Nuevo péptido que penetra en las células.

Un peptido

(I) que consiste en la secuencia de aminoacidos mostrada mas abajo:



B-X-Z-X-Arg-Z-Tyr-J-X-01-X-Arg-02-X-X o X-X-01-Arg-X-02-X-J-Tyr-Z-Arg-X-Z-X-B,

en el que (i) B es arginina o lisina, (ii) al menos uno de 01 u 02es arginina, (iii) Z es un aminoacido hidrófobo, (iv) J es serina o alanina, y (v) X es un aminoacido elegido aleatoriamente; o

(II) que tiene uno o varios aminoacidos elegidos aleatoriamente en el extremo C-terminal y/o el extremo N-terminal de la secuencia de aminoacidos definida en (I), a condición de que sea capaz de transportar proteinas dentro de las celulas y/o dentro de los nucleos.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/JP2006/321465.

Solicitante: MITSUBISHI TANABE PHARMA CORPORATION.

Nacionalidad solicitante: Japón.

Dirección: 2-6-18, Kitahama, Chuo-ku Osaka-shi, Osaka 541-8505 JAPON.

Inventor/es: KAMIDE, KAEKO, UNO, SHUSEI, NAKAKUBO,Hiroshi.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A61K45/00 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › Preparaciones medicinales que contienen ingredientes activos no previstos en los grupos A61K 31/00 - A61K 41/00.
  • A61K47/48
  • A61P37/08 A61 […] › A61P ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS O DE PREPARACIONES MEDICINALES.A61P 37/00 Medicamentos para el tratamiento de problemas inmunológicos o alérgicos. › Agentes antialérgicos (agentes antiasmáticos A61P 11/06; antialérgicos oftálmicos A61P 27/14).
  • C07K7/08 QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 7/00 Péptidos con 5 a 20 aminoácidos en una secuencia totalmente determinada; Sus derivados. › con 12 a 20 aminoácidos.
  • C12N1/15 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 1/00 Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que los contienen (preparaciones de uso médico que contienen material de protozoos, bacterias o virus A61K 35/66, de algas A61K 36/02, de hongos A61K 36/06; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos bacterianos, p. ej. vacunas bacterianas, A61K 39/00 ); Procesos de cultivo o conservación de microorganismos, o de composiciones que los contienen; Procesos de preparación o aislamiento de una composición que contiene un microorganismo; Sus medios de cultivo. › modificados por la introducción de material genético extraño.
  • C12N1/19 C12N 1/00 […] › modificados por la introducción de material genético extraño.
  • C12N1/21 C12N 1/00 […] › modificados por la introducción de material genético extraño.
  • C12N15/09 C12N […] › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Tecnología del ADN recombinante.
  • C12N5/10 C12N […] › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células modificadas por introducción de material genético extraño, p. ej. células transformadas por virus.

PDF original: ES-2377660_T3.pdf

 


Fragmento de la descripción:

Nuevo peptido que penetra en las celulas.

Campo tecnico

La presente invención se refiere a un nuevo peptido que penetra en las celulas y a un producto farmaceutico que contiene al peptido.

Antecedentes de la invencion Los acidos nucleicos, en su uso terapeutico o diagn6stico, no penetran por la membrana celular, a diferencia de las proteinas normales, aunque recientemente se ha encontrado que hay peptidos que transportan proteinas y acidos nucleicos dentro de las celulas y nucleos en los organismos vivos (denominados de aqui en adelante en este documento "Proteinas TAT") (del documento no de patente 1 al documento no de patente 3) . Ademas, se ha encontrado que una proteina de fusión de un peptido que consiste en 11 aminoacidos particulares de las proteinas TAT con otra proteina penetra por la membrana celular; a dichas regiones, esenciales para el traspaso de la membrana celular, es decir, los peptidos que penetran en las celulas, se las denominan PTD (Protein Transduction Domains) (documento no de patente 4) .

Hasta ahora, se han desarrollado metodos para transportar proteinas y acidos nucleicos dentro de las celulas por medio de varios peptidos que penetran en las celulas. Especificamente, se ha propuesto un metodo que utiliza un polipeptido parcial particular de la proteina TAT del VIH-1 (documento de patente 1) .

Aunque existen peptidos naturales que penetran en las celulas que se usan convencionalmente, se plantea el problema de su baja eficacia de desplazamiento. Por esta raz6n, ha habido una demanda en el desarrollo de peptidos con una alta eficacia en el transporte.

Documento de patente 1: JP-A-HEI-10-33186

Documento de no patente 1: Green, M. et al. Cell 55, 1179-1188 (1988)

Documento de no patente 2: Frankel, A.D. et al. Cell 55, 1189-1193 (1988)

Documento de no patente 3: Fawell, S. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 91, 664-668 (1994)

Documento no de patente 4: Nagahra, H. et al. Nature Medicine 4, 1449-1452 (1998)

La publicación de Golovkina et al., Journal of Virology, volumen 72, pps 3066-3071 (1998) describe un receptor de proteina de membrana para la unión del virus del tumor mamario de rat6n (MMTV) . La secuencia de la proteina del receptor de MMTV, segun se representa en la Fig. 3, muestra en un sobrelapamiento parcial la siguiente secuencia: RELERVYSQRSR. La publicación de Kokura et al., Journal of Biological Chemistr y , volumen 278, pps 20133-20139 (2003) describe un "proteina de unión de Ski C184M" intracelular (citos6lica) . La misma secuencia de sobrelapamiento que se menciona con relación a la publicación de Golovkina, tambien aparece en la secuencia de C184M segun se representa en la Fig., 1. Ademas, la publicación de Royo et al., Journal of Biological Chemistr y , volumen 271, pps 21021-21019 (1996) muestra secuencias de aminoacidos de la lipoxigenasa de patata (vease la Fig. 1) .

Descripcion de la invencion

Problemas que soluciona la invención

Un objeto de la presente invención es proporcionar un nuevo peptido que penetra en las celulas y un producto farmaceutico que contiene al peptido.

Medios para solucionar los problemas La presente invención proporciona un polipeptido como se expone en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3. La presente invención proporciona ademas un ADN que consiste en las secuencias de ADN que codifican a dicho peptido, un vector recombinante que contiene dicho ADN, y un transformante que comprende dicho vector recombinante. La presente invención proporciona ademas una sustancia ligada al peptido como se expone en la reivindicación 7. Las realizaciones preferidas de la sustancia ligada al peptido son expuestas en las subreivindicaciones. La presente invención proporciona ademas un producto farmaceutico que contiene dicha sustancia ligada al peptido, que se usa preferentemente como farmaco antialergico.

Los presentes inventores investigaron diligentemente para proporcionar un peptido que consistia en una nueva secuencia de aminoacidos, util como peptido de penetración en la celula, identificaron la secuencia de aminoacidos del peptido que transporta proteinas en las celulas a una frecuencia mas alta que los peptidos que penetran en las celulas convencionales y desarrollaron la presente invención. Especificamente, los presentes inventores

descubrieron un peptido con una transferibilidad intracelular alta, en una biblioteca de peptidos aleatoria de 1012 moleculas por cribado completo. Se piensa que los peptidos seleccionados utilizando esta tecnica son particularmente muy transferibles entre los peptidos con capacidad de desplazamiento intracelular.

En consecuencia, la presente invención es como sigue:

(1) Un peptido (I) que consiste en la secuencia de aminoacidos mostrada mas abajo:

en donde (i) B es arginina o lisina, (ii) al menos uno de 01 u 02 es arginina, (iii) Z es un aminoacido hidrófobo, (iv) J es serina o alanina, y (v) X es un aminoacido elegido aleatoriamente;

o (II) que tiene un aminoacido o varios aminoacidos elegidos aleatoriamente en el extremo C-terminal y/o extremo Nterminal de la secuencia de aminoacidos definida en (I) , a condición de que sea capaz de transportar proteinas dentro de las celulas y/o dentro de los nucleos.

(2) El peptido segun (1) , que consiste en la secuencia de aminoacidos mostrada por cualquiera de SEQ ID N0S:1 a 34 en el listado de secuencias en donde un aminoacido o varios aminoacidos han sido sustituidos, delecionados, anadidos o insertados.

(3) Un peptido que consiste en la secuencia de aminoacidos mostrada por cualquiera de SEQ ID N0S:1 a 47 en el listado de secuencias en donde uno o dos aminoacidos han sido sustituidos, delecionados, anadidos o insertados, y su peptido de cadena invertida, teniendo el peptido la capacidad de desplazarse en las celulas.

(4) Un peptido que consiste en la secuencia de aminoacidos mostrada por cualquiera de SEQ ID N0S:1 a 47 en el listado de secuencias, y su peptido de cadena invertida.

(5) Un ADN que consiste en la secuencia de ADN que codifica el peptido segun cualquiera de los puntos (1) a (4) anteriores.

(6) Un vector recombinante que contiene el ADN segun el punto (5) anterior.

(7) Un transformante que comprende el vector recombinante segun el punto (6) anterior.

(8) Una sustancia ligada al peptido incluyendo el peptido segun cualquiera de los puntos (1) a (4) anteriores y, unido a esto, una sustancia bioactiva.

(9) La sustancia ligada al peptido segun el punto (8) anterior, en donde la sustancia bioactiva es una proteina que tiene actividad biológica, un polipeptido que tiene actividad biológica, un liposoma que encapsula a un farmaco, un liposoma que encapsula a un farmaco polietilenglicolado, un compuesto de bajo peso molecular, un acido nucleico, una perla magnetica, una nanoparticula o un fago.

(10) La sustancia ligada al peptido segun el punto (8) anterior, en donde la proteina que tiene actividad biológica es una proteina que tiene de aproximadamente 10 KDa a aproximadamente 120 KDa o de 4 a 30 polipeptidos.

(11) La sustancia ligada al peptido segun el punto (8) anterior, en donde la proteina que tiene actividad biológica es el factor de transcripción MI (MITF) .

(12) La sustancia ligada al peptido segun cualquiera de los puntos de (8) a (11) anteriores, que es transportada dentro de las celulas y/o de los nucleos.

(13) La sustancia ligada al peptido segun cualquiera de los puntos de (8) a (11) anteriores, que es transportada dentro de las celulas.

(14) Un producto farmaceutico que contiene la sustancia ligada al peptido segun el punto (8) anterior.

(15) El producto farmaceutico segun el punto (14) anterior, que se usa como farmaco antialergico.

Efecto de la Invención Segun la presente invención, es posible proporcionar un peptido que penetre dentro de la celula transportando proteinas dentro de las celulas y/o dentro de los nucleos con una frecuencia mas alta que los peptidos que penetran en las celulas convencionales y un producto farmaceutico que contiene el peptido.

Breve Descripcion de los Dibujos

Fig.1. Una representación que muestra los resultados de una prueba de desplazamiento intracelular de un peptido marcado con fluorescencia. Los paneles superiores muestran la fluorescencia de FITC; los paneles inferiores muestran las imagenes microsc6picas de interferencia diferencial de celulas en combinación con imagenes fluorescentes.

Fig. 2. Una representación que muestra los resultados de una prueba de desplazamiento intracelular de un peptido... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un peptido

(I) que consiste en la secuencia de aminoacidos mostrada mas abajo: B-X-Z-X-Arg-Z-Tyr-J-X-01-X-Arg-02-X-X o X-X-01-Arg-X-02-X-J-Tyr-Z-Arg-X-Z-X-B, en el que (i) B es arginina o lisina, (ii) al menos uno de 01 u 02es arginina, (iii) Z es un aminoacido hidrófobo, (iv) J

es serina o alanina, y (v) X es un aminoacido elegido aleatoriamente; o

(II) que tiene uno o varios aminoacidos elegidos aleatoriamente en el extremo C-terminal y/o el extremo N-terminal de la secuencia de aminoacidos definida en (I) , a condición de que sea capaz de transportar proteinas dentro de las celulas y/o dentro de los nucleos.

2. Un peptido que consiste en la secuencia de aminoacidos mostrada por cualquiera de las SEQ ID N0S:1 a 47 en el listado de secuencias en el que uno o dos aminoacidos han sido sustituidos, delecionados, anadidos o insertados, y su peptido de cadena invertida, cuyo peptido tiene la capacidad de desplazarse en las celulas.

3. Un peptido que consiste en la secuencia de aminoacidos mostrada por cualquiera de las SEQ ID N0S:1 a 47 en el listado de secuencia, y su peptido de cadena invertida.

4. Un ADN que consiste en la secuencia de ADN que codifica el peptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

5. Un vector recombinante que contiene el ADN de la reivindicación 4.

6. Un transformante que comprende del vector recombinante de la reivindicación 5.

7. Una sustancia unida al peptido que incluye el peptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y, unida a este, una sustancia biológicamente activa.

8. La sustancia unida al peptido de la reivindicación 7, en el que la sustancia biológicamente activa es una proteina que tiene actividad biológica, un polipeptido que tiene actividad biológica, un farmaco encapsulado por un liposoma, un liposoma que encapsula a un farmaco polietilenglicolado, un compuesto de bajo peso molecular, un acido nucleico, una perla magnetica, una nanoparticula o un fago.

9. La sustancia unida al peptido de la reivindicación 7, en el que la proteina que tiene actividad biológica es una proteina de aproximadamente 10 KDa a aproximadamente 120 KDa o un polipeptido que tiene de 4 a 30 aminoacidos.

10. La sustancia unida al peptido de la reivindicación 7, en el que la proteina que tiene actividad biológica es el factor de transcripción MI (MITF) .

11. La sustancia unida al peptido de cualquiera de las reivindicaciones 7 a 10, que es transportada dentro de las celulas y/o dentro de los nucleos.

12. La sustancia unida al peptido de cualquiera de las reivindicaciones 7 a 10, que es transportada dentro de las celulas.

13. Un producto farmaceutico que contiene la sustancia unida al peptido de la reivindicación 7.

14. El producto farmaceutico de la reivindicación 13, que se usa como farmaco antialergico.

ºPositivoº

Celulas HeLa Celulas CHO

ooaminoacido hid6fobo0 bien 01 o bien 02 es R

Tipo C

Tipo D

60

Oligodirecto Oligoinverso

Hibridacion Oligo ºibridado Ligamiento Celulas CH0 Celulas HeLa Celulas Jurkat


 

Patentes similares o relacionadas:

Método y medios para purificar vectores retrovíricos, del 29 de Julio de 2020, de Autolus Limited: Una célula productora de retrovirus que expresa una proteína de marcaje en la superficie celular, de tal manera que los vectores retrovíricos producidos por la célula se […]

Biblioteca de péptidos y su uso, del 8 de Julio de 2020, de DAIICHI SANKYO COMPANY, LIMITED: Una biblioteca de péptidos que comprende una pluralidad de péptidos diferentes en la que los péptidos comprenden cada uno una secuencia de aminoácidos […]

Marcador de células endoteliales corneales, del 17 de Junio de 2020, de OSAKA UNIVERSITY: Método para producir una célula endotelial corneal, comprendiendo el método la etapa de clasificar, a partir de una población celular que comprende una célula […]

Vectores de AAV dirigidos a oligodendrocitos, del 10 de Junio de 2020, de THE UNIVERSITY OF NORTH CAROLINA AT CHAPEL HILL: Un ácido nucleico que codifica una cápside de AAV, comprendiendo el ácido nucleico una secuencia codificante de la cápside de AAV que es al menos el 96 % idéntica […]

Reconocimiento de unión a diana celular mediante un agente bioactivo usando transferencia de energía de resonancia de bioluminiscencia intracelular, del 6 de Mayo de 2020, de PROMEGA CORPORATION: Un sistema de ensayo que comprende: (a) una biblioteca de agentes bioactivos, cada uno de los cuales está fijado a un fluoróforo; (b) una diana celular fusionada a […]

Anticuerpo contra péptido codificado por exón-21 de periostina y composición farmacéutica para prevenir o tratar enfermedades asociadas a inflamación que contienen el mismo, del 6 de Mayo de 2020, de OSAKA UNIVERSITY: Anticuerpo que se une a uno o más péptidos seleccionados del grupo que consiste en un péptido codificado por el exón-21 de periostina que […]

Combinación de dos elementos genéticos para el control del desarrollo del tipo floral de una planta dicotiledónea, y utilización en procedimientos de detección y selección, del 1 de Abril de 2020, de Institut national de recherche pour l'agriculture, l'alimentation et l'environnement: Utilización de una combinación de dos elementos genéticos para el control del desarrollo del tipo floral de una planta dicotiledónea, comprendiendo dicha combinación, respectivamente: […]

Producción de proteínas en medios de cultivo celular libres de glutamina, del 25 de Marzo de 2020, de F. HOFFMANN-LA ROCHE AG: Un procedimiento para producir un polipéptido en una célula huésped de mamífero que expresa dicho polipéptido, que comprende cultivar la célula […]

Utilizamos cookies para mejorar nuestros servicios y mostrarle publicidad relevante. Si continua navegando, consideramos que acepta su uso. Puede obtener más información aquí. .