Biomarcadores predictivos de seguridad renal y firmas de biomarcadores para monitorizar la función renal.

Un procedimiento para evaluar la toxicidad renal en un individuo tras la administración de compuestos que sesospecha que producen toxicidad renal,

en el que la toxicidad renal se identifica mediante medición de un conjuntode biomarcadores en una muestra de orina del individuo y comparación de la cantidad de biomarcador medida conla correspondiente cantidad en un individuo sano, en el que los biomarcadores están seleccionados del grupo queconsiste en los biomarcadores enumerados en la TABLA 1 e incluyen la proteína ß-2-microglobulina y en el que latoxicidad renal consiste en alteraciones o daños glomerulares.

Biomarcadores predictivos de seguridad renal y firmas de biomarcadores para monitorizar la función renal

Campo de la invención La invención se refiere a firmas de biomarcadores y a su uso en procedimientos y dispositivos para la monitorización, el pronóstico, el diagnóstico y/o el tratamiento de la toxicidad renal y, más específicamente, a la toxicidad tubular renal como consecuencia de enfermedad o tratamiento farmacológico.

Antecedentes de la invención La progresión a insuficiencia renal terminal es la vía común final de varias nefropatías proteinúricas. El grado de proteinuria se asocia con la velocidad de la progresión de la enfermedad renal.

En enfermedades proteinúricas humanas, la lesión tubulointersticial es un predictor mejor de la disminución de la función renal que el daño glomerular. Se cree que las proteínas plasmáticas tubulotóxicas filtradas son responsables de esta asociación, aunque la naturaleza de estas proteínas es incierta. Las proteínas filtradas ejercen parcialmente sus efectos perjudiciales mediante la activación de células tubulares proximales (CTP) , que excretan quimiocinas y citocinas, lo que tiene como resultado inflamación, biotransformación de fibroblastos intersticiales, fibrosis y apoptosis. Esto conduce, en último térmico, a insuficiencia renal terminal. Por tanto, las células epiteliales tubulares renales se consideran cruciales en la progresión del daño intersticial. Se ha propuesto que la proteinuria produce lesión tubular y fibrosis intersticial.

Marchewka y Dlugosz (Int Urol Nephrol. 1998;30:339-48) buscaron indicadores que facilitaran una rápida evaluación de la nefrotoxicidad de los antibióticos. Para este fin buscaron en cinco sustancias en la orina: N-acetil-beta-B-Dglucosaminidasa (NAG) , NAG-B, alanilaminopeptidasa, gamma glutamiltransferasa y β-2-microglobulina. El documento EP-A-1231469 divulga el diagnóstico precoz de trastorno renal. AQP2 se usa como marcador y se dice que proporciona resultados antes que β-2-microglobulina y NAG. El documento WO2006/056037 divulga procedimientos para monitorizar la función renal mediante análisis de una muestra de fragmentos de β-2microglobulina. El documento WO02/06537 divulga procedimientos de identificación de agentes tóxicos renales usando expresión génica diferencial.

En la técnica existe la continua necesidad de determinar y monitorizar las funciones renal y hepática en animales y seres humanos tras tratamiento farmacológico o cuando la función renal se altera debido a una enfermedad.

Sumario de la invención La invención proporciona un procedimiento para evaluar la toxicidad renal en un individuo tras la administración de compuestos que se sospecha que producen toxicidad renal, en el que la toxicidad renal se identifica mediante medición de un conjunto de biomarcadores en una muestra de orina del individuo y comparación de la cantidad de biomarcador medida con la correspondiente cantidad en un individuo sano, en el que los biomarcadores se seleccionan del grupo que consiste en los biomarcadores enumerados en la TABLA 1 e incluyen la proteína β-2microglobulina y en el que la toxicidad renal consiste en alteraciones o daños glomerulares.

La invención también proporciona un procedimiento para monitorizar la eficacia del tratamiento de un sujeto con un agente que comprende las etapas de: (i) obtener una muestra de orina previa a la administración de un sujeto antes de la administración del agente; (ii) detectar el nivel de expresión de la β-2-microglobulina en la muestra previa a la administración; (iii) obtener una o más muestras de orina previas a la administración del sujeto; (iv) detectar el nivel de expresión de la β-2-microglobulina en las muestras después de la administración; (v) comparar el nivel de expresión de la β-2-microglobulina en la muestra previa a la administración con el nivel de expresión de la β-2microglobulina en la muestra posterior a la administración; (vi) alterar la administración del agente al sujeto en consecuencia.

La invención hace posible la predicción, clasificación, correlación y diagnóstico de toxicidad renal en base a los datos presentados en el presente documento.

Breve descripción de las figuras

Las figuras del dibujo representan realizaciones preferidas a modo de ejemplo, pero no a modo de limitación.

La FIG. 1 es una lista de los compuestos administrados a los animales en los estudios in vivo.

La FIG. 2 muestra el número de lesiones renales que se comunicaron en los 10 estudios. Los números se subdividen por grado y por grupos de tratamiento (animales tratados con nefrotóxico frente a animales tratados con vehículo y con hepatotóxico) .

La FIG. 3 es una tabla que muestra las lesiones renales en histopatología que se comunicaron en los 10 estudios in vivo. El número de apariciones se indican clasificados por grado y por grupos de tratamiento (animales tratados con

nefrotóxico frente a animales tratados con vehículo y con hepatotóxico) .

La FIG. 4 es una matriz de histopatología renal para el estudio de cisplatino. Cada columna representa una lesión localizada. Cada fila corresponde a un animal, de modo que los animales se ordenan por grupo de dosis (controles, dosis baja, dosis media y dosis alta) y dentro de cada grupo de dosis por punto de tiempo de terminación. Si se comunicó una lesión, el grado está representado por un recuadro naranja con el correspondiente grado en él (grado 1, grado 2-5, sin informe / grado 0) . Los procedimientos dominantes están marcados.

La FIG. 5 es una tabla que muestra las lesiones hepáticas en histopatología que se comunicaron en los 10 estudios in vivo. Se enumera el número de apariciones.

La FIG. 6 es una tabla que muestra los resultados del análisis de características del operador receptor (ROC) para biomarcadores y los patrones estándar para ciertas enfermedades. La columna 1 representa el biomarcador, la columna 2 la entidad molecular, la columna tres el medio, en el que se midió el biomarcador, y la columna 4 la enfermedad para la que se realizó el análisis ROC. La columna 5 representa las ACU y el error estándar de la misma. La columna 6 indica si un valor de biomarcador aumenta con la presencia de la correspondiente enfermedad (+) o disminuye (-) . Las columnas 7 y 8 muestran los números de animales usados para el análisis correspondiente. La columna 11 muestra la sensibilidad correspondiente para una especificidad del 95 % (columna 10) y la columna 9 el correspondiente umbral del biomarcador. Además de los biomarcadores de interés, también se muestran los resultados para los patrones actuales BUN y creatinina sérica para las 10 enfermedades de interés. Esta tabla demuestra el uso y rendimiento de las implementaciones de dispositivos, ensayos, prueba diagnóstica o kits diagnósticos de los biomarcadores específicos indicados para monitorizar las enfermedades renales específicas enumeradas.

La FIG. 7 es un conjunto de gráficas de dispersión que muestran una valoración de la hepatotoxicidad por diferentes biomarcadores proteicos. Los biomarcadores se obtuvieron de animales a los que se administró vehículo o diferentes dosis del hepatotóxico ANIT (alfa-naftilisotiocianato) . En este estudio se observaron hallazgos histopatológicos relacionados con la dosis en el hígado, pero no en el riñón. En las gráficas se muestran los niveles de concentración relativa (cambios frente a los controles) . Los niveles de la dosis se representan mediante las diferentes sombras de color, los puntos de tiempo de la toma de muestras se representan mediante las etiquetas. Los niveles de biomarcador se correlacionan bien con la dosis y, por tanto, con la hepatotoxicidad relacionada con la dosis. Los biomarcadores representados en estas gráficas son ALAT medida en plasma (FIG. 7A, parte superior) , lipocalina-2 medida en plasma (FIG. 7A, parte inferior) , GST-mu medida en plasma (FIG. 7B parte superior) y lipocalina-2 medida en orina (FIG. 7B, parte inferior) .

La FIG. 8 es un conjunto de gráficas de dispersión que muestran una valoración de la lesión renal por diferentes biomarcadores proteicos y parámetros de química clínica. Los biomarcadores se obtuvieron de animales a los que se administró vehículo o diferentes dosis del nefrototóxico cisplatino. En las gráficas se muestran los niveles de concentración relativa (cambios frente a los controles) . Los niveles de la dosis se representan como etiquetas en el eje x, los puntos de tiempo de la toma de muestras se representan mediante las etiquetas de las muestras. Las muestras se sombrean en color mediante el grado más alto del hallazgo histopatológico observado en el riñón. La barra horizontal... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para evaluar la toxicidad renal en un individuo tras la administración de compuestos que se sospecha que producen toxicidad renal, en el que la toxicidad renal se identifica mediante medición de un conjunto de biomarcadores en una muestra de orina del individuo y comparación de la cantidad de biomarcador medida con la correspondiente cantidad en un individuo sano, en el que los biomarcadores están seleccionados del grupo que consiste en los biomarcadores enumerados en la TABLA 1 e incluyen la proteína β-2-microglobulina y en el que la toxicidad renal consiste en alteraciones o daños glomerulares.

2. Un procedimiento para diagnosticar, predecir y clasificar la toxicidad renal mediante el uso de la proteína -2microglobulina en orina y mostrar alteraciones o daños glomerulares.

3. Un procedimiento para monitorizar la eficacia del tratamiento de un sujeto con un agente que comprende las etapas de: (i) obtener una muestra de orina previa a la administración de un sujeto antes de la administración del agente; (ii) detectar el nivel de expresión de la β-2-microglobulina en la muestra previa a la administración; (iii) obtener una o más muestras de orina previas a la administración del sujeto; (iv) detectar el nivel de expresión de la β-2-microglobulina en las muestras después de la administración; (v) comparar el nivel de expresión de la β-2

microglobulina en la muestra previa a la administración con el nivel de expresión de la β-2-microglobulina en la muestra posterior a la administración; (vi) alterar la administración del agente al sujeto en consecuencia.