Composición de linfocitos T, depletados en linfocitos T reguladores,

y que expresan una molécula que permite sudestrucción específica, para una utilización en el tratamiento de un tumor en un paciente, siendo la composicióndestinada a ser administrada al paciente después de un tratamiento linfopenia.

Tratamiento de tumores mediante preparaciones de linfocitos T

La presente invención se refiere al ámbito de la terapia celular de los cánceres. En particular la invención se refiere al tratamiento de las hemopatías malignas, después de recaída o en primera intención.

ESTADO DE LA TÉCNICA TECNOLÓGICO DE LA INVENTION

La eficacia del injerto de células madre hematopoyéticas (CSH) alogénicas para el tratamiento de las hemopatías malignas, incluso las leucemias, se basa a la vez sobre la mieloablación inducida por el acondicionamiento y también sobre la transferencia, en el seno del injerto, de células inmunocompetentes del donante que ejerce un efecto antileucémico. Este efecto se denomina “graft versus leukemia” (GVL) en inglés. La existencia de tal efecto GVL inicialmente fue sugerida por modelos animales y análisis estadísticos retrospectivos efectuados en el hombre que comparaba las tasas de recaída de la leucemia entre los pacientes injertados con un donante alogénico o singénico, entre los que reciben un injerto no manipulado o T-depletado, y entre los que desarrollan, o no, una enfermedad del injerto contra el huésped (GVH) aguda o crónica (Horowitz, et al 1990) . Más recientemente, la demostración de un efecto GVL ha sido aportada por la transfusión de leucocitos procedente de la sangre periférica del donante en pacientes en recaída después del injerto de CSH alogénicos. En efecto, en pacientes que presentan una recaída de leucemia mieloide crónica (LMC) después del injerto, se mostró que la inyección de leucocitos procedente del donante inicial (inyección de linfocitos del donante o ILD) podía inducir una nueva remisión, sin necesitar quimioterapia o radioterapia complementaria (Kolb, et al 1990) . Esta estrategia se convirtió en un tratamiento de primera intención en estos pacientes y se desarrolló para otras patologías hematológicas recidivantes después del injerto tales como las mielodisplasias, las leucemias agudas linfoblásticas (LAL) y las leucemias agudas mieloblásticas (LAM) , algunos linfomas, o los mielomas. Inicialmente utilizada después del injerto con un donante familiar HLA geno-idéntico, el ILD también se utiliza hoy en el marco de los injertos con un donante voluntario de CSH no emparentados (Porter, et al 2000; Dazzi, et al 2000a) .

En pacientes en recaída después del injerto, para los cuales hay poca alternativa, y cuyo pronóstico es severo, el ILD constituye una opción terapéutica aceptable, a la cual se puede sin embargo esperar aportar mejoras.

Anteriormente, se desarrollaron varias estrategias con el fin de ampliar la respuesta antitumoral después de ILD.

La primera, desarrollada por el equipo de S. Slavin, tenía por objeto estimular los Linfocitos T del donante bien sea in vitro antes de la inyección o bien a la vez in vitro y también in vivo después de la inyección, por la interleucina 2 (IL2) recombinante humana (Slavin, et al, 1996) . Se reserva tal inyección de Linfocitos T del donante “activados” a pacientes que no responden a una inyección de Linfocitos T del donante fresco. Así, en 5 pacientes en situación de recaída citológica de la hemopatía maligna, la inyección de Linfocitos T activados permitió obtener una remisión completa de la hemopatía que no se había obtenido después de inyección de Linfocitos T del donante fresco. En este estudio, es sin embargo difícil asignar la eficacia de la segunda inyección a la activación de los Linfocitos T en la medida en que puede existir un efecto acumulativo beneficioso de las inyecciones de Linfocitos T del donante, incluso en estado fresco (Dazzi et al, 2000b) . Es necesario también tener en cuenta que desde el año 1996, esta estrategia de activación de los Linfocitos T por el IL-2 no fue objeto de publicaciones que venían a confirmar su eficacia. Por lo tanto, su utilización no conoció desarrollo en una amplia escala.

Otra estrategia en curso de desarrollo contempla mejorar la presentación de los antígenos tumorales por las células leucémicas y volverlos así más sensible al efecto GVL. Se basa en datos obtenidos in vitro sobre células de leucemias mieloides, que se pueden diferenciar en células dendríticas con la ayuda de citoquinas tales como la interleucina 4 o el granulocito monocito colony stimulating factor (GM-CSF) (Brouwer, et al 2000; Chen, et al, 2000) . La utilización de GM-CSF in vivo se prevé así durante el período que rodea la inyección de linfocitos T del donante con el fin de ampliar el efecto GVL esperado (Kolb, et al, 2004) .

Otra estrategia, propuesta por Miller et al, 2007 consiste en un acondicionamiento del paciente por una quimioterapia linfopenia, antes de un ILD. Este acondicionamiento condujo a una expansión de los linfocitos con una mayor activación inmunitaria.

Por su parte, Powell et al intentaron administrar linfocitos autólogos depletados en linfocitos T reguladores a pacientes afectados por un melanoma (Powell et al, 2007) .

RESUMEN DE LA INVENTION

Los inventores proponen ahora efectuar una inyección de linfocitos T del donante, combinado con un acondicionamiento linfopenia, mieloablativo o no, del paciente, con el fin de aumentar el efecto antileucémico de los linfocitos inyectados.

Más concretamente el objeto de la invención es la utilización de linfocitos T, depletados en linfocitos T reguladores, y que expresan una molécula que permite su destrucción específica, para la preparación de una composición destinada a tratar un tumor en un paciente, siendo la composición destinada a ser administrada al paciente después de un tratamiento linfopenia, mieloablativo o no, preferentemente no mieloablativo.

También se describe un método para tratar un tumor, el método que incluye:

- el acondicionamiento del paciente por un tratamiento linfopenia, preferentemente no mieloablativo;

- la inyección al paciente de linfocitos T, que han sido previamente depletados en linfocitos T reguladores, y

expresan una molécula que permite su destrucción específica. Este procedimiento permite disminuir el rechazo inmunitario contra los linfocitos T, aumentar el efecto antileucémico

de los linfocitos T inyectados, e inyectar linfocitos T procedentes de un fondo genético diferente del primer donante y del receptor. También se describe un método para tratar un tumor en primera intención, el método que incluye:

- el acondicionamiento del paciente por un tratamiento linfopenia, mieloablativo o no;

- la inyección al paciente de células madre hematopoyéticas depletadas en linfocitos T; y

- la inyección al paciente de linfocitos T, que han sido previamente depletados en linfocitos T reguladores, y

expresan una molécula que permite su destrucción específica. Según los casos, se pueden en efecto utilizar linfocitos T autólogos o alogénicos, tal como se describe en detalle a continuación. DESCRIPCIÓN ENUMERADA DE LA INVENCIÓN Definiciones

Los linfocitos T están “depletados” en linfocitos T reguladores, a saber que la preparación de linfocitos T administrada al paciente no comprende prácticamente más que linfocitos T reguladores. Preferentemente, comprende menos de un 10% de la fracción de los linfocitos T reguladores antes de la depleción, preferentemente también menos de 1% de la fracción de los linfocitos T reguladores antes de la depleción.

Los linfocitos T expresan una “molécula que permite su destrucción específica”. Se puede tratar de una molécula codificada por un transgén o una molécula expresada naturalmente por los linfocitos T, cuando éstos son alogénicos. El término “destrucción específica” significa que solamente los linfocitos T administrados al paciente se destruirán, para impedir el desarrollo de una reacción de GVH.

La “molécula que permite su destrucción específica” puede ser por ejemplo un antígeno del sistema HLA, las moléculas Thy-1, receptor NGF o una forma truncada del receptor, o también un antígeno no inmunogénico y no expresado naturalmente por los linfocitos T. Los linfocitos T que llevan una u otra de estas moléculas pueden entonces ser destruidos específicamente por un suero antilinfocitario, o anticuerpos dirigidos específicamente contra dichos antígenos.

La “molécula que permite la destrucción específica”... [Seguir leyendo]

1. Composición de linfocitos T, depletados en linfocitos T reguladores, y que expresan una molécula que permite su destrucción específica, para una utilización en el tratamiento de un tumor en un paciente, siendo la composición destinada a ser administrada al paciente después de un tratamiento linfopenia.

2. Composición según la reivindicación 1, en la cual el tumor es una hemopatía maligna, como una leucemia aguda, una mielodisplasia o un síndrome linfoproliferativo.

3. Composición según la reivindicación 1, en la cual el tumor es un tumor sólido.

4. Composición según la reivindicación 1, en la cual los linfocitos T expresan un gen “suicida” que permite su destrucción específica.

5. Composición según la reivindicación 4, en la cual el gen denominado “suicida” codifica para una molécula capaz de reaccionar con un análogo de nucleósido para conducir a la muerte de dichos linfocitos T, siendo dicha molécula codificada por el gen “suicida” preferentemente una molécula apta para fosforilar un análogo de nucleósido en una molécula monofosfatada, ella misma convertible por enzimas celulares en nucleótido trifosfatado incorporable en ácidos nucléicos en curso de alargamiento bajo el efecto de las polimerasas con el efecto de la interrupción de alargamiento de las cadenas.

6. Composición según la reivindicación 5, en la cual dicho análogo de nucleósido es el aciclovir o el ganciclovir.

7. Composición según la reivindicación 5, en la cual dicha molécula codificada por el gen “suicida” es la timidina quinasa del virus del herpes simplex de tipo 1.

8. Composición según la reivindicación 1, en la cual el paciente sufre de una recaída cancerosa, después de un aloinjerto de células madre hematopoyéticas.

9. Composición según la reivindicación 8, en la cual dichos linfocitos T no proceden ni del donante ni del receptor del aloinjerto de células madre hematopoyéticas.

10. Composición según la reivindicación 1, en la cual los linfocitos T están destinados a ser administrados al paciente en primera intención, no sometiendo a dicho paciente a injerto de células madre hematopoyéticas y en la cual los linfocitos T son preferentemente autólogos frente al paciente y expresan un transgén que permite su destrucción específica.

11. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la cual los linfocitos T administrados al paciente son linfocitos T alogénicos.

12. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en la cual la depleción en linfocitos T reguladores se realizan ex vivo por selección negativa de las células CD25+ o selección positiva de las células CD127+.

13. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en la cual el tratamiento linfopenia es no mieloablativo y consiste, preferentemente, en una administración de ciclofosfamida, fludarabina y/o endoxan.

14. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en la cual la composición está destinada a ser administrada de 2 a 8 días después del tratamiento linfopenia no mieloablativo.

15. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en la cual la composición comprende linfocitos T modificados obtenidos por:

i. linfoferesis del donante;

ii. eliminación de los linfocitos T reguladores

iii. transducción de un gen codificador para una molécula que permite la destrucción específica de los linfocitos T,

iv. luego cultivo de los linfocitos T así modificados durante 10 a 21 días.