Anticuerpo monoclonal humano con efecto reductor de la grasa.

Anticuerpo purificado, caracterizado por que

- la secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera (VL) es al menos el 90 % idéntica a lasecuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº 1 y la secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadenapesada (VH) es al menos el 90 % idéntica a la SEC ID Nº 3 y

- el anticuerpo une lipoproteínas de baja densidad (LDL),

en particular colesterol LDL.

Anticuerpo monoclonal humano con efecto reductor de la grasa La invención se refiere a un polipéptido purificado (SAM-6.10) y su uso en combinación con adyuvantes y/o excipientes habituales para la producción de un medicamento con efecto reductor de la grasa, así como a la producción de un medicamento para el tratamiento de enfermedades renales.

Antecedentes de la invención Cuando existen unos niveles excesivos de colesterol (hiperlipoproteinemia) en el cuerpo, se produce una calcificación (placa aterosclerótica) de las capas internas de los vasos sanguíneos y un endurecimiento lento y progresivo de las paredes arteriales. En casos extremos, se puede producir la oclusión del vaso o la rotura de la placa y la formación de un trombo. La arteriosclerosis y sus complicaciones (enfermedades coronarias, infarto de miocardio, enfermedad oclusiva arterial periférica, ictus) sigue siendo la causa más frecuente de muerte en el mundo occidental. Se estima que bastante más de la mitad de los recursos disponibles para la asistencia médica se destinan a las consecuencias de la arteriosclerosis. Para aclarar las causas de la aterosclerosis, se han desarrollado varias teorías, de las cuales la teoría de los lípidos es la más considerada de todas.

En términos generales, cuanto mayor es el contenido de colesterol LDL o el contenido de colesterol LDL oxidado en la sangre, mayor es el riesgo de calcificación vascular, por ejemplo, con el resultado de infarto de miocardio. El sobrepeso y la hipercolesterinemia son los factores de riesgo más importantes para el desarrollo de una arteriosclerosis.

Definiciones y términos

Las grasas como, por ejemplo, el colesterol no son solubles ni en agua ni en el plasma sanguíneo. Para poderlo transportar a regiones individuales del cuerpo, las grasas, una vez que se encuentran en la sangre, se unen a determinadas sustancias (proteínas) . Estos compuestos constituidos por lípidos (grasas) y proteínas, se denominan lipoproteínas.

Las "lipoproteínas" del plasma, son complejos hidrosolubles de alto peso molecular que consisten en lípidos (colesterol, triglicéridos, fosfolípidos) y apolipoproteínas. La lipoproteína LDL que contiene colesterol (colesterol LDL) produce aterosclerosis y se denomina colesterol "malo".

El "colesterol" se sintetiza ubicuamente en el cuerpo y es un componente esencial de las membranas celulares y de las lipoproteínas. Al contrario que los triglicéridos y fosfolípidos sintetizados endógenamente, el anillo esterol de la molécula de colesterol no puede degradarse; el colesterol se convierte en el hígado en ácidos biliares o se excreta inalterado a través de la vesícula en el intestino.

En el plasma, el colesterol está en un 25-40 % en forma libre (no esterificado) y hasta en un 60-75 % esterificado con ácidos grasos insaturados. Ambas formas se denominan conjuntamente como colesterol total. Debido a su baja solubilidad en agua, el colesterol se transporta en el plasma como un complejo con las apolipoproteínas. En la sangre, aproximadamente el 70 por ciento del colesterol total se transporta mediante las lipoproteínas de baja densidad (LDL) .

Los "triglicéridos" son ésteres de glicerol con tres residuos de ácido graso. De manera análoga al colesterol, los triglicéridos del plasma, debido a su baja solubilidad, también se transportan unidos a apolipoproteínas.

Las "lipoproteínas" se sintetizan en el hígado o en el intestino y transportan en la sangre sustancias solubles en la grasas como el colesterol.

La clasificación de las lipoproteínas se hace en función de su densidad, se distinguen cinco clases de densidad: quilomicrones, lipoproteínas de muy baja densidad (VDL) , lipoproteínas de baja densidad (LDL) y lipoproteínas de alta densidad (HDL) . Los quilomicrones, cuya concentración fisiológica en suero en ayunas, al contrario que otras lipoproteínas, es muy baja, son vehículos de transporte para glicéridos exógenos. La distribución fisiológica de las otras lipoproteínas es la siguiente: VLDL 10 %, LDL 70 % y HDL 20 %. Las VLDL son las precursoras de las LDL y el vehículo para el transporte de glicéridos endógenos. Las LDL se originan por hidrólisis de las VLDL. Las LDL y las HDL son reguladoras del colesterol celular y las HDL también regulan la lipolisis (escisión de triglicéridos en glicerol y ácidos grasos libres) . Las LDL tienen un diámetro de aproximadamente 20 nm. Las HDL son las más pequeñas (710 nm) y las lipoproteínas con más contenido de proteína. Además de las LDL nativas (LDL) , en la sangre se detectan LDL oxidadas (LDLox) . Las LDLox interactúan con proteínas plasmáticas endógenas, especialmente, glucoproteínas, mediante ligandos específicos y forman complejos LDLox-glucoproteínas.

Las "apolipoproteínas" son un componente de las lipoproteínas y, junto con lípidos polares, rodean a modo de una cubierta externa el núcleo de la lipoproteína compuesto de lípidos hidrófobos. Salvo las LDL, que sólo contienen apoproteína B, las diferentes clases de lipoproteínas presentan varias clases de apolipoproteínas estructuralmente diferentes.

Transporte de las lipoproteínas El colesterol es transportado fundamentalmente por las dos clases de lipoproteínas, LDL y HDL. Las LDL son las principales responsables del transporte del colesterol a las células periféricas que tienen receptores específicos de las LDL. Las HDL permiten y aceleran la salida del colesterol de las células extrahepáticas y de las paredes de los vasos sanguíneos y lo conducen hasta el hígado.

Patogenicidad

En cuanto a la patogenicidad en el metabolismo de los lípidos se puede decir en general que unos niveles elevados de colesterol LDL asociados a niveles reducidos de colesterol HDL representan el aumento de riesgo más pronunciado en el riesgo de aterosclerosis. Por lo tanto, en la patogénesis, las LDL, cuyas partículas contribuyen a la formación de placas ateroscleróticas, y las HDL desempeñan un papel opuesto. Para evaluar el riesgo de infarto, son determinantes el cociente colesterol total/colesterol HDL y, en particular, el cociente colesterol LDL/colesterol HDL. (El papel protector del colesterol HDL ha sido demostrado también en estudios epidemiológicos (estudio Framingham) . Las secuelas de la aterosclerosis incluyen, además de cardiopatía coronaria y enfermedades oclusivas arteriales periféricas, especialmente el infarto de miocardio y el ictus) .

Probablemente, las LDLox, al igual que las LDL, forman placas ateroscleróticas, representando las LDLox el mayor riesgo para el organismo.

En otras enfermedades, las LDLox también parecen jugar un papel importante. En pacientes con insuficiencia renal crónica y diabetes, la concentración de complejos LDLox-glucoproteína es mayor que en pacientes sanos.

Las LDL son eliminadas por el hígado y por los macrófagos de la corriente sanguínea. Los macrófagos son células del sistema de defensa frente a organismos extraños que son capaces de fagocitar partículas más grandes.

La vía depuradora (scavenger pathway) es un modelo conocido para explicar la captación de las partículas por las células (fagocitosis) . La captación de partículas sólidas (desechos tisulares, cuerpos extraños, bacterias o placas de LDL) y su inclusión en el interior de la célula con la posterior degradación intracelular tiene lugar mediante fagocitosis. Las células con capacidad de fagocitosis, también conocidas como fagocitos, se dividen fundamentalmente en macrófagos tisulares y monocitos sanguíneos móviles.

En la "fagocitosis", tras la adhesión de las partículas a las membranas celulares de los fagocitos mediante unión a los receptores Fc y del complemento presentes en la membrana, se produce la activación de estructuras contráctiles dentro del citoplasma. Mediante invaginaciones locales de las membranas celulares se produce la inclusión de las partículas en las vacuolas citoplasmáticas.

Los denominados fagocitos barrenderos (depuradores) se encuentran en los ganglios linfáticos y a lo largo de los cordones medulares de la médula espinal. Durante el paso de la linfa desde las terminaciones aferentes a las eferentes de los ganglios linfáticos, las células con capacidad de fagocitosis eliminan las partículas de antígenos.

Además, se sabe que la adherencia a las células fagocíticas, como leucocitos polimórficos y macrófagos se ve aumentada por la unión de inmunoglobulinas (Ig) a la superficie de bacterias (y a otros antígenos) . Se creer que esta mayor adherencia se consigue mediante la adición de la fracción Fc de la inmunoglobulina a los receptores Fc de los fagocitos. Dependiendo de la afinidad de los antígenos por la adhesión de (o unión de) anticuerpos,... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo purificado, caracterizado por que

- la secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera (VL) es al menos el 90 % idéntica a la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº 1 y la secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada (VH) es al menos el 90 % idéntica a la SEC ID Nº 3 y

- el anticuerpo une lipoproteínas de baja densidad (LDL) , en particular colesterol LDL.

2. Anticuerpo purificado de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado por que la secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera (VL) es al menos el 95 % idéntica a la SEC ID Nº 1 y la secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada (VH) es al menos el 95 % idéntica a la SEC ID Nº 3.

3. Anticuerpo purificado de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, caracterizado por que la unión del anticuerpo a lipoproteínas de baja densidad (LDL) y lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) es más fuerte que la unión a lipoproteínas de alta densidad (HDL) .

4. Anticuerpo de acuerdo con una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado por que el anticuerpo y las lipoproteínas de baja densidad (LDL) existentes en el cuerpo humano y animal tienen estructuras de hidratos de carbono complementarias.

5. Anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado por que la secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera (VL) es al menos el 90 % idéntica a la SEC ID Nº 2 y la secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada (VH) es al menos el 90 % idéntica a la SEC ID Nº 4.

6. Anticuerpo de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 o 2, caracterizado por que el anticuerpo está codificado por secuencias de ácido nucleico que son idénticas a los nucleótido.

6. 99 (CDR1) .

14. 165 (CDR2) .

26. 288 (CDR3) de la SEC ID Nº 2 y son idénticas a los nucleótido.

9. 105 (CDR1) .

14. 198 (CDR2) .

29. 330 (CDR3) de la SEC ID Nº 4.

7. Anticuerpo, que contiene las regiones determinantes de la complementariedad (CDR) , que en la cadena pesada (VH) presentan las secuencias de aminoácidos Ser-Tyr-Ala-Met-His (CDR1) , Val-Ile-Ser-Tyr-Asp-Gly-Ser-Asn-Lys-Tyr-Tyr-Ala-Asp-Ser-Val-Lys-Gly (CDR2) y Asp-Arg-Leu-Ala-Val-Ala-Gly-Lys-Thr-Phe-Asp-Tyr (CDR3) de la SEC ID Nº 3 y que en la cadena ligera, presentan las secuencias de aminoácidos (VL) Ser-Gly-Asp-Lys-Leu-Gly-Asp-Lys-Tyr-Ala-Cys (CDR1) , Gln-Asp-Ser-Lys-Arg-Pro-Ser (CDR2) y Gln-Ala-Trp-Asp-Ser-Ser-Ile-Val-Val (CDR3) de la SEC ID Nº 1 y en donde el anticuerpo une lipoproteínas de baja densidad (LDL) , en particular colesterol LDL.

8. Procedimiento para la producción de un anticuerpo purificado de acuerdo con una las reivindicaciones anteriores mediante la tecnología del hibridoma, caracterizado por que las células de hibridoma se obtienen por fusión de células de heteromieloma HAB-1 y sus sub-clones con linfocitos B extraídos de bazo, ganglios linfáticos o sangre humanos.

9. Anticuerpo purificado de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 - 7, caracterizado por que el anticuerpo se puede producir mediante el procedimiento reivindicado en la reivindicación 8.

10. Anticuerpo de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado por que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.

11. Anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 10, caracterizado por que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal humano.

12. Anticuerpo de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 11 en combinación con adyuvantes y/o sustancias vehículo convencionales para uso como un fármaco que tiene un efecto reductor de las grasas.

13. Anticuerpo de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 11 para su uso como un fármaco para reducir lipoproteína de baja densidad (LDL) en la sangre.

14. Anticuerpo de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 11 para su uso como un fármaco para reducir el colesterol LDL.

15. Anticuerpo de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 11 para su uso como un fármaco para el tratamiento de enfermedades renales.

16. Anticuerpo para su uso de acuerdo con la reivindicación 15 para la producción de un fármaco para el tratamiento de la glomerulonecrosis.