Cadenas peptídicas de variante oct-2 humana, ácidos nucleicos y métodos.

Un vector de expresión que comprende un ácido nucleico que codifica una cadena peptídica que comprende unasecuencia de aminoácido,

donde el ácido nucleico codifica una cadena peptídica que tiene:

(i) la secuencia de aminoácido mostrada en SEQ ID NO: 4; o

(ii) la secuencia de aminoácido mostrada en SEQ ID NO: 6.

Campo de la invención La presente invención se refiere a cadenas peptídicas de variante OCT-2 de Homo sapiens, polinucleótidos que codifican estas cadenas peptídicas, células que comprenden estos polinucleótidos, y métodos de uso de los anteriores.

Antecedentes de la invención La producción comercial a gran escala de proteínas, tales como anticuerpos, típicamente depende de la expresión por células eucarióticas cultivadas. En general, en la técnica se reconoce que el incremento de número de copia de mARN da como resultado una mayor expresión de proteínas. Además, ARNs bioactivos tales como ARNs silenciadores (siARN) son útiles para prevenir la expresión de genes que producen efectos indeseados en células. La producción a gran escala de proteínas mediante tecnologías de células eucarióticas cultivadas o ARN bioactivo es dependiente de la transcripción eficiente de genes en proteínas que codifican ARN o ARNs bioactivos, respectivamente. Sin embargo, la baja expresión de proteínas o los niveles bajos de transcripción de ARN son problemas comunes que surgen en el uso de estas tecnologías.

La proteína OCT-2 y sus homólogos conocidos son factores de transcripción capaces de aumentar la producción de transcripción de ARN de genes receptivos a esta proteína. La formas bioactiva predominante de OCT2 Homo sapiens (SEQ ID NO: 2) consiste en 463 residuos de aminoácido y contiene un dominio inhibidor, un dominio de enlace con ADN, y un dominio de activación (Fig. 1) . Las variantes de empalme de OCT-2 son conocidas en humanos y ratones. (Véase Genes and Development, 2: 1570 (1988) y Wirth et al. Nucleic acids Research 19:43 (1991) . El dominio de enlace de ADN de la proteína OCT-2 se enlaza con el “sitio octámero) que tiene una secuencia en consenso 5’-TNATTTGCAT-3’ (SEQ ID NO: 15; donde N es cualquier residuo de ácido nucleico) en la región promotora o reguladora de genes receptivos de OCT-2. Véase Müller et al., en Nature 336: 544 (1988) . Después del enlace de ADN, se cree que el dominio de activación de la proteína OCT-2 interactúa con la proteína co-activadora OBF-1 de Homo sapiens (SEQ ID NO: 8) para estabilizar la formación de un complejo activo de proteína II polimerasa ARN que puede producir transcripciones de ARN. Véase Boss, Current Opin. In Immunol. 9: 107 (1997) . La actividad de OCT-2 aumenta el índice de formación de complejos de proteínas II polimerasa ARN dando como resultado un aumento en la producción de transcripciones de ARN de genes receptivos a OCT-2. En Corcoran et al., Journal of Imunology, 172: 2692 (2004) se presenta que el dominio de activación de C-terminal es esencial para la función de Oct-2 in vivo.

Los genes pueden ser naturalmente receptivos a OCT-2 o construirse para convertirse en receptivos a OCT-2 insertando una secuencia de ADN de “octámero” en la región promotora o reguladora del gen. Como consecuencia, se espera que los niveles bajos de expresión de proteínas o los niveles bajos de ARN bioactivo puedan aumentar por la sobreexpresión de OCT-2 solo o con la proteína co-activadora OBF-1 para aumentar la transcripción de genes receptivos a OCT-2. De este modo, existe una necesidad de composiciones nuevas de OCT2 y métodos efectivos para aumentar la expresión o transcripción de genes receptivos a OCT-2.

Breve descripción de los dibujos Fig. 1. Dominios funcionales de una cadena peptídica de OCT-2 de Homo sapiens (SEQ ID NO: 2) . Dibujo no a escala.

Fig. 2. Análisis de alineación de secuencias múltiples de la proteínas OCT de Homo sapiens arquetipo de tipo salvaje (NP_002689; SEQ ID NO. 2) , Proteína Variante Clon #19 OCT-2 de Homo sapiens (Clon #19; SEQ ID NO: 6) ; Proteína Variante Clon #38 OCT-2 de Homo sapiens (Clon #38; SEQ ID NO: 4) ; y la proteína OCT-2 de Homo sapiens pronosticada para codificarse mediante secuencia 1 codificadora (CDS 1) de Registro M36653 (SEQ ID NO: 14) .

Fig. 3. Sobreexpresión de Proteína Variante Clon #38 OCT-2 de Homo sapiens (SEQ ID NO: 4) sola y en combinación con la proteínas OBF-1 de Mus musculus (SEQ ID NO: 10) aumenta los niveles de expresión de gen de anticuerpo receptivo a OCT-2 en células eucarióticas C463A.

Resumen de la invención En un primer aspecto, la invención proporciona un vector de expresión que comprende un ácido nucleico que codifica una cadena peptídica que comprende una secuencia de aminoácido donde el ácido nucleico codifica una cadena peptídica que tiene:

(i) La secuencia de aminoácido mostrada en SEQ ID NO: 4; o

(ii) La secuencia de aminoácido mostrada en SEQ ID NO: 6.

En un segundo aspecto, la invención proporciona una cadena peptídica aislada que comprende una secuencia de aminoácido, donde la cadena peptídica tiene:

(i) La secuencia de aminoácido mostrada en SEQ ID NO: 4; o

(ii) La secuencia de aminoácido mostrada en SEQ ID NO: 6.

Otro aspecto de la invención es un método in vitro de incremento de expresión de un gen receptivo a OCT-2 por una célula eucariótica que comprende las etapas de proporcionar una célula eucariótica que comprende un gen receptivo a OCT-2; proporcionar a la célula eucariótica un primer ácido nucleico que comprende un ácido nucleico que codifica una primera cadena peptídica que tiene una secuencia de aminoácido con al menos 90% de identidad con los residuos de aminoácido 1 a 447 de SEQ ID NO: 6, donde los cinco residuos de aminoácido en la carboxiterminal de la primera cadena peptídica comprenden la secuencia de aminoácido Asparagina-Prolina-Serina-Xaa-Glicina (SEQ ID NO: 18) donde Xaa es cualquier L-aminoácido; y expresar la primera cadena peptídica en la célula eucariótica por lo que la expresión del gen receptivo a OCT-2 aumenta en relación con una célula eucariótica de control a la que no se le proporcionó el primer ácido nucleico.

Otro aspecto de la invención es un método in vitro de incremento de expresión de un gen receptivo a OCT2 por una célula eucariótica que comprende las etapas de proporcionar una célula eucariótica que comprende un gen receptivo a OCT-2; proporcionar a la célula eucariótica un primer ácido nucleico que comprende un ácido nucleico que codifica una primera cadena peptídica que comprende una secuencia de aminoácido con al menos 90% de identidad con los residuos de aminoácido 1 a 447 de SEQ ID NO: 6, donde los cinco residuos de aminoácido en la carboxi-terminal de la primera cadena peptídica comprenden la secuencia de aminoácido Asparagina-ProlinaSerina-Xaa-Glicina (SEQ ID NO: 18) donde Xaa es cualquier L-aminoácido; proporcionar a la célula eucariótica un segundo ácido nucleico que codifica una segunda cadena peptídica que tiene la secuencia de aminoácido de SEQ ID NO: 10; y expresar la primera cadena peptídica y la segunda cadena peptídica en la célula eucariótica por lo que la expresión del gen receptivo a OCT-2 aumenta en relación con una célula eucariótica de control a la que no se le proporcionó el primer ácido nucleico.

Otro aspecto de la invención es un método in vitro de incremento de expresión de un gen receptivo a OCT-2 por una célula eucariótica que comprende las etapas de proporcionar una célula eucariótica que comprende un gen receptivo a OCT-2; proporcionar a la célula eucariótica un primer ácido nucleico que comprende un ácido nucleico que codifica una primera cadena peptídica que tiene una secuencia de aminoácido con al menos 90% de identidad con los residuos de aminoácido 1 a 447 de SEQ ID NO: 4 o 6, donde los cinco residuos de aminoácido en la carboxiterminal de la primera cadena peptídica comprenden la secuencia de aminoácido Asparagina-Prolina-Serina-Xaa-Glicina (SEQ ID NO: 18) donde Xaa es cualquier L-aminoácido; y expresar la primera cadena peptídica en la céluala eucariótica por lo que la transcripción del gen receptivo a OCT-2 aumenta en relación con una célula eucariótica de control a laque no se le proporcionó con el primer ácido nucleico.

Otro aspecto de la invención es un método in vitro de incremento de expresión de un gen receptivo a OCT-2 por una célula eucariótica que comprende las etapas de proporcionar una célula eucariótica que comprende un gen receptivo a OCT-2; proporcionar a la célula eucariótica un primer ácido nucleico que comprende un ácido nucleico que codifica una primera cadena peptídica que tiene una secuencia de aminoácido con al menos 90% de identidad con los residuos de aminoácido 1 a 447 de SEQ ID NO: 4 o 6, donde los cinco residuos de aminoácido en la carboxiterminal de la primera cadena peptídica comprenden la secuencia de aminoácido Asparagina-Prolina-Serina-Xaa-Glicina (SEQ ID NO: 18) donde Xaa es cualquier L-aminoácido; proporcionar a la célula eucariótica un... [Seguir leyendo]

1. Un vector de expresión que comprende un ácido nucleico que codifica una cadena peptídica que comprende una secuencia de aminoácido, donde el ácido nucleico codifica una cadena peptídica que tiene:

(i) la secuencia de aminoácido mostrada en SEQ ID NO: 4; o

(ii) la secuencia de aminoácido mostrada en SEQ ID NO: 6.

2. Una cadena peptídica aislada que comprende una secuencia de aminoácido, donde la cadena peptídica tiene:

(i) la secuencia de aminoácido mostrada en SEQ ID NO: 4; o

(ii) la secuencia de aminoácido mostrada en SEQ ID NO: 6.

3. Una célula que comprende el vector de expresión de la reivindicación 1.

4. Un método in vitro de incremento de expresión de un gen receptivo a OCT-2 por una célula eucariótica que comprende las etapas de:

a) proporcionar una célula eucariótica que comprende un gen receptivo a OCT-2; b) proporcionar a la célula eucariótica un primer ácido nucleico que comprende un ácido nucleico que codifica una primera cadena peptídica que tiene una secuencia de aminoácido con al menos 90% de identidad con los residuos de aminoácido 1 a 447 de SEQ ID NO: 6, donde los cinco residuos de aminoácido en la carboxiterminal de la primera cadena peptídica comprenden la secuencia de aminoácido Asparagina-Prolina-SerinaXaa-Glicina (SEQ ID NO: 18) donde Xaa es cualquier L-aminoácido; y c) expresar la primera cadena peptídica codificada por el primer ácido nucleico en la célula eucariótica por lo que la expresión del gen receptivo a OCT-2 aumenta en relación con una célula eucariótica de control a la que no se le proporcionó el primer ácido nucleico.

5. Un método in vitro de incremento de expresión de un gen receptivo a OCT-2 por una célula eucariótica que comprende las etapas de:

a) proporcionar una célula eucariótica que comprende un gen receptivo a OCT-2; b) proporcionar a la célula eucariótica un primer ácido nucleico que comprende un ácido nucleico que codifica una primera cadena peptídica que tiene una secuencia de aminoácido con al menos 90% de identidad con los residuos de aminoácido 1 a 447 de SEQ ID NO: 6, donde los cinco residuos de aminoácido en la carboxiterminal de la primera cadena peptídica comprenden la secuencia de aminoácido Asparagina-Prolina-SerinaXaa-Glicina (SEQ ID NO: 18) donde Xaa es cualquier L-aminoácido; c) proporcionar a la célula eucariótica un segundo ácido nucleico que codifica una segunda cadena peptídica que tiene la secuencia de aminoácido mostrada en SEQ ID NO: 8 o SEQ ID NO: 10; y d) expresar la primera cadena peptídica y la segunda cadena peptídica en la célula eucariótica por lo que la expresión del gen receptivo a OCT-2 aumenta en relación con una célula eucariótica de control a la que no se le proporcionó el primer y segundo ácido nucleico.

6. El método in vitro de la reivindicación 4 ó 5 donde los primeros cinco residuos de aminoácido en la carboxiterminal de la primera cadena peptídica tienen la secuencia mostrada en SEQ ID NO: 16 o SEQ ID NO: 17.

7. El método in vitro de la reivindicación 4, 5 ó 6 donde la primera cadena peptídica tiene:

(i) la secuencia de aminoácido mostrada en SEQ ID NO: 4; o

(ii) la secuencia de aminoácido mostrada en SEQ ID NO: 6.

8. El método in vitro de una cualquiera de las reivindicaciones 4-7 donde la célula eucariótica es:

(i) una célula de mieloma.

(ii) seleccionada del grupo consistente en células SP2/0, C463A y CHO.

9. El método in vitro de una cualquiera de las reivindicaciones 4-8 donde el gen receptivo a OCT-2 es un gen de anticuerpo.

10. Un método in vitro de incremento de transcripción de un gen receptivo a OCT-2 por una célula eucariótica que comprende las etapas de:

(a) proporcionar una célula eucariótica que comprende un gen receptivo a OCT-2;

(b) proporcionar a la célula eucariótica un primer ácido nucleico que comprende un ácido nucleico que codifica una primera cadena peptídica que tiene una secuencia de aminoácido con al menos 90% de identidad con los residuos de aminoácido 1 a 447 de SEQ ID NO: 4 ó 6, donde los cinco residuos de

5 aminoácido en la carboxi-terminal de la primera cadena peptídica comprenden la secuencia de aminoácido Asparagina-Prolina-Serina-Xaa-Glicina (SEQ ID NO: 18) donde Xaa es cualquier L-aminoácido; y (c) expresar la primera cadena peptídica en la célula eucariótica por lo que la transcripción del gen receptivo a OCT-2 aumenta en relación con una célula eucariótica de control a la que no se le proporcionó el primer ácido nucleico.

10 15 20 25 11. Un método in vitro de incremento de transcripción de un gen receptivo a OCT-2 por una célula eucariótica que comprende las etapas de: (a) proporcionar una célula eucariótica que comprende un gen receptivo a OCT-2; (b) proporcionara la célula eucariótica un primer ácido nucleico que comprende un ácido nucleico que codifica una primera cadena peptídica que tiene una secuencia de aminoácido con al menos 90% de identidad con los residuos de aminoácido 1 a 447 de SEQ ID NO: 4 ó 6, donde los cinco residuos de aminoácido en la carboxi-terminal de la primera cadena peptídica comprenden la secuencia de aminoácido Asparagina-Prolina-Serina-Xaa-Glicina (SEQ ID NO: 18) donde Xaa es cualquier L-aminoácido; (c) proporcionar a la célula eucariótica un segundo ácido nucleico que codifica una segunda cadena peptídica que tiene la secuencia de aminoácido de SEQ ID NO. 10; y (d) expresar la primera cadena peptídica y la segunda cadena peptídica en la célula eucariótica por lo que la transcripción del gen receptivo a OCT-2 aumenta en relación con una célula eucariótica de control a la que no se le proporcionó el primer y segundo ácido nucleico. 12. El método en vitro de la reivindicación 10 u 11 donde la célula eucariótica se selecciona del grupo consistente en SP2/0, C463A y CHO. 13. El método in vitro de la reivindicación 12 donde la célula eucariótica es C463A.

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