que la expresión del receptor de quimiocinas en células malignas se asocia con la enfermedad avanzada, también existen algunos otros informes en la técnica sobre la expresión de un receptor de quimiocinas en las células malignas en las fases tempranas y preinvasivas de cáncer, pero todos estos están relacionados con CXCR4. En un gran estudio de matrices de tejidos (más de 2000 muestras) de cáncer de mama, se informó de la expresión en citoplasma/membrana de CXCR4 en 67% de carcinomas ductales in situ, DCIS [21]. Esto fue confirmado en un estudio de Schmid et al. que demostró que tanto CXCR4 como su ligando CXCL12 era expresados en DCIS [22]. Los autores de la presente invención también han encontrado CXCR4 en las células epiteliales de los tumores de cáncer de ovario no invasivos de bajo potencial (Kulbe et al., Manuscrito en preparación) y esto también ha sido referido por Pils et al. [23].

No se encuentran disponibles datos sobre la expresión de otros receptores de quimiocinas en células epiteliales en cánceres tempranos, pero existe evidencia de que las rutas oncogénicas pueden inducir a expresión de receptores de quimiocinas en células epiteliales. El oncogén RET/PTC1 es necesario y suficiente para la transformación maligna de tirocitos primarios [24]. Este oncogén induce un programa pro-inflamatorio en los tirocitos que incluye la inducción de CXCR4 funcional. El rabdomiosarcoma alveolar es un tumor muy agresivo que se caracteriza por fusiones de genes PAX3 y PAX7-FKHR recurrentes. La transferencia de PAX3-FKHR a células de rabdomiosarcoma embrionario también activa la expresión de CXCR4 [Libura, 2002 Núm. 9346].

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En todos estos estudios la conclusión es que la adquisición de ciertos receptores de quimiocinas por las células malignas parece ser un evento relativamente tardío en la progresión del tumor maligno, y en el caso de CCR4, no se ha informado sobre la expresión en ninguna fase de desarrollo del tumor sólido La expresión de CCR4 se restringe generalmente al sistema inmune, y es conocido como un marcador de células Th2 y T reguladoras. En el entorno del tumor, estas células actúan suprimiendo las células T citotóxicas y la maduración de células dendríticas, suprimiendo por lo tanto las respuestas inmunitarias antitumorales. Además, se ha demostrado que CCR4 es expresado en tumores malignos hematológicos, incluyendo una alta proporción de linfomas de células T adultas (ATL) , y fue un factor prognóstico significativo asociado con la metástasis en la piel [35], [41]. Como tal, CCR4 tiene de interés como diana terapéutica en ATL [37], [42]. La expresión de CCR4 por la leucemia de células T del adulto está asociada con metástasis en la piel; sus ligandos CCL17 y CCL22 son producidos tanto por las células malignas como por el microentorno de tumor de piel [36]. Ishida et al. han desarrollado un anticuerpo monoclonal terapéutico anti-CCR4 para el tratamiento de linfoma de células T del adulto que induce la actividad ADCC contra las células tumorales y también puede actuar sobre las células Treg malignas inmunosupresoras encontradas en esta enfermedad [37].

El único informe en la bibliografia académica sobre una línea celular de tumor sólido positiva para CCR4 es la línea celular de cáncer de pulmón humano SBC-5 [34]. Estas células migraban hacia gradientes de CCL22 y en xenoinjertos SBC-5 metastásicos en hueso hubo una estrecha localización simultánea de osteoclastos que expresaban CCL22 y células SBC-5 que expresaban CCR4. No hay informes sobre la expresión de CCR4 en células de tumores humanos primarios.

El documento WO 02/067771 (EOS BIOTECHNOLOGY INC) describe un método para detectar una célula cancerosa en un paciente, comprendiendo el método poner en contacto una muestra biológica del paciente con un nucleótido que hibrida selectivamente con un polinucleótido del receptor de quimiocina (reivindicación 1) ... (..) o con un anticuerpo anti-receptor de quimiocina (reivindicación 14) ". En realizaciones preferidas se menciona CCR4 como receptor de quimiocina. Las células de cáncer de ovario, las células de cáncer de cabeza y cuello, las células de cáncer renal, las células de cáncer de estómago, las células de cáncer uterino, glioblastoma o células de cáncer colorrectal son especificadas como células cancerosas. Las alegaciones se basan solamente en la identificación del aumento de expresión de CCR4 en dichos cánceres (pág. 3, líneas 29 - 33; Tabla 1) . No existe especificación sobre si el aumento de expresión de CCR4 tiene que ver con células no inmunitarias. No existe descripción sobre el uso de CCR4 expresado por células de tumores epiteliales en muestras de tumores sólidos o en un tumor celular no hematológico como diana de diagnóstico.

El documento WO 05106471 (BAYER HEALTH CARE AG) describe métodos de escrutinio para agentes de uso potencial en el tratamiento de una amplia gama de enfermedades; que consisten específicamente en trastornos cardiovasculares,... [Seguir leyendo]

1. Un método de obtención de información de carácter predictivo o diagnóstico para un paciente de cáncer, que comprende la etapa de medir la cantidad y/o la actividad del receptor de quimiocina CCR4 expresado por células tumorales epiteliales en una muestra de tumor sólido o en una muestra de tumor celular no hematológico tomada del paciente, proporcionando la cantidad y/o actividad de CCR4 la información de carácter predictivo o diagnóstico.

2. Un método como se reivindica en la reivindicación 1, en donde la información de carácter predictivo o diagnóstico se obtiene mediante la comparación de la cantidad y/o actividad de CCR4 expresado por las células tumorales epiteliales en la muestra de tumor sólido o la muestra de tumor celular no hematológico , con una cantidad y/o nivel de la actividad de CCR4 de referencia.

3. Un método como se reivindica en la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde la cantidad y/o nivel de actividad de CCR4 de referencia se mide en una o más muestras no tumorales; opcionalmente

en donde la, o al menos una, muestra no tumoral se toma del paciente, o en donde las una o más muestras no tumorales no se toman del paciente.

4. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la información se utiliza para predecir si el tumor sólido o el tumor celular no hematológico del paciente serán susceptibles de tratamiento anticanceroso.

5. Un método como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el paciente ha recibido un tratamiento anticanceroso y las mediciones de la cantidad y/o actividad de CCR4 expresado por las células tumorales epiteliales en la muestra de tumor sólido, o la muestra de tumor no hematológico del paciente se realizan antes y después del inicio del tratamiento, y la información obtenida se utiliza para determinar si el tumor sólido o el tumor celular no hematológico del paciente han respondido al tratamiento contra el cáncer.

6. Un método como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la información se utiliza en el diagnóstico de un tumor sólido o un tumor celular no hematológico, o en donde la información se utiliza para estadificar un tumor sólido o un tumor celular no hematológico.

7. Un método como se reivindica en cualquiera de la reivindicación 4 o la reivindicación 5, en donde el tratamiento contra el cáncer comprende un agente que modula o inhibe la expresión o actividad de CCR4.

8. Un método como se reivindica en la reivindicación 7, en donde dicho agente que modula o inhibe la expresión o actividad de CCR4 es un anticuerpo que se une a CCR4 o un anticuerpo que se une a los ligandos de CCR4 CCL17 o CCL22.

9. Un método como se reivindica en cualquier realización anterior, en donde el tumor sólido o el tumor no hematológico es cáncer de cuello del útero.

10. Un método como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde el tumor sólido o el tumor no hematológico es cáncer de esófago.

11. Un método como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde el tumor sólido o el tumor no hematológico es cáncer de riñón.

12. Un método como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde el tumor sólido o el tumor no hematológico es cáncer de cerebro.

13. Un método como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde el tumor sólido o el tumor no hematológico es cáncer de mama.

14. Un método como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde el tumor sólido o el tumor no hematológico es cáncer de ovario.

15. Un método como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde el tumor sólido o el tumor no hematológico es cáncer de próstata.

16. Un método como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde el tumor sólido o el tumor no hematológico es cáncer de estómago.

17. Un método como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde el tumor sólido o el tumor no hematológico es cáncer de páncreas.

18. Un método como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, en donde se utiliza un anticuerpo reactivo contra CCR4 para medir la cantidad y/o actividad del receptor de quimiocina CCR4 expresado

por las células tumorales epiteliales en una muestra de tumor sólido o en una muestra de tumor celular no hematológico tomadas del paciente.

19. Un método como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, en donde se utiliza un cebador o sonda oligonucleotídicos capaz de hibridar en condiciones rigurosas con el SEQ ID NO: 1 para medir la cantidad y/o actividad del receptor de quimiocina CCR4 expresado por células tumorales epiteliales en una muestra de tumor sólido o una muestra de tumor celular no hematológico tomadas del paciente.

20. Un anticuerpo reactivo contra el receptor de quimiocinas CCR4 para su uso en la detección in vivo de la presencia o la medición de la cantidad de CCR4 expresado por células tumorales epiteliales de un tumor sólido o un tumor no hematológico en un paciente con cáncer, proporcionando la presencia o cantidad de CCR4 expresado por las células tumorales epiteliales cuando es detectado o medido la información de carácter diagnóstico.

21. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 20 para su uso de acuerdo con la reivindicación 20, en donde la información se utiliza para pronosticar si el tumor sólido o el tumor celular no hematológico del paciente serán susceptibles de tratamiento contra el cáncer o

en donde el paciente ha recibido un tratamiento anticanceroso y las mediciones de la cantidad y/o actividad de CCR4 se realizan antes y después del inicio del tratamiento y la información obtenida se utiliza para determinar si el tumor sólido o el tumor celular no hematológico del paciente ha respondido al tratamiento contra el cáncer; o en donde la información se utiliza para la diagnosis de un tumor sólido o un tumor celular no hematológico; o en donde la información se utiliza para estadificar el tumor sólido o el tumor celular no hematológico.

22. El uso de un kit para obtener información de carácter predictivo o diagnóstico para un paciente con cáncer a partir de una muestra de tumor sólido o de tumor no hematológico del paciente, en donde el kit comprende:

una sonda o cebador oligonucleotídicos capaces de hibridar con el SEQ ID NO: 1 en condiciones restrictivas; e indicaciones que dirigen al usuario del kit a aplicar el reactivo a una muestra de células tumorales epiteliales de un tumor sólido o un tumor no hematológico de un paciente con el fin de medir la cantidad y/o actividad de CCR4, en la muestra; y

comprendiendo adicionalmente una muestra de referencia de una o más células no tumorales y las indicaciones son instrucciones y dirigen al usuario del kit para medir la cantidad y/o nivel de actividad de CCR4, tanto en la muestra del paciente como en la muestra de referencia.

23. El uso del kit reivindicado en la reivindicación 22, en donde las indicaciones son instrucciones e incluyen valores de referencia para una cantidad y/o nivel de actividad de CCR4 de referencia.