Polipéptido antigénico reconocido por sueros de pacientes infectados por un retrovirus cuyo genoma comprende una secuencia nucleotídica seleccionada de entre SEC ID nº 1 y SEC ID nº 89,

y/o en los cuales se ha reactivado dicho retrovirus, cuya secuencia peptídica consiste en una secuencia seleccionada de entre SEC ID nº 39, SEC ID nº 41 a SEC ID nº 44 y SEC ID nº 63.

Polipéptidos antigénicos asociados a la esclerosis en placas y utilizaciones.

La esclerosis en placas (SEP) es una enfermedad desmielinizante del sistema nervioso central (SNC) cuya causa completa permanece todavía desconocida.

Numerosos estudios han apoyado la hipótesis sobre una etiología vírica de la enfermedad, pero ninguno de los virus conocidos estudiados se ha revelado como el agente causal buscado: se ha realizado un informe de los virus buscados desde hace años en la SEP por E. Norrby (1) y R. T Jonson (2) .

Recientemente, un retrovirus, diferente de los retrovirus humanos conocidos, ha sido aislado en pacientes afectados por la SEP (3, 4 y 5) . Los autores han podido así demostrar que este retrovirus podía transmitirse in vitro, que pacientes afectados por la SEP producían anticuerpos susceptibles de reconocer proteínas asociadas a la infección de las células leptomeníngeas por este retrovirus, y que la expresión de éste podía estar considerablemente estimulada por los genes inmediatos-precoces de ciertos herpesvirus (6) .

Todos estos resultados apuntan hacia la implicación de al menos un retrovirus desconocido en la SEP o de un virus que tiene una actividad transcriptasa inversa detectable según el método publicado por H. Perron (3) y calificada de actividad "RT de tipo LM7".

Recientemente, los estudios del solicitante han permitido la obtención de dos líneas continuas de células infectadas por aislados naturales que proceden de pacientes diferentes afectados por la SEP, mediante un procedimiento de cultivo tal como se describe en el documento WO-A-93 20188. Estas dos líneas derivadas de células de plexos coroideos humanos, denominadas LM7PC y PLI-2 han sido depositadas respectivamente en la E.C.A.C.C el 22 de julio de 1992 y el 8 de enero de 1993, con los números 92 072201 y 93 010817, según las disposiciones del Tratado de Budapest. Por otra parte, los aislados víricos que poseen una actividad RT de tipo LM7 han sido también depositados en la E.C.A.C.C. con la denominación global de "cepas". La "cepa" o aislado alojado por la línea PLI-2, denominada POL-2, ha sido depositada en la E.C.A.C.C el 22 de julio de 1992 con el nº V92072202. La "cepa" o aislado alojado por la línea LM7PC, denominada MS7PG, ha sido depositada en la E.C.A.C.C. el 8 de enero de 1993 con el nº V93010816.

A partir de los cultivos y de los aislados citados anteriormente, caracterizados por criterios biológicos y morfológicos, se ha involucrado en la caracterización del material nucleico asociado a las partículas virales producidas en estos cultivos.

Las porciones de genoma ya caracterizadas han sido utilizadas para elaborar ensayos de detección molecular del genoma vírico, y ensayos inmunoserológicos, utilizando las secuencias de aminoácidos codificadas por las secuencias de nucleótidos del genoma vírico, para detectar la respuesta inmunitaria dirigida contra epítopos asociados a la infección y/o a la expresión vírica.

Estas herramientas han permitido confirmar ya una asociación entre la SEP y la expresión de las secuencias identificadas en las patentes citadas a continuación. Sin embargo, el sistema vírico descubierto por el solicitante, es similar a un sistema retrovírico complejo. En efecto, las secuencias encontradas encapsidadas en las partículas víricas extracelulares producidas por los diferentes cultivos de células de pacientes afectados por la SEP, muestran claramente que existe una co-encapsidación de genomas retrovíricos similares, pero diferentes del genoma retrovírico "salvaje" que produce las partículas víricas infecciosos. Este fenómeno se ha observado entre retrovirus replicativos y retrovirus endógenos que pertenecen a la misma familia, incluso heterólogos. La noción de retrovirus endógeno es muy importante en el contexto del descubrimiento del solicitante porque, en el caso de MSRV-1, se ha observado que existen en el ADN humano normal unas secuencias retrovíricas endógenas que contienen secuencias homólogas al genoma MSRV-1. La existencia de elementos retrovíricos endógenos (ERV) similares a MSRV-1 en parte o en la totalidad de su genoma, explica el hecho de que la expresión del retrovirus MSRV-1 en las células humanas pueda interactuar con secuencias endógenas cercanas. Estas interacciones se vuelven a encontrar en el caso de retrovirus endógenos patógenos y/o infecciosos (por ejemplo algunas cepas ecotrópicas del virus de la leucemia murina) , en el caso de retrovirus exógenos cuya secuencia nucleotídica puede encontrarse parcialmente o en su totalidad, en la forma de ERV, en el genoma del animal hospedante (por ejemplo virus exógeno del tumor mamario del ratón transmitido por la leche) . Estas interacciones consisten principalmente en (i) una transactivación o co-activación de ERV por el retrovirus replicativo, (ii) una encapsidación "ilegítima" de ARN similares de ERV, o ERVS (incluso de ARN celulares) que posean simplemente secuencias de encapsidación compatibles, en las partículas retrovíricas producidas por la expresión de la cepa replicativa, a veces transmisibles y a veces con una patogenicidad propia, y (iii) recombinaciones más o menos importantes entre los genomas co-encapsidados, en particular en las fases de transcripción inversa, que llevan a la formación de genomas híbridos, a veces transmisibles y a veces con una patogenicidad propia.

De esta manera, (i) se han encontrado diferentes secuencias relacionadas con MSRV-1 en las partículas víricas purificadas; (ii) el análisis molecular de diferentes regiones del genoma retrovírico MSRV-1 se debe realizar analizando sistemáticamente las secuencias co-encapsidadas, interferentes y/o recombinadas generadas por la infección y/o la expresión de MSRV-1, además, ciertos clones pueden tener partes de secuencias defectivas producidas por la replicación retrovírica y los errores de matriz y/o de transcripción de la transcriptasa inversa; (iii) las familias de secuencias relacionadas con una misma región geonómica retrovírica son los soportes de una detección diagnóstica global que se puede optimizar mediante la identificación de regiones invariables entre los clones expresados y mediante la identificación de tramas de lecturas responsables de la producción de polipéptidos antigénicos y/o patógenos que se pueden producir únicamente mediante una parte, incluso por uno solo, de los clones expresados y, en estas condiciones, el análisis sistemático de los clones expresados en una región de un genoma dado permite evaluar la frecuencia de variación y/o de recombinación del genoma MSRV-1 en esta región y definir las secuencias óptimas para las aplicaciones, en particular diagnósticas; (iv) la patología provocada por un retrovirus como el MSRV-1 puede ser un efecto directo de su expresión y de las proteínas o de los péptidos producidos por este hecho, pero también un efecto de la activación, de la encapsidación, de la recombinación de los genomas relacionados o heterólogos, y de las proteínas o de los péptidos producidos por estos hechos; de esta manera estos genomas asociados a la expresión y/o la infección por MSRV-1 son una parte integrante de la patogenicidad potencial de este virus y, por lo tanto, constituyen soportes de detección diagnóstica y dianas terapéuticas concretas. De la misma manera, cualquier agente que esté asociado a un cofactor o sea un cofactor de estas interacciones responsables de la patogenia en cuestión, tal como MSRV-2 o el factor gliotóxico descritos en la solicitud de patente publicada con el nº FR-2 716 198, puede participar en la elaboración de una estrategia global y muy eficaz de diagnóstico, de pronóstico, de seguimiento terapéutico y/o de terapéutica integrada de la SEP en particular, pero también de cualquier otra enfermedad asociada a los mismos agentes.

En este contexto, se ha descubierto paralelamente en otra enfermedad autoinmune, la poliartritis reumatoide (PR) , que se describió en la solicitud de patente francesa depositada con el nº 95 02960. Este descubrimiento demuestra que, aplicando enfoques metodológicos similares a los que fueron utilizados en los estudios del solicitante sobre la SEP, se ha podido identificar un retrovirus expresado en la PR que comparte las secuencias descritas para MSRV-1 en la SEP, y también la coexistencia de una secuencia asociada a MSRV-2 también descrita en la SEP. En lo que se refiere a MSRV-1, las secuencias detectadas de manera común a la SEP y la PR, se refieren a los genes pol y gag. En el estado actual de los conocimientos, se pueden asociar las secuencias gag y pol descritas a las cepas MSRV-1 expresadas en estas dos enfermedades.... [Seguir leyendo]

1. Polipéptido antigénico reconocido por sueros de pacientes infectados por un retrovirus cuyo genoma comprende una secuencia nucleotídica seleccionada de entre SEC ID nº 1 y SEC ID nº 89, y/o en los cuales se ha reactivado dicho retrovirus, cuya secuencia peptídica consiste en una secuencia seleccionada de entre SEC ID nº 39, SEC ID

nº 41 aSEC ID nº 44 y SEC ID nº 63.

2. Polipéptido según la reivindicación 1, caracterizado porque posee una secuencia peptídica que consiste en una

secuencia seleccionada de entre SEC ID nº 39 y SEC ID nº 63.

3. Secuencia nucleica que codifica para un polipéptido según la reivindicación 1 ó 2, seleccionada de entre SEC ID

nº 40, SEC ID nº 62, sus fragmentos y las secuencias complementarias de éstos.

4. Anticuerpo mono-o policlonal dirigido contra un agente patológico y/o infeccioso asociado a la esclerosis en placas, caracterizado porque se obtiene mediante reacción inmunológica de un organismo humano o animal, con un agente inmunógeno constituido por un polipéptido según la reivindicación 1 ó 2.

5. Agente reactivo de detección de un agente patológico y/o infeccioso asociado a la esclerosis en placas, o de una exposición a dicho agente, caracterizado porque comprende, a título de sustancia reactiva, un polipéptido según la reivindicación 1 ó 2, o un anticuerpo según la reivindicación 4.

6. Composición diagnóstica, profiláctica o terapéutica, que comprende un polipéptido según la reivindicación 1 ó 2,

o un anticuerpo según la reivindicación 4.

7. Composición inmunoterapéutica activa, en particular composición vacunal, según la reivindicación 6.

8. Procedimiento para detectar la presencia o la exposición a un agente patológico y/o infeccioso asociado a la esclerosis en placas, en una muestra biológica, caracterizado porque se pone en contacto dicha muestra con un polipéptido según la reivindicación 1 ó 2, o un anticuerpo según la reivindicación 4.

9. Dispositivo de detección de la presencia o de la exposición a un agente patológico y/o infeccioso asociado a la esclerosis en placas, en una muestra biológica, comprendiendo dicho dispositivo un agente reactivo según la reivindicación 5, que consiste en un polipéptido, soportado por un soporte sólido, inmunológicamente compatible con dicho agente reactivo, caracterizado porque comprende un medio de puesta en contacto de dicha muestra biológica con dicho agente reactivo, en condiciones que permiten una eventual reacción inmunológica, y unos medios de detección del complejo inmune formado con dicho agente reactivo.

10. Procedimiento de detección de anticuerpo dirigido contra un agente patológico y/o infeccioso asociado a la esclerosis en placas, en una muestra biológica, caracterizado porque se pone en contacto dicha muestra y un agente reactivo según la reivindicación 5, que consiste en un anticuerpo, en condiciones que permiten una eventual reacción inmunológica, y se detecta a continuación la presencia de un complejo inmune formado con dicho agente reactivo.

11. Procedimiento según la reivindicación 10, caracterizado porque la muestra es una muestra de sangre o de líquido cefalorraquídeo.

12. Utilización de una región inmunodominante seleccionada de entre SEC ID nº 41 a SEC ID nº 44, para preparar unos péptidos antigénicos reconocidos por sueros de pacientes infectados por un retrovirus cuyo genoma comprende una secuencia nucleotídica seleccionada de entre SEC ID nº 1 y SEC ID nº 89, y/o en los cuales se ha reactivado dicho retrovirus.

FIG. 31

FIG. 32

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