Una fenilaminopiridopirimidina de fórmula I:**Fórmula**

donde los símbolos tienen los siguientes significados:

Serie A Serie B

X es CH X es N

n≥1 ó 2 n≥1

R es H o CH3 R es H o CH3

o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

Nuevos derivados de fenilaminopirimidina como inhibidores de la BCR-ABL kinasa

La presente invención se relaciona con nuevos intermediarios útiles para la preparación de nuevos derivados de fenilaminopirimidina, con nuevos derivados de fenilaminopirimidina, con una composición farmacéutica que contiene los nuevos derivados de fenilaminopirimidina y con procedimientos para su preparación. La invención se relaciona en particular con nuevos derivados de fenilpirimidinamina de la fórmula general I dada a continuación:

donde los símbolos tienen los siguientes significados:

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

La invención también proporciona las sales farmacéuticamente aceptables de la fórmula I como se ha definido anteriormente. Además, la presente invención proporciona también un procedimiento para la preparación de los nuevos compuestos antes mencionados y sus sales farmacéuticamente aceptables. La invención también

proporciona una composición farmacéutica que contiene los nuevos compuestos de fórmula general I junto con excipientes farmacéuticamente aceptables habitualmente empleados y un procedimiento para su preparación.

Los nuevos compuestos de fórmula I pueden ser utilizados en la terapia de la Leucemia Mieloide Crónica (LMC) . Como los valores de la CI50 de estas moléculas se hallan en el rango de 0, 1 a 10, 0 nM, estos nuevos compuestos 25 son potencialmente útiles para el tratamiento de la LMC.

Antecedentes de la invención

Se conocen derivados de fenilpirimidinamina por las patentes WO 9509851, WO 9509853, EP 0.588.762, WO 30 9509847, WO 9903854 y EP-B-0.564.409 como compuestos efectivos para el tratamiento de tumores.

Por ejemplo, en WO 9509851 se describen compuestos de la fórmula general II:

donde R1 es un radical cíclico substituido, estando unido el radical cíclico a un átomo de carbono del anillo en cada caso y siendo seleccionado entre fenilo, piridilo, pirazinilo, tiazolilo, pirimidinilo, piridazinilo e imidazolilo, y siendo seleccionados los substituyentes del radical cíclico antes mencionado entre uno o más grupos halógeno, ciano,

carbamoílo, -C (=O) -OR3, -C (=O) -R4, -SO2-N (R5) -, -N (R7) -R8, -OR9 y alquilo inferior substituido con flúor, donde R3, R4, R5, R6, R7, R8 y R9 son cada uno, independientemente de los otros, hidrógeno o alquilo inferior no substituido o substituido con mono-o dialquilamino inferior, y R2 es seleccionado entre halógeno, ciano, carbamoílo, -C (=O) -OR10, -C (=O) -R11, -SO2-N (R12) -R13, -N (R14) -R15, -OR16 y alquilo inferior substituido con flúor, donde R10, R11, R12, R13, R14, R15 y R16 son cada uno, independientemente de

45 los otros, hidrógeno o alquilo inferior no substituido o substituido con mono-o dialquilamino inferior,

o una sal de dicho compuesto que tiene al menos un grupo formador de sal. En WO 9509853, se describen compuestos derivados de N-fenil-2-pirimidinamina de fórmula general III:

Un derivado de N-fenil-2-pirimidinamina de fórmula III donde R0 es hidrógeno, halógeno, alcoxi inferior o alquilo inferior; R1 es

a) N- (aminoalquil inferior) carbamoílo, b) N- (hidroxialquil inferior) carbamoílo, c) hidrazino, d) ciclohexilamino no substituido o substituido con amino,

e) piperazinilo no substituido o substituido con aminoalquilo inferior, f) morfolinilo o g) alquilamino inferior substituido con morfolinilo, hidroxialquilamino inferior, ciano, imidazolilo, guanidilo, amino, alcanoilamino inferior, alquilamino inferior-carbonilamino, amidino, dialquilamino inferiorciclohexilo, carboxi, alcoxicarbonilo inferior, carbamoílo, N-hidroxicarbamoílo, hidroxi, alcoxi inferior, dihidroxifosforiloxi, piperazinilo, alcanoílo inferior-piperazinilo, formilpiperazinilo o prolilamido, o con un radical de fórmula H2N-CH (R) -C (=O) -NH-donde R es hidrógeno, alquilo C1-C4, bencilo, hidroximetilo, hidroxietilo, mercaptometilo, 2-metiltioetilo, indol-3-ilmetilo, fenilmetilo, 4-hidroxifenilmetilo, carbamoilmetilo, 2-carbamoiletilo, carboximetilo, 2-carboxietilo, 4-aminobutilo o 3-guanidilpropilo, o R es 1H-imidazol-4-ilmetilo, y

R2 es alquilo C1-C6, alcoxi C1-C3, cloro, bromo, yodo, trifluorometilo, hidroxi, fenilo, amino, mono (alquil C1-C3) amino, di (alquil C1-C3) amino, alcanoílo C2-C4, propeniloxi, carboxi, carboximetoxi, etoxicarbonilmetoxi, sulfanilamido, N, Ndi (alquil C1-C3) sulfanilamido, N-metilpiperazinilo, piperidinilo, 1H-imidazol-1-ilo, 1H-triazol-1-ilo, 1H-bencimidazol-2ilo, 1-naftilo, ciclopentilo, 3, 4-dimetilbencilo o un radical de una de las fórmulas:

- CO2R3, -NH-C (=O) R3, -N (R3) -C (=O) R4, -O- (CH2) n-N (R3) R4, -C (.dbd.O) -NH- (CH2) n-R4@a, -C (=O) -NH (CH2) n-N (R3) R4, -CH (CH3) -NH-CHO, -C (CH3) .dbd.N-OH, -C (CH3) =N-O-CH3, -CH (CH3) -NH2 o-NH-CH2C (=O) -N (R3) R4, donde R3 y R4 son cada uno independientemente del otro alquilo C1-C3;R4@a es hidroxi, amino o imidazolilo; X es oxígeno o azufre; m es 1, 2 ó 3; n es 2 ó 3; R5 es hidrógeno, alquilo C1-C3, alcoxi

C1-C3, cloro, bromo, yodo o trifluorometilo; R6 es 1H-imidazol-1-ilo o morfolinilo, y R7 es alquilo C1-C3 o es fenilo no substituido o monosubstituido con alquilo C1-C3, halógeno o trifluorometilo, o una sal del mismo. Un derivado de N-fenil-2-pirimidinamina de fórmula III donde R0 es hidrógeno, halógeno, alcoxi inferior o alquilo inferior;

R1 es

a) N- (aminoalquil inferior) carbamoílo, b) N- (hidroxialquil inferior) carbamoílo, c) hidrazino,

45 d) ciclohexilamino no substituido o substituido con amino, e) piperazinilo no substituido o substituido con aminoalquilo inferior, f) morfolinilo, o g) alquilamino inferior substituido con morfolinilo, hidroxialquilamino inferior, ciano, imidazolilo, guanidilo, amino, alcanoilamino inferior, alquilamino inferior-carbonilamino, amidino, dialquilamino inferiorciclohexilo, carboxi, alcoxicarbonilo inferior, carbamoílo, N-hidroxicarbamoílo, hidroxi, alcoxi inferior, dihidroxifosforiloxi, piperazinilo, alcanoílo inferior-piperazinilo, formilpiperazinilo o prolilamido, o con un radical de fórmula H2N-CH (R) -C (=O) -NH-donde R es hidrógeno, alquilo C1-C4, bencilo, hidroximetilo, 1hidroxietilo, mercaptometilo, 2-metiltioetilo, indol-3-ilmetilo, fenilmetilo, 4-hidroxifenilmetilo, carbamoilmetilo, 2-carbamoiletilo, carboximetilo, 2-carboxietilo, 4-aminobutilo o 3-guanidilpropilo, o R es

55 1H-imidazol-4-ilmetilo, y

R2 es alquilo C1-C6, alcoxi C1-C3, cloro, bromo, yodo, trifluorometilo, hidroxi, fenilo, amino, mono (alquil C1-C3) amino, di (alquil C1-C3) amino, alcanoílo C2-C4, propeniloxi, carboxi, carboximetoxi, etoxicarbonilmetoxi, sulfanilamido, N, Ndi (alquil C1-C3) sulfanilamido, N-metilpiperazinilo, piperidinilo, 1H-imidazol-1-ilo, 1H-triazol-1-ilo, 1H-bencimidazol-2-ilo, 1-naftilo, ciclopentilo, 3, 4-dimetilbencilo o un radical de una de las fórmulas:

- CO2R3, -NH-C (=O) R3, -N (R3) -C (=O) R4, -O- (CH2) n-N (R3) R4, -C (=O) -NH- (CH2) n-R4@a, -C (=O) -NH- (CH2) n

N (R3) R4, -CH (CH3) -NH-CHO, -C (CH3) =N-OH, -C (CH3) =N-O-CH3, -CH (CH3) -NH2 o-NH-CH2-C (=O) N (R3) R4, donde R3 y R4 son cada uno independientemente del otro alquilo C1-C3;R4@a es hidroxi, amino

o imidazolilo; X es oxígeno o azufre; m es 1, 2 ó 3; n es 2 ó 3; R5 es hidrógeno, alquilo C1-C3, alcoxi C1-C3, cloro, bromo, yodo o trifluorometilo; R6 es 1H-imidazol-1-ilo o morfolinilo, y R7 es alquilo C1-C3 o fenilo no substituido o monosubstituido con alquilo C1-C3, halógeno o trifluorometilo,

o una sal del mismo.

En EP 0.588.762 y EE.UU. 5.516.775, se describen compuestos de fórmula general IV:

donde R1 es hidrógeno o alquilo C1-C3;R2 es hidrógeno o alquilo C1-C3;R3 es 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 2-metil3-piridilo, 4-metil-3-piridilo, 2-furilo, 5-metil-2-furilo, 2, 5-dimetil-3-furilo, 2-tienilo, 3-tienilo, 5-metil-2-tienilo, 2fenotiazinilo, 4-pirazinilo, 2-benzofurilo, N-óxido-2-piridilo, N-óxido-3-piridilo, N-óxido-4-piridilo, 1H-indol-2-ilo, 1H20 indol-3-ilo, 1-metil-1H-pirrol-2-ilo, 4-quinolinilo, 1-metilpiridinio-4-ilyoduro, dimetilaminofenilo o N-acetil-Nmetilaminofenilo; R4 es hidrógeno, alquilo C1-C3, -CO-CO-O-C2H5 o N, N-dimetilaminoetilo; al menos uno de R5, R6, R7 y R8 es alquilo C1-C6, alcoxi C1-C3,... [Seguir leyendo]

1. Una fenilaminopiridopirimidina de fórmula I:

donde los símbolos tienen los siguientes significados:

o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

2. El compuesto de la reivindicación 1, donde X es N, n=1 y R es H o CH3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

15 3. El compuesto de la reivindicación 2, donde el grupo trifluorometilo se une al anillo aromático en la posición 3.

4. El compuesto de la reivindicación 1, donde X es CH, n=1 ó 2 y R es H o CH3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

20 5. El compuesto de la reivindicación 4, donde:

cuando n=1, el grupo trifluorometilo se une al anillo aromático en la posición 3 y cuando n=2, el primer grupo trifluorometilo se une al anillo aromático en la posición 3 y el segundo grupo trifluorometilo se une al anillo aromático en la posición 5.

6. El compuesto de la reivindicación 5, donde R es CH3.

7. El compuesto de la reivindicación 1, donde el compuesto es:

(3-trifluorometil) -N-[4-metil-3- (4-piridin-3-ilpirimidin-2-ilamino) fenil]benzamida, (3, 5-bistrifluorometil) -N-[4-metil-3- (4-piridin-3-ilpirimidin-2-ilamino) fenil]benzamida, (2-trifluorometil) -N-[4-metil-3- (4-piridin-3-ilpirimidin-2-ilamino) fenil]benzamida, (6-trifluorometil) -N-[4-metil-3- (4-piridin-3-ilpirimidin-2-ilamino) fenil]nicotinamida, (5-trifluorometil) -N-[4-metil-3- (4-piridin-3-ilpirimidin-2-ilamino) fenil]nicotinamida o

una sal de las mismas farmacéuticamente aceptable.

8. El compuesto de la reivindicación 1, donde el compuesto es (3, 5-bistrifluorometil) -N-[4-metil-3- (4-piridin-3ilpirimidin-2-ilamino) fenil]benzamida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

9. Un compuesto de Fórmula XV:

donde los símbolos tienen los siguientes significados: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

10. El compuesto de la reivindicación 9:

donde R es metilo, X es CH y n=2; donde R es metilo, X es CH y n=1; donde R es metilo, X es N y n=1.

11. El compuesto de la reivindicación 9, donde el compuesto es:

(3, 5-bistrifluorometil) -N- (3-guanidino-4-metilfenil) benzamida, (3-trifluorometil) -N- (3-guanidino-4-metilfenil) -4-benzamida, (2-trifluorometil) -N- (3-guanidino-4-metilfenil) benzamida,

(6-trifluorometil) -N- (3-guanidino-4-metilfenil) nicotinamida, (5-trifluorometil) -N- (3-guanidino-4-metilfenil) nicotinamida o una sal de las mismas farmacéuticamente aceptable.

12. El compuesto de la reivindicación 9, donde el compuesto es (3, 5-bistrifluorometil) -N- (3-guanidino-420 metilfenil) benzamida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

13. Un procedimiento de preparación de una sal de una guanidinotrifluorometilaroilamida de fórmula XV:

donde los símbolos tienen los siguientes significados:

cuyo método consiste en: condensar un compuesto de fórmula XIV:

donde X, n y R son como antes,

con cianamida (CNNH2) a una temperatura de 60 a 95°C en presencia de un solvente polar y de un ácido inorgánico, para obtener las sales intermediarias de una guanidinotrifluorometilaroilamida de fórmula XV.

14. El procedimiento de la reivindicación 13, donde el solvente polar para condensar el compuesto de fórmula XIV con cianamida es seleccionado entre n-propanol, isopropanol, etanol, n-butanol o una mezcla de los mismos.

15. El procedimiento de la reivindicación 14, donde el solvente polar para condensar el compuesto de fórmula XIV con cianamida es n-butanol.

16. Un procedimiento de preparación de una fenilaminopiridopirimidina de fórmula I:

donde los símbolos tienen los siguientes significados:

o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, cuyo método consiste en:

condensar una N- (5-amino-2-metilfenil) -4- (3-piridil) -2-pirimidinamina de fórmula XVII:

con un cloruro de trifluorometilaroílo de fórmula XII:

para obtener el compuesto de fórmula I. 20

17. Una composición farmacéutica para el tratamiento de la leucemia, cuya composición incluye:

un soporte farmacéuticamente aceptable y un compuesto de fórmula I: 25

donde los símbolos tienen los siguientes significados:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

18. La composición farmacéutica de la reivindicación 17, donde:

el soporte farmacéuticamente aceptable es adecuado para administración tópica, parenteral o enteral, o el soporte farmacéuticamente aceptable es inorgánico, orgánico, sólido, líquido o una combinación de éstos.

19. La composición farmacéutica de la reivindicación 17, que además incluye un excipiente, un adyuvante, un diluyente, un ligante, un agente saborizante, un potenciador del sabor, un colorante farmacéuticamente aceptable o una mezcla de éstos.

20. La composición farmacéutica de la reivindicación 19, donde el diluyente incluye celulosa microcristalina, celulosa

microfina, lactosa, almidón, almidón pregelatinizado, carbonato de calcio, sulfato de calcio, azúcar, dextrato, dextrina, dextrosa, fosfato de calcio dibásico dihidrato, fosfato de calcio tribásico, caolín, carbonato de magnesio, óxido de magnesio, maltodextrina, manitol, polimetacrilato, cloruro de potasio, celulosa en polvo, cloruro de sodio, sorbitol, talco o una mezcla de éstos.

21. La composición farmacéutica de la reivindicación 19, donde el ligante incluye acacia, ácido algínico, carbómero, carboximetilcelulosa sódica, dextrina, etilcelulosa, gelatina, goma guar, aceite vegetal hidrogenado, hidroxietilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, glucosa líquida, silicato de magnesio y de aluminio, maltodextrina, metilcelulosa, polimetacrilato, povidona (v.g. KOLLIDON® o PLASDONE®) , almidón pregelatinizado, alginato de sodio, almidón o una mezcla de éstos.

22. La composición farmacéutica de la reivindicación 19, donde el agente saborizante o el potenciador del sabor incluyen maltol, vainillina, etilvainillina, mentol, ácido cítrico, ácido fumárico, etilmaltol, ácido tartárico o una mezcla de éstos.

23. La composición farmacéutica de la reivindicación 19, que incluye un compuesto de fórmula I, polivinilpirrolidona, lactosa, talco, crospovidona, estearato de magnesio y laurilsulfato de sodio.

24. La composición farmacéutica de la reivindicación 17, donde la leucemia es la leucemia mieloide crónica o la

leucemia linfoblástica aguda. 35

25. La composición farmacéutica de la reivindicación 17, donde la leucemia es la leucemia mieloide crónica.

26. El compuesto de la reivindicación 1, donde el compuesto es:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

27. La composición farmacéutica de la reivindicación 17, donde el compuesto es:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

28. Una composición farmacéutica para el tratamiento de un cáncer o una enfermedad tumoral positiva para bcr-abl, cuya composición incluye:

un soporte farmacéuticamente aceptable y un compuesto de fórmula I: 10

donde los símbolos tienen los siguientes significados:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Fig. 1

% Crecimiento % Inhibición

CI50 = 8 nM

Concentración de AN-015 (nM) [Ejemplo 1, Etapa (IV) ]

Fig. 1. Efecto del análogo de Imatinib (AN-015) sobre la proliferación de células D32p210.

Se cultivaron células D32p210 en medio RPMI suplementado con un 10% de FBS en aire humidificado con un 5% de CO2 y a 37ºC. Para el ensayo MTT, se sembraron 5 x 103 células/pocillo en una placa de 96 pocillos y se añadió la concentración necesaria de fármaco (AN015) , que variaba de 1 nM a 10 0M, y se incubó durante 24 h. Se valoró la proliferación celular incubando las células con 20 0l de MTT (stock de 5 mg/ml) durante 3 h más, seguido de adición de tampón de lisis para disolver los cristales de formazán. Después de incubar durante la noche, se registró la absorbancia usando un lector de ELISA a una longitud de onda doble d.

57. 630 nm. Después de una serie de tales experimentos, se seleccionó un rango más estrecho de concentraciones (5 nM a 10 nM) y se repitió el ensayo MTT para determinar el valor de la CI50.

Fig. 2

% Crecimiento % Inhibición

CI50 = 700 pM

Concentración de AN019 (picomoles) [Ejemplo 3, Etapa (IV) ]

Fig. 2. Efecto del análogo de Imatinib (AN-019) sobre la proliferación de células D32p210.

Se cultivaron células D32p210 en medio RPMI suplementado con un 10% de FBS en aire humidificado con un 5% de CO2 y a 37ºC. Para el ensayo MTT, se sembraron 5 x 103 células/pocillo en una placa de 96 pocillos y se añadió la concentración necesaria de fármaco (AN019) , que variaba de 100 pM a 10 0M, y se incubó durante 24 h. Se valoró la proliferación celular incubando las células con 20 0l de MTT (5 mg/ml de stock) durante 3 h más, seguido de adición de tampón de lisis para disolver los cristales de formazán. Después de incubar durante la noche, se registró la absorbancia utilizando un lector ELISA a una longitud de onda doble d.

57. 630 nm. Tras una serie de tales experimentos, se seleccionó un rango más estrecho de concentraciones (de 500 pM a 1 nM) y se repitió el ensayo MTT para determinar el valor de la CI50.

Fig. 3

Fig. 3. Electroforesis en gel de agarosa de ADN extraído de células D32p210 tratadas con AN-015* y AN-019**.

Después del tratamiento, se lisaron las células y se extrajo el ADN celular total y se sometió a electroforesis en un gel de agarosa al 1% que contenía 0, 05 mg/ml de bromuro de etidio a 5 V/cm. Se fotografiaron entonces los geles bajo iluminación UV. Calle 1: células control; calle 2: células tratadas con AN-015 10 nM; calle 3: células tratadas con AN-019 700 pM.

* AN-015 = Ejemplo 1, etapa (iv) . ** AN-019 = Ejemplo 3, etapa (iv) .

Fig. 4

Cuentas

Cuentas Cuentas

Fig. 4. Análisis citométrico de flujo de las células D32p210 control y de las tratadas con AN-015 y con AN-019.

Se fijaron las células expuestas a 10 nM de AN-015 y 700 pM de AN-019 durante 24 h y se tiñeron con yoduro de propidio, y se cuantificó el contenido en ADN por FACS. Se expresa el número de células hipodiploides (fase sub-G0/G1) como porcentaje del número total de células. (A) Células control, (B) AN-015 10 nM y (C) AN-019 700 pM.

AN-015 = Ejemplo 1, etapa (iv) . AN-019 = Ejemplo 3, etapa (iv) .

Fig. 5

Fig. 5. Estudios microscópicos de contraste de fases de células D32p210 tratadas con AN-015 (10 nM) y AN-019 (700 pM) .

Se fotografiaron las células bajo microscopía de contraste de fases (400 X aumentos) . Las flechas indican una célula apoptótica típica con cuerpos apoptóticos. (A) Células control, (B) AN-015 10 nM y (C) AN-019 700 pM.

AN-015 = Ejemplo 1, etapa (iv) . AN-019 = Ejemplo 3, etapa (iv) .

Fig. 6

AN-015 = Ejemplo 1, etapa (iv) . AN-019 = Ejemplo 3, etapa (iv) .