Anticuerpo monoclonal AS104 y derivado del mismo que se une específicamente a un hidrato de carbono de sialiltetraosilo como agente terapéutico anti-tumoral potencial.

Un anticuerpo, que comprende los siguientes dominios:

GYSITSGYSWH (aminoácidos 44 a 54 de la figura 1a) o SGYSWH (aminoácidos 49 a 54 de la figura 1a),

HIHFSGRPTYNPSLSS (aminoácidos 69 a 84 de la figura 1a),

KGKGSDDGLNY (aminoácidos 117 a 127 de la figura 1a),

SASSSLSYIH (aminoácidos 46 a 55 de la figura 1c),

DTSNLAS (aminoácidos 71 a 77 de la figura 1c), y

FQGSEYPLT (aminoácidos 110 a 118 de la figura 1c),

en el que la unión del anticuerpo a una célula es capaz de inducir la muerte celular sin necesidad de célulasefectoras inmunes.

Anticuerpo monoclonal AS104 y derivado del mismo que se une específicamente a un hidrato de carbono de sialiltetraosilo como agente terapéutico anti-tumoral potencial

La presente invención se refiere a anticuerpos y sus fragmentos, que se unen a un epitopo relevante para el cáncer y la endometriosis. Estos anticuerpos y fragmentos son útiles para el diagnóstico y tratamiento de tumores.

Son conocidos anticuerpos que se unen a gangliósidos GM2, GD3 y GM3, pero no ha sido anteriormente descrito un anticuerpo que se una a sialiltetraosilceramida, pero que no se una a GM1, GD1a, GT1b o antígenos de Lewis de sialilo. Un anticuerpo monoclonal de ratón (mab) , conocido en la presente memoria descriptiva como “SC104”, fue elevado a una inmunización secuencial con 4 líneas celulares de cáncer colorrectal y se une a un 71% de los tumores colorrectales. El SC104 es específico para un hidrato de carbono de sialiltetraosilo, que puede estar presente en una cadena principal de lípido (ceramida) o proteína, y reconoce tumores de esófago, colorrectal, gástricos, de mamas, parotídeo y endometrial. El SC104 es inusual ya que es un anticuerpo de IgG1. Una de las características inmunológicas de los antígenos de hidratos de carbono es que habitualmente provocan una respuesta independiente de células T, dando lugar a la producción de un anticuerpo de IgM. El SC104 se mostró mediante placas de HPLTC de inmuno-tinción de extractos lípidos a partir de la línea celular colorrectal C170, que se unía a sialiltetraosil-ceramida. El SC104 se mostró también que se unía a un resto de proteína que tiene el hidrato de carbono de sialiltetraosilo. El reconocimiento del tejido normal fue mínimo y restringido a una tinción moderada del intestino grueso, glándula salivar, intestino delgado, timo, amígdalas y cuello uterino. La presente invención encontró también que, sorprendentemente, el anticuerpo inducía la muerte celular.

Según un primer aspecto de la presente invención, se proporciona un anticuerpo que comprende los siguientes dominios:

GYSITSGYSWH (aminoácidos 44 a 54 de la figura 1a) o SGYSWH (aminoácidos 49 a 54 de la figura 1a) ,

HIHFSGRPTYNPSLSS (aminoácidos 69 a 84 de la figura 1a) ,

KGKGSDDGLNY (aminoácidos 117 a 127 de la figura 1a) ,

SASSSLSYIH (aminoácidos 46 a 55 de la figura 1c) ,

DTSNLAS (aminoácidos 71 a 77 de la figura 1c) , y

FQGSEYPLT (aminoácidos 110 a 118 de la figura 1c) ,

en que la unión del anticuerpo a una célula es capaz de inducir la muerte celular sin necesidad de células efectoras inmunes.

Un anticuerpo de la invención comprende la secuencia de aminoácidos:

DVQLQESGPDLVKPSQSLSTCTVTGYSITSGYSWHWVRQFPGNKMEWMGHIHFSGRPTYNPSLSSRISITRDTSKN QFLLQLVKVTTEDTSTYFCARKGKGSDDGLNYWGQGISVTVSSAKTTPPPVYPLVPGSL (aminoácidos 19 a 138 de la figura 1a) , o la secuencia de aminoácidos:

MRVLILLCLFTAFPGILSDVQLQESGPDLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSGYSWHWVRQFPGNKMEWMGHIHFSGRPT YNPSLSSRISITRDTSKNQFLLQLKFVTTEDTSTYFCARKGKGSDDGLNYWGQGISVTVSSAKTTPPVYPLVPGLS (aminoácidos 1 a 138 de la figura 1a) .

El o cada dominio de unión puede ser portado por un marco de anticuerpos humanos. Por ejemplo, una o más regiones de unión pueden sustituir a las CDR de un anticuerpo humano completo o de su región variable.

Un anticuerpo de la invención comprende la secuencia de aminoácidos:

ENVLTQSPVIMSASPGEKVTMTCSASSSLSYTHWYQQKSRTSPKLWIYDTSNLAGSGVPGRFSGSGSGNSYSLTISS MEAEDVATYYCQGSEYPLTFGGGTKLEMTRADAAPTVSIFPPSSKLGK (aminoácidos 23 a 128 de la figura 1c) o la secuencia de aminoácidos MDSQVQIFSFLLISASVIMSRGENVLTQSPVIMSASPGEKVTMTCSASSSLSYIHWYQQKSRTSPKLWIYDTSNLASGV PGRFSGSGSGNSYSLTISSMEAEDVATYYCFQGSEYPLTFGGGTKLEMTRADAAPTVSIFPPSSKLGK (aminoácidos 1 a 128 de la figura 1c)

Los anticuerpos de la invención pueden portar un marcador detectable o funcional.

También se proporciona un ácido nucleico aislado que comprende una secuencia que codifica un anticuerpo de la invención y métodos para preparar anticuerpos de la invención que comprenden expresar dichos ácidos nucleicos bajo condiciones para llevar a cabo la expresión de dicho anticuerpo y recuperar el anticuerpo.

La invención proporciona también una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo de la invención y un excipiente, diluyente, vehículo, tampón o estabilizador farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica puede comprender adicionalmente un agente activo seleccionado entre el grupo que consiste en doxorubicina, paclitaxel, 5-fluorouracilo, irinotecano y cisplatino.

Los anticuerpos y composiciones farmacéuticas según la invención pueden ser usados en un método de tratamiento o diagnóstico del cuerpo humano o animal, como un método de tratamiento de un tumor en un paciente (preferentemente humano) , que comprende administrar a dicho paciente una cantidad eficaz de un anticuerpo de la invención. La invención proporciona también un anticuerpo o composición farmacéutica de la presente invención para ser usado en medicina, particularmente para tratar un tumor, así como el uso de un anticuerpo o composición farmacéutica de la presente invención en la fabricación de un medicamento para el diagnóstico o tratamiento de un tumor.

También se proporciona el antígeno al que se unen los anticuerpos de la presente invención. Puede ser proporcionado un hidrato de carbono de sialiltetraosilo que es capaz de ser unido, preferentemente de forma específica, por un anticuerpo de la presente invención. El hidrato de carbono de sialiltetraosilo puede ser proporcionado en forma aislada y puede ser usado en una selección para desarrollar miembros de unión específicos para el mismo. Por ejemplo, puede ser seleccionada una biblioteca de compuestos para los miembros de la biblioteca que se unen específicamente al hidrato de carbono de sialiltetraosilo.

El hidrato de carbono de sialiltetraosilo puede estar en una cadena principal lípida (es decir, una sialiltetraosilceramida) o en una cadena principal de proteína. Cuando está en una cadena principal de proteína, puede tener un peso molecular de aproximadamente 50-75 kDa, según se determina mediante SDS-PAGE.

Estos y otros aspectos de la invención se describen más en detalle a continuación.

Como se usa en la presente memoria descriptiva, “tratamiento” incluye cualquier régimen que pueda aprovechar un ser humano o animal no humano, preferentemente un mamífero. El tratamiento puede ser con respecto a un estado existente o puede ser profiláctico (tratamiento preventivo) .

Como se usa en la presente memoria descriptiva, un “tumor” es un crecimiento anormal de un tejido. Puede ser localizado (benigno) o invadir los tejidos cercanos (maligno) o tejidos distantes (metastático) . Los tumores incluyen crecimientos neoplásticos que provocan cáncer e incluyen tumores de esófago, colorrectal, gástrico, de mamas y endometrial, así como tejidos cancerosos o líneas celulares que incluyen, pero sin limitación, células leucémicas. Como se usa en la presente memoria descriptiva, “tumor” incluye también dentro de su alcance la endometriosis.

El término “anticuerpo”, como se usa en la presente memoria descriptiva, se refiere a moléculas de inmunoglobulina y partes inmunológicamente activas de moléculas de inmunoglobulinas, es decir, moléculas que contienen un sitio de unión a antígeno que se une específicamente a un antígeno, ya sea producido de forma natural o parcial o completamente sintética. El término abarca también cualquier polipéptido o proteína que tenga un dominio de unión que es un dominio de unión a anticuerpo u homólogo del mismo. Estos pueden ser derivados de fuentes naturales o pueden ser producidos de forma parcial o completamente sintética. Ejemplos de anticuerpos son los isotipos de inmunoglobulinas (por ejemplo, IgG, IgE, IgM, IgD e IgA) y sus subclases isotípicas; fragmentos que comprenden un dominio de unión a antígeno como Fab, scFv, Fv, dAb, Fd; y diacuerpos. Los anticuerpos pueden ser policlonales o monoclonales. Un anticuerpo monoclonal puede ser denominado en la presente memoria descriptiva “mab”.

Es posible tomar anticuerpos monoclonales y otros y usar técnicas de tecnología de DNA recombinante para producir otros anticuerpos o moléculas quiméricas que retengan la especifidad del anticuerpo original. Estas técnicas pueden incluir DNA que codifica la región variable de inmunoglobulina, o las regiones determinantes complementarias (CDR) de un anticuerpo para las regiones constantes, o regiones constantes más regiones de marcos, de una inmunoglobulina diferente. Véanse, por ejemplo, los documentos EP-A-184187, GB 2188638A o EPA-239400.... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo, que comprende los siguientes dominios: GYSITSGYSWH (aminoácidos 44 a 54 de la figura 1a) o SGYSWH (aminoácidos 49 a 54 de la figura 1a) , HIHFSGRPTYNPSLSS (aminoácidos 69 a 84 de la figura 1a) , KGKGSDDGLNY (aminoácidos 117 a 127 de la figura 1a) , SASSSLSYIH (aminoácidos 46 a 55 de la figura 1c) , DTSNLAS (aminoácidos 71 a 77 de la figura 1c) , y FQGSEYPLT (aminoácidos 110 a 118 de la figura 1c) , en el que la unión del anticuerpo a una célula es capaz de inducir la muerte celular sin necesidad de células

efectoras inmunes.

2. Un anticuerpo según la reivindicación 1, que comprende la secuencia de aminoácidos:

DVQLQESGPDLVKPSQSLSTCTVTGYSITSGYSWHWVRQFPGNKMEWMGHIHFSGRPTYNPSLSSRISITRDTSKN QFLLQLVKVTTEDTSTYFCARKGKGSDDGLNYWGQGISVTVSSAKTTPPPVYPLVPGSL (aminoácidos 19 a 138 de la figura 1a) .

3. Un anticuerpo según la reivindicación 1 o reivindicación 2, que comprende la secuencia de aminoácidos:

MRVLILLCLFTAFPGILSDVQLQESGPDLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSGYSWHWVRQFPGNKMEWMGHIHFSGRPT YNPSLSSRISITRDTSKNQFLLQLKFVTTEDTSTYFCARKGKGSDDGLNYWGQGISVTVSSAKTTPPVYPLVPGLS (aminoácidos 1 a 138 de la figura 1a) .

4. Un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende la secuencia de aminoácidos:

ENVLTQSPVIMSASPGEKVTMTCSASSSLSYTHWYQQKSRTSPKLWIYDTSNLAGSGVPGRFSGSGSGNSYSLTISS MEAEDVATYYCQGSEYPLTFGGGTKLEMTRADAAPTVSIFPPSSKLGK (aminoácidos 23 a 128 de la figura 1c) .

5. Un anticuerpo según la reivindicación 4, que comprende la secuencia de aminoácidos

MDSQVQIFSFLLISASVIMSRGENVLTQSPVIMSASPGEKVTMTCSASSSLSYIHWYQQKSRTSPKLWIYDTSNLASGV PGRFSGSGSGNSYSLTISSMEAEDVATYYCFQGSEYPLTFGGGTKLEMTRADAAPTVSIFPPSSKLGK (aminoácidos 1 a 128 de la figura 1c) .

6. Un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende adicionalmente una región constante humana.

7. Una composición farmacéutica, que comprende un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones anteriores y un excipiente, diluyente, vehículo, tampón o estabilizador farmacéuticamente aceptable.

8. Una composición farmacéutica según la reivindicación 7, que comprende adicionalmente un agente activo seleccionado entre el grupo que consiste en doxorubicina, paclitaxel, 5-fluorouracilo, irinotecano y cisplatino.

9. Un anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 o una composición farmacéutica según la reivindicación 7 o la reivindicación 8, para ser usado en medicina.

10. Un anticuerpo o composición farmacéutica según la reivindicación 9, para ser usado en el tratamiento de un tumor.

11. El uso de un anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 o una composición farmacéutica según la reivindicación 7 o la reivindicación 8, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un tumor.