Péptidos sintéticos inmunorreactivos con los autoanticuerpos de la artritis reumatoide.
Un péptido sintético que consta de una secuencia aminoacídica seleccionada del grupo compuesto por SED ID NO:
1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:32 y SEQ ID NO:33.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/CA2008/002109.
Solicitante: SQI DIAGNOSTICS SYSTEMS INC.
Nacionalidad solicitante: Canadá.
Dirección: 36 METEOR DRIVE TORONTO, ON M9W 1A4 CANADA.
Inventor/es: LING, MINGFU, LEA,Peter.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C07K7/08 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 7/00 Péptidos con 5 a 20 aminoácidos en una secuencia totalmente determinada; Sus derivados. › con 12 a 20 aminoácidos.
- C07K7/50 C07K 7/00 […] › Péptidos cíclicos que contienen al menos un enlace peptídico anormal.
- C07K7/64 C07K 7/00 […] › Péptidos cíclicos que contienen solamente enlaces peptídicos normales.
- C40B40/10 C […] › C40 TECNOLOGIA COMBINATORIA. › C40B QUIMICA COMBINATORIA; BIBLIOTECAS, p. ej. QUIMIOTECAS (bibliotecas combinatorias in silico de ácidos nucleicos, proteínas o péptidos G16B 35/00; química combinatoria in silico G16C 20/60). › C40B 40/00 Bibliotecas per se , p. ej. arrays, mezclas. › Bibliotecas que contienen péptidos o polipéptidos, o sus derivados.
- G01N33/543 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › con un soporte insoluble para la inmovilización de compuestos inmunoquímicos.
- G01N33/564 G01N 33/00 […] › para complejos inmunológicos preexistentes o enfermedades autoinmunes.
PDF original: ES-2390394_T3.pdf
Fragmento de la descripción:
Péptidos sintéticos inmunorreactivos con los autoanticuerpos de la artritis reumatoide
RESUMEN DE LA INVENCIÓN
Las realizaciones de la presente invención se refieren a péptidos sintéticos que son reconocidos preferentemente por autoanticuerpos, específicamente por anticuerpos autoinmunitarios, para su detección en pacientes que padecen o presentan riesgo de padecer artritis reumatoide, lo que permite una mayor sensibilidad y especificidad en la detección de estos autoanticuerpos en pacientes presintomáticos así como en pacientes que muestran síntomas de artritis reumatoide. El documento WO-A-9822503 muestra péptidos citrulinados para la misma finalidad, pero de diferente estructura. Los péptidos de la presente invención tienen secuencias únicas que no se encuentran en la naturaleza y que comprenden una serie de restos de citrulina en posiciones seleccionadas a lo largo de los péptidos y tienen además un número óptimo de restos entre los restos de citrulina. El ensamblaje y la secuencia de restos aminoacídicos seleccionados confieren una carga y una hidrofobicidad óptimas para aumentar la reactividad con los anticuerpos autoinmunitarios. Además, los péptidos respectivos pueden estar ciclados. Adicionalmente, tales péptidos sintéticos ciclados pueden multimerizarse en serie como monómeros, dímeros, trímeros y multímeros. Sorprendentemente, la combinación del espaciamiento de restos de citrulina en secuencias peptídicas sintéticas diseñadas, miméticas de antígenos, con mezclas de multímeros de acuerdo con las realizaciones de la invención ha demostrado ser muy adecuada para la mejora del diagnóstico de la artritis reumatoide. Preferentemente, estos péptidos sintéticos tienen las fórmulas siguientes: SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:32 y SEQ ID NO:33. En otras realizaciones, los péptidos pueden estar ciclados.
De acuerdo con otro aspecto de la invención, se proporciona una composición para la detección de anticuerpos autoinmunitarios expresados por pacientes que presentan riesgo de padecer o padecen artritis reumatoide, en que la composición comprende al menos un péptido que consta de una secuencia aminoacídica seleccionada del grupo compuesto por SED ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:32 y SEQ ID NO:33 y combinaciones de estas. En otras realizaciones, los péptidos de la composición pueden estar ciclados. En otras realizaciones, los péptidos pueden estar ciclados en serie como monómeros, dímeros, trímeros y multímeros.
De acuerdo con otro aspecto de la invención, se proporciona una composición que comprende al menos dos péptidos que constan de una secuencia aminoacídica seleccionada del grupo compuesto por SED ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:32 y SEQ ID NO:33, en que al menos dos de dichos, al menos dos péptidos están ciclados. En otras realizaciones, los péptidos pueden estar ciclados en serie como monómeros, dímeros, trímeros y multímeros.
De acuerdo con otro aspecto más de la invención, se proporciona un procedimiento para la detección de anticuerpos autoinmunitarios expresados por pacientes que presentan riesgo de padecer o padecen artritis reumatoide, que comprende las etapas de la puesta en contacto de un péptido sintético de la presente invención con una muestra de plasma o suero de un paciente y la detección de la presencia o ausencia de un complejo antígenoanticuerpo, en que la presencia del complejo antígeno-anticuerpo indica la presencia de anticuerpos autoinmunitarios y en que la presencia de anticuerpos autoinmunitarios indica que dicho paciente presenta riesgo de padecer o padece artritis reumatoide.
De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, se proporciona un procedimiento para el diagnóstico de la artritis reumatoide en formato de micromatriz que comprende las etapas de: preparación de una secuencia peptídica sintética de la presente invención; suministro de una muestra biológica para el diagnóstico de la artritis reumatoide; puesta en contacto de dicha muestra biológica con dicho antígeno artificial en condiciones que permitan la formación de un complejo antígeno-anticuerpo con los autoanticuerpos específicos de la artritis reumatoide que puedan estar presentes en dicha muestra biológica; y detección de cualquier complejo antígenoanticuerpo que pueda formarse.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
La figura 1 es una representación de nueve secuencias peptídicas ejemplares de acuerdo con las realizaciones de la presente invención que ilustra una serie de restos conjugados para mostrar el número y las posiciones específicas de las citrulinas en las secuencias y el espaciamiento ejemplar entre los restos de citrulina.
La figura 2 es un diagrama de barras que muestra la intensidad de la señal para la presencia de un complejo péptido sintético-autoanticuerpo para seis de los péptidos sintéticos ejemplares de la presente invención en muestras de suero de pacientes con artritis reumatoide y sin artritis reumatoide.
La figura 3 es un diagrama que muestra que la intensidad de la señal es directamente proporcional a la presencia del complejo péptido sintético-anticuerpo según se detecta en una serie de diluciones de un antígeno múltiple.
La figura 4 es un diagrama de barras que muestra una comparación de la intensidad de la señal que demuestra la presencia del complejo péptido sintético-anticuerpo en muestras de suero de pacientes con artritis reumatoide y sin artritis reumatoide.
La figura 5 es una tabla que representa péptidos ejemplares de la presente invención.
DESCRIPCIÓN DE LAS REALIZACIONES PREFERIDAS
La artritis reumatoide es una enfermedad autoinmunitaria sistémica y está considerada como el más frecuente de los reumatismos inflamatorios crónicos. El suero de los pacientes afectados contiene autoanticuerpos, parte de los cuales son específicos y constituyen un marcador de la enfermedad, lo que permite su diagnóstico incluso en etapas tempranas. Se ha publicado una amplia gama de procedimientos, en una búsqueda para encontrar e identificar antígenos reconocidos por estos anticuerpos y preparaciones de antígenos purificadas que puedan usarse en técnicas de diagnóstico inmunológico convencionales.
Las interacciones proteínicas analito-anticuerpo desempeñan un papel esencial en el control de los sucesos moleculares implicados en la transducción de señales. Los perfiles superficiales comparativamente extensos en estas superficies de contacto proteína-proteína impiden espacialmente el diseño y la accesibilidad de los sitios interactivos en moléculas pequeñas. Los restos energéticos que modulan activamente las superficies de contacto proteína-proteína usan regiones relativamente pequeñas de la superficie proteínica. Las moléculas miméticas de epítopos de proteínas (PEM) correctamente seleccionadas que imitan epítopos superficiales proporcionan un medio de imitar la actividad biológica de una proteína completa en sitios moleculares sintéticos relativamente pequeños y espacialmente adaptados de reconocimiento macromolecular tridimensional. El diseño de péptidos miméticos comienza con estructuras tridimensionales de péptidos y los complejos miméticos conjugados que forman, aplicando la información sobre el tipo y la posición de estructuras matriciales de restos. Esto representa un área de la química orgánica en la que la conformación matricial y los mecanismos... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Un péptido sintético que consta de una secuencia aminoacídica seleccionada del grupo compuesto por SED ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:32 y SEQ ID NO:33.
2. El péptido sintético de la reivindicación 1, en que dicho péptido está ciclado.
3. Una composición que comprende
a) un vehículo y un péptido que consta de una secuencia aminoacídica seleccionada del grupo compuesto por SED ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:32 y SEQ ID NO:33 y combinaciones de estas, o
b) al menos dos péptidos que constan de una secuencia aminoacídica seleccionada del grupo compuesto por SED ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:32 y SEQ ID NO:33, en que dichos, al menos dos péptidos están ciclados.
4. La composición de la reivindicación 3, en que la composición de la alternativa a) comprende los péptidos que constan de las secuencias aminoacídicas SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:28 y SEQ ID NO:30.
5. La composición de la reivindicación 4, en que los péptidos están en una relación ponderal de aproximadamente 1:1:3:3:3.
6. La composición de la reivindicación 3, en que la composición de la alternativa a) comprende un dímero, trímero o multímero de cualquiera de las secuencias aminoacídicas definidas en la reivindicación 1.
7. La composición de la reivindicación 3, en que dicho péptido de la alternativa a) está ciclado.
8. Un procedimiento para la detección de anticuerpos autoinmunitarios expresados por un paciente que presenta riesgo de padecer o padece artritis reumatoide que comprende las etapas de la puesta en contacto de un péptido sintético de la reivindicación 1 con una muestra de un paciente y la detección de la presencia de un complejo antígeno-anticuerpo, en que la presencia de dicho complejo antígeno-anticuerpo indica la presencia de anticuerpos autoinmunitarios.
9. El procedimiento de la reivindicación 8, en que la presencia de dicho complejo antígeno-anticuerpo indica que dicho paciente presenta riesgo de padecer o padece artritis reumatoide.
10. El procedimiento de la reivindicación 8, en que dicha muestra de un paciente se selecciona entre plasma y suero.
11. El procedimiento de la reivindicación 8, que comprende además la etapa de la cuantificación de la inmunorreactividad del péptido sintético con los anticuerpos autoinmunitarios.
12. El procedimiento de la reivindicación 11, en que se cuantifican al menos tres inmunoglobulinas.
13. El procedimiento de la reivindicación 12, en que dichas, al menos tres inmunoglobulinas son inmunoglobulina IgG, inmunoglobulina IgA e inmunoglobulina IgM.
14. El procedimiento de la reivindicación 8, en que la puesta en contacto de un péptido sintético de la reivindicación 1 con una muestra de un paciente se caracteriza porque se mezcla una composición de la alternativa a) de la reivindicación 3 o de la reivindicación 4 con la muestra del paciente.
15. Uso del péptido sintético de la reivindicación 1 para el diagnóstico in vitro de la artritis reumatoide en un paciente.
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