USO DE ANTAGONISTAS DEL RECEPTOR CB1 PARA LA FABRICACIÓN DE UNA COMPOSICIÓN ÚTIL PARA EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES HEPÁTICAS.

Uso de antagonistas del receptor CB1 para la fabricación de una composición útil para el tratamiento de enfermedades hepáticas. CAMPO DE LA INVENCIÓN. La invención se refiere a un nuevo uso para antagonistas del receptor CB1 para la fabricación de una composición útil para reducir la fibrosis hepática. FUNDAMENTOS DE LA INVENCIÓN. La fibrosis hepática es la respuesta más común a la lesión hepática crónica, que finalmente conduce a la cirrosis y sus complicaciones, a la hipertensión portal, a la insuficiencia hepática y al carcinoma hepatocelular. El proceso fibrogénico es consecuencia de una proliferación y acumulación intensas de miofibroblastos hepáticos que sintetizan los componentes de la fibrosis e inhibidores de la degradación de la matriz (Friedman, S.L., J. Biol. Chem. 275, 2247-50 (2000)). El Cannabis Sativa contiene más de sesenta compuestos, el más activo de los cuales es (-) 9 -tetrahidrocannabinol (THC). También han sido caracterizados los cannabinoides naturales endógenos, anandamida y 2-araquidonil-glicerol, que son lípidos derivados del ácido araquidónico (Piomelli, D. et al., Trends Pharmacol. Sci. 21, 218-24. (2000)). Los cannabinoides se unen a los dos receptores acoplados a la proteína G, CB1 y CB2, que igualmente se unen al THC (Pertwee, R.G., Curr. Med. Chem. 6, 635-64. (1999)). El CB1 es, por tanto, uno de los dos receptores celulares humanos conocidos de los cannabinoides. Se sabe que este receptor, que es un receptor transmembranal acoplado a la proteína G, se expresa en el cerebro y en los vasos sanguíneos (Pertwee, R.G., Curr. Med. Chem. 6, 635-64 (1999)), pero no en los hepatocitos (Guzmán, M & Sánchez, C., Life Sci. 65, 657-64 (1999)). El CB1 media los efectos psicoacti- vos del cannabis (marihuana). En contraste, los receptores CB2 se expresan principalmente en el sistema inmunitario y están exentos de efectos psicoactivos (Friedman, S.L., J. Biol. Chem. 275, 2247-50 (2000)). Además de sus efectos psicótropos, los cannabinoides presentan efectos analgésicos, antieméticos y orexigénicos centrales (Harrold, J. A. & Williams, G. Br. J. Nutr. 90, 729-34 (2003)). Además, los cannabinoides también presentan propiedades antiinflamatorias y vaso-relajantes (Kumar, R.N., Chambers, W.A. & Pertwee., Anaesthesia 56, 1059-68. (2001)). Diversos estudios sugieren también que los cannabinoides pueden ser agentes antitumorales potenciales, debido a su capacidad de inducir la regresión de de diversos tipos de tumores experimentales, incluyendo glioma o tumores cutáneos. Estos efectos antitumorales son atribuidos principalmente a sus propiedades antiproliferantes y apoptóticas (Bifulco, M. et al., Faseb J, 29, 29 (2001); Casanova, M.L. et al., J. Clin. Invest. 111, 43-50. (2003); Sánchez, C. et al., Cancer Res. 61, 5784-9. (2001)). Solarmente existen unos cuantos datos referentes a la acción hepática de los cannabinoides. Los receptores CB1 y CB2 no se expresan en hepatocitos (Guzman, M. & Sánchez, C. Life Sci. 65, 657-64 (1999)). Sin embargo, los receptores CB1 están presentes en las células endoteliales aisladas de las arterias hepáticas, y su expresión aumenta durante la cirrosis (Batkai, S. et al. Nat. Med. 7, 827-32. (2001)). Se han aislado dos isoformas del receptor CB1: una isoforma larga (correspondiente a la SEQ ID NO:1) y una más corta truncada en la parte NH2 terminal correspondiente a una variante de empalme (correspondiente a la SEQ ID NO:2), que difiere en su afinidad para sus ligandos (Shire et al., J. Biol. Chem, (1995); Rinaldi-Carmona et al, J. Pharmacol. Exp. Ther. (1996)). También existen 5 polimorfismos de un solo nucleótido en la región codificadora del gen del receptor CB1. De estos solarmente tres dan como resultado cambios de un solo aminoácido en el receptor CB1 (siendo estos, en la SEQ ID NO:1, una sustitución de fenilalanina por leucina en la posición 200, una sustitución de isoleucina por valina en la posición 216 y una sustitución de valina por alanina en la posición 246 y las correspondientes posiciones en la SEQ ID NO:2). Existe una secuencia de 7 dominios de consenso para el receptor CB1 que está fuertemente conservada en los vertebrados, pero que no aparece en otros receptores de cannabinoides (Attwood, T.K. and Findlay, J.B.C., Protein Eng. 7(2) 195-203 (1994), Attwood, T.K. and Findlay, J.B.C., 7TM, Volume 2 Eds G. Vriend and B. Bywater, (1993), Birnbaumer, L., Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol, 30, 675-705 (1990), Casey, P. J. and Gilinan, A. G., J. Biol. Chem. 263(6) 2577-2580 (1988), 5. Attwood, T.K. and Findlay, J.B.C, Protein Eng. 6(2) 167-176 (1993), Watson, S. and Arkinsall, S, en The G Protein-Linked Receptor Factsbook, Academic Press, 1994, pp. 80-83). Dicha secuencia de aminoácidos de consenso comprende los 7 dominios proteínicos de la SEQ ID NO:3 hasta la SEQ ID NO:9. Se han descrito previamente antagonistas del receptor CB1, que incluyen agonistas contrarios o inversos. Estos incluyen las amidas sustituidas descritas en el documento WO 03/077847, las aril-amidas sustituidas descritas en el docu- mento WO 03/087037, los imidazoles sustituidos descritos en el documento WO 03/063781, las amidas bicíclicas descri- tas en el documento WO 03/086288, los derivados de terfenilo descritos en el documento WO 03/084943, la Npiperidino-3-pirazolcarboxamida y la N-piperidino-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4-metilpirazol-3-carboxamida descritas en la patente EP-B-656354, los compuestos de arilbenzo[b]tiofeno y benzo[b]furano descritos respectivamente en las patentes de EE.UU. 5.596.106 y EE.UU. 5.747.524, los derivados de azetidina descritos en la patente FR 2.805.817, la 3-amino-azetidina descrita en la patente FR 2.805.810 o los derivados de 1-(di-((hetero)aril)-metil)azetidina 3-sustituidos o 3,3-disustituidos descritos en la patente FR 2.805.818. Otros antagonistas están comercializados, tales como N-(piperidin-1-il)-1-(2,4-diclorofenil)-5-(4-yodofenil)-4-metil-1H- 2   pirazol -3-carboxamida, conocida comercialmente como AM251 y el compuesto conocido como LY-320135. Son conocidos los usos de estos antagonistas del receptor CB1 para el tratamiento de la disfunción sexual (solicitud de patente WO 03/082256) o diarrea (solicitud de patente WO 01/85092) o enfermedades neuro-inflamatorias o trastornos por drogadicción, obesidad, asma y estreñimiento (solicitud de patente WO 03/077847). Los documentos constituidos por la patente de EE.UU. 5.939.429, las solicitudes de patentes WO 03/077847, WO 03/084930, WO 03/084943, WO 03/063781 y WO 03/087037 describen que los antagonistas del CB1 pueden invertir las alteraciones hemodinámicas sistémicas en ratas con hipertensión portal cirrótica. SUMARIO DE LA INVENCIÓN. Sin embargo, los documentos antes mencionados nunca describen que los antagonistas del CB1 pueden reducir la fibrogénesis en enfermedades hepáticas de cualquier etiología (alcohólica, vírica, tóxica). Además no se conoce la implicación de los receptores CB1 o los efectos de los antagonistas del CB1 en esteatohepatitis no alcohólica y carcinogénesis hepática. Los inventores demuestran ahora sorprendentemente que los antagonistas del CB1 tienen potentes propiedades antifibróticas en el hígado que se pueden usar para reducir la fibrosis hepática. Por consiguiente, la presente invención, basada en el hallazgo de que la inactivación de los receptores CB1 pueden reducir la fibrogénesis hepática asociada con la lesión o enfermedad hepática, proporciona una variedad de métodos y composiciones para reducir la fibrosis hepática. La invención se refiere por tanto a un antagonista del receptor CB1 para uso en un método para reducir la fibrosis hepática. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS. Figura 1: Histograma que muestra el contenido de TGF-ß1 hepático por mg de proteína soluble (panel A) y que muestra la expresión de alfa-actina hepática en la musculatura lisa como un porcentaje de la tinción del área superficial del corte total (panel B), tanto en ratones de tipo natural (mostrados como WT) como en ratones deficientes en CB1 (mostrados como CB1-/-). OO se refiere al grupo de ratones que recibieron solarmente aceite de oliva, mientras que CCl4 muestra los resultados de los ratones intoxicados con CCl4. Se midió la producción del TGF-ß1 hepático (la significación estadística es p<0,05). Para la determinación de la alfaactina de la musculatura lisa la tinción se cuantificó en 4-5 cortes de tejido hepático por animal (la significación estadística es p < 0,05). Figura 2: Histogramas que muestran respectivamente la viabilidad de miofibroblastos hepáticos (panel A) y actividad similar a caspasa-3 (panel B) inicialmente y 48 horas después de la privación de suero tanto en ratones de tipo natural (mostrados como WT) como en ratones deficientes en CB1 (mostrados como CB1KO). Se indujo la apoptosis por priva- ción de suero durante 48 horas. Los resultados de la viabilidad... [Seguir leyendo]

1. Un antagonista del receptor CB1 para uso en un método para reducir la fibrosis hepática. 21   22   23   24