Un nanocuerpo contra TNF-alfa que comprende cuatro regiones estructurales (FR1 a FR4) y tres regionesdeterminantes de complementariedad (CDR1 a CDR3),

en el que:

A) i) CDR1 comprende la secuencia de aminoácidos DYWMY;

ii)CDR2 comprende la secuencia de aminoácidos EINTNGLITKYPDSVKG; y

iii) CDR3 comprende la secuencia de aminoácidos SPSGFN; o

B) i) CDR1 comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con la secuencia

de aminoácidos DYWMY;

ii) CDR2 comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con lasecuencia de aminoácidos EINTNGLITKYPDSVKG; y

iii) CDR3 comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con lasecuencia de aminoácidos SPSGFN, en la que dicho nanocuerpo tiene un valor de EC50 en el ensayo basado encélulas por medio de las células KYM que se describen en el Ejemplo 1, bajo 3) del documento de WO 04/041862 quees mejor que 5 nM.

NanocuerposTM mejorados contra el factor de necrosis tumoral alfa La presente invención se refiere un NanocuerposTM contra el factor de necrosis tumoral alfa (TMN-alfa) así como polipéptidos que comprenden o consisten esencialmente en uno o más de estos Nanocuerpos. [Nota: NanobodiesTM y NanocloneTM y marcas registradas de Ablynx N.V]

La invención también se refiere a ácidos nucleicos que codifican tales Nanocuerpos y polipéptidos; a células huésped que expresan o son capaces de expresar tales Nanocuerpos o polipéptido; a composiciones que comprenden tales Nanocuerpos y polipéptidos, ácidos nucleicos o células huésped; y a los usos de tales Nanocuerpos, tales polipéptidos, tales ácidos nucleicos, tales células huésped o tales composiciones, en particular con fines profilácticos, terapéuticos o diagnósticos, tales como los fines profilácticos, terapéuticos o diagnósticos mencionados a continuación.

Otros aspectos, formas de realización, ventajas y aplicaciones de la invención se aclararán a partir de la siguiente descripción adicional en la presente.

El documento WO 04/041862 se refiere un Nanocuerpos contra TNF-alfa y a la preparación y su uso, en particular para la prevención y/o tratamiento de enfermedades y trastornos asociados con y/o mediados por TNF-alfa, tal como inflamación artritis reumatoide, COPD, asma, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, síndrome intestinal inflamatorio, esclerosis múltiple, enfermedad de Addison, hepatitis autoinmune, parotiditis autoinmune, Diabetes Tipo I, epididimitis, glomerulonefritis, enfermedad de Graves, síndrome de Guillain-Barre, enfermedad de Hashimoto, anemia hemolítica, Lupus eritematoso sistémico, infertilidad masculina, esclerosis múltiple, miastenia gravis, pénfigo, psoriasis, fiebre reumática, artritis reumatoide, sarcoidosis, escleroderma, síndrome de Sjogren, espondiloartropatías, tiroiditis, y vasculitis.

Los nanocuerpos anti-TNF de acuerdo con WO 04/041862 pueden ser humanizados y pueden ser monovalentes o multivalentes, estos últimos que producen aumento de afinidad por TNF. Los NanocuerposTM anti-TNF de acuerdo con WO 04/041862 también pueden ser multiespecíficos, y pueden estar en particular en forma de un constructo multiespecífico que comprende dos o más nanocuerpos contra TNF y un nanocuerpo adicional dirigido contra una proteína sérica tal como albúmina sérica humana, que lleva a un aumento de la vida media in vivo.

El documento de WO 04/041862 también se refiere a métodos para la preparación de los Nanocuerpos anti-TNF, un ácidos nucleicos o constructos que codifican los Nanocuerpos anti-TNF, así como a composiciones farmacéuticas que comprenden los Nanocuerpos anti-TNF, que pueden ser adecuados para la administración intravenosa, subcutánea, oral, sublingual, tópica, nasal, vaginal o rectal, o para la administración por inhalación. Los Nanocuerpos anti-TNF de acuerdo con WO 04/04 1862 también se pueden usar para fines diagnósticos, opcionalmente en la forma de un kit de partes.

El documento EP 0 486 526 describe los ligandos de unión a TNF-alfa contra un epitope específico de TNF. Entre los ligandos de unión, se mencionan anticuerpos de dominio únicos ("dAb") .

Reiter et al, J. Mot. Biol. (1999) , 290, 685-698 describen anticuerpos de dominio único contra el TNF-alfa obtenido de una biblioteca de despliegue en fago aleatorizado que se generó a partir de una estructura del dominio VH proveniente de un hibridoma de ratón.

El documento WO 00/29004 describe anticuerpos de dominio único murinos ("microcuerpos") contra TNF-alfa.

WEl documento WO 04/003019 entre otros describe los ligandos que comprenden un primer dominio de unión contra TNF-alfa y un segundo dominio de unión contra una proteína sérica tal como albúmina sérica.

Un objetivo general de la presente invención es proporcionar Nanocuerpos contra TNF-alfa, en particular contra TNFalfa humano.

En particular, un objeto de la presente invención es proporcionar Nanocuerpos contra TNF-alfa, en particular contra TNF-alfa humano, y proporcionar proteínas o polipéptidos que comprenden los mismos, que son adecuados para uso terapéutico y/o diagnóstico, y en particular para la prevención, tratamiento y/o diagnóstico de una a más enfermedades y trastornos asociados con y/o mediados por TNF-alfa tales como los mencionados antes, y/o que se pueden usar en la preparación de una composición farmacéutica para la prevención y/o tratamiento de una o más enfermedades asociadas con y/o mediadas con TNF-alfa, tales como los mencionados anteriormente.

Más en particular, un objetivo de la invención es proporcionar Nanocuerpos contra TNF-alfa, y para proporcionar proteínas y polipéptidos que comprenden lo mismo, que son una alternativa a los Nanocuerpos y polipéptidos contra TNF-alfa descripto en WO 04/041862 y/o que tienen una o más propiedades o características extrañas, en comparación con los Nanocuerpos y polipéptidos contra TNF-alfa descriptos en WO 04/041862.

Más en particular, un objetivo de la invención es proporcionar Nanocuerpos contra TNF-alfa, y para proporcionar proteínas o polipéptidos que comprenden lo mismo, que están mejorados en comparación con los Nanocuerpos y polipéptidos contra TNF-alfa descriptos en WO 04/041862 con respecto a uno o más de las siguientes propiedades o características:

- afinidad aumentada por TNF-alfa, en un formato monovalente, en un formato multivalente (por ejemplo en un forma bivalente) y/o n un formato multiespecífico (por ejemplo un de los formatos multiespecíficos descriptos en WO 04/048162 o más adelante en la presente) ;

- mejor adecuación para dar formato en un formato multivalente (por ejemplo en una forma bivalente) ;

- mejor adecuación para formatear en un formato multiespecífico (por ejemplo uno de los formatos multiespecíficos descriptos en WO 04/041862 o más adelante en la presente) ;

- mejor adecuación o sensibilidad para "humanizar" sustituciones (como se define en la presente) ; y/o

- menor inmunogenicidad, sea en un formato monovalente, en un formato multivalente (por ejemplo en una forma bivalente) y/o en un formato multiespecífico (por ejemplo uno de los formatos multiespecíficos descriptos en el documento WO 04/041862 o más adelante en la presente) en un formato monovalente;

- estabilidad aumentada, sea en un formato monovalente, en un formato multivalente (por ejemplo en una forma bivalente) y/o en un formato multiespecífico (por ejemplo uno de los formatos multiespecíficos descriptos en WO 04/041862 o más adelante en la presente) en un formato monovalente;

- especificidad aumentada hacia el TNF-alfa, sea en un formato monovalente, en un formato multivalente (por ejemplo en una forma bivalente) y/o en un formato multiespecífico (por ejemplo uno de los formatos multiespecíficos descriptos en WO 04/041862 o más adelante en la presente) en un formato monovalente;

- disminución o cuando sea necesario aumento de la reactividad cruzada con TNF-alfa de diferentes especies;

y/o

- una o más de otras propiedades mejoradas deseables para el uso farmacéutico (que incluye uso profiláctico y/o uso terapéutico) y/o para uso diagnóstico (que incluye pero sin limitación al uso para fines de examen por imágenes) , sea en un formato monovalente, en un formato multivalente (por ejemplo en una forma bivalente) y/o en un formato multiespecífico (por ejemplo, uno de los formatos multiespecíficos descriptos en WO 04/041862 o más adelante en la presente) .

Estos objetos se obtienen por los Nanocuerpos, proteínas y polipéptidos descriptos en la presente. Estos Nanocuerpos también se denominan en la presente como “Nanocuerpos de las invención”; y estas proteínas y polipéptidos también se denominan colectivamente en la presente "polipéptidos de la invención".

La invención se refiere a un nanocuerpo ("nanocuerpo de la invención") contra TNF-alfa que comprende cuatro regiones estructurales (FR1 a FR4) y tres regiones determinantes de complementariedad (CDR1 a CDR3) , en las que A)

i) CDR1 comprende la secuencia de aminoácidos DYWMY;

ii) CDR2 comprende la secuencia de aminoácidos EINTNGLITKYPDSVKG; y iii) CDR3 comprende la secuencia de aminoácidos SPSGFN; o B)

i) CDR1 comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos DYWMY;

ii) CDR2 comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con la secuencia... [Seguir leyendo]

1. Un nanocuerpo contra TNF-alfa que comprende cuatro regiones estructurales (FR1 a FR4) y tres regiones determinantes de complementariedad (CDR1 a CDR3) , en el que:

A) i) CDR1 comprende la secuencia de aminoácidos DYWMY;

ii) CDR2 comprende la secuencia de aminoácidos EINTNGLITKYPDSVKG; y iii) CDR3 comprende la secuencia de aminoácidos SPSGFN; o B) i) CDR1 comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos DYWMY;

ii) CDR2 comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos EINTNGLITKYPDSVKG; y iii) CDR3 comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos SPSGFN, en la que dicho nanocuerpo tiene un valor de EC50 en el ensayo basado en células por medio de las células KYM que se describen en el Ejemplo 1, bajo 3) del documento de WO 04/041862 que es mejor que 5 nM.

2. El nanocuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que CDR1 comprende la secuencia de aminoácidos DYWMY.

3. El nanocuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que CDR2 comprende la secuencia de aminoácidos EINTNGLITKYPDSVKG.

4. El nanocuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que CDR3 comprende la secuencia de aminoácidos SPSGFN.

5. El nanocuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que:

CDR1 comprende la secuencia de aminoácidos DYWMY; y CDR3 comprende la secuencia de aminoácidos SPSGFN; o CDR1 comprende la secuencia de aminoácidos DYWMY; y CDR2 comprende la secuencia de aminoácidos EINTNGLITKYPDSVKG; o CDR2 comprende la secuencia de aminoácidos EINTNGLITKYPDSVKG; y CDR3 comprende la secuencia de aminoácidos SPSGFN.

6. El nanocuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que CDR1 comprende la secuencia de aminoácidos DYWMY; y CDR3 comprende la secuencia de aminoácidos SPSGFN.

7. El nanocuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que CDR1 comprende la secuencia de aminoácidos DYWMY; CDR2 comprende la secuencia de aminoácidos EINTNGLITKYPDSVKG; y CDR3 comprende la secuencia de aminoácidos SPSGFN.

8. El nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-7 en que:

CDR1 tiene una diferencia de la secuencia de aminoácidos de la secuencia de aminoácidos DYWMY, dicha diferencia es una sustitución conservadora de aminoácido;

CDR2 tiene una o dos diferencias de la secuencia de aminoácidos de la secuencia de aminoácidos EINTNGLITKYPDSVKG, dicha diferencia es sustitución conservadora de aminoácido (s) ; y/o CDR3 tiene una diferencia de la secuencia de aminoácidos de la secuencia de aminoácidos SPSGFN, dicha diferencia es a sustitución conservadora de aminoácido.

9. El nanocuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que CDR1 es la secuencia de aminoácidos DYWMY.

10. El nanocuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que CDR2 es la secuencia de aminoácidos EINTNGLITKYPDSVKG.

11. El nanocuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que CDR3 es la secuencia de aminoácidos SPSGFN.

12. El nanocuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que: CDR1 es la secuencia de aminoácidos DYWMY; y CDR3 consiste en la secuencia de aminoácidos SPSGFN; o CDR1 es la secuencia de aminoácidos DYWMY; y CDR2 consiste en la secuencia de aminoácidos EINTNGLI

TKYPDSVKG; o CDR2 es la secuencia de aminoácidos EINTNGLITKYPDSVKG; y CDR3 consiste en la secuencia de aminoácidos SPSGFN.

13. El nanocuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que CDR1 es la secuencia de aminoácidos DYWMY; y CDR3 es la secuencia de aminoácidos SPSGFN.

14. El nanocuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que CDR1 es la secuencia de aminoácidos DYWMY: CDR2 es la secuencia de aminoácidos EINTNGLiTKYP®SVKG: y CDR3 es la secuencia de aminoácidos SPSGFN.

15. El nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-14 que es un nanocuerpo humanizado.

16. El nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-15 que es un nanocuerpo clase GLEW en el que la secuencia de aminoácidos en las posicione.

4. 47 de acuerdo con la numeración de Kabat se selecciona del grupo que consiste en GLEW, GVEW, EPEE/, GLER, DGEW, DLEW, GIEW, ELEW, GPEW, EWLP, GPER, GLER y ELFIN,

17. El nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-16 que contiene un residuo de arginina (R) en la posición 103.

18. El nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-17 que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con una de las secuencias de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NOs 52 (TNF1) , 76 (TNF13) , 77 (TNF14) , 95 (TNF29) , y 96 (TNF30) .

19. El nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-17 que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con una de las secuencias de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NOs 52 (TNF1) , 76 (TNF13) , 77 (TNF14) , 95 (TNF29) , y 96 (TNF30) .

20. El nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-17 que tiene al menos 95% de identidad de secuencia con una de las secuencias de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NOs 52 (TNF1) , 75 (TNF1 3) , 77 (TNF14) , 95 (TNF29) , y 96 (TNF30) .

21. El nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-17 que tiene al menos 99% de identidad de secuencia con una de las secuencias de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NOs 52 (TNF1) , 76 (TNF13) , 77 (TNF14) , 95 (TNF29) , y 96 (TNF3O) .

22. El nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-21 que contiene un residuo de leucina (1) en la posición 108.

23. El nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-22, en el que el nanocuerpo se elige del grupo que consiste en TNF 13 (SEQ ID NO: 76) , TNF 14 (SEQ ID NO: 77) , TNF 29 (SEQ ID NO: 95) , y TNF 30 (SEQ ID NO: 96) .

24. El nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las 1-23 que es TNF 30 (SEQ ID NO: 96) .

25. El nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-24, que es una variante humanizada de un nanocuerpo no humanizado contra TNF-alfa, tal nanocuerpo no humanizado contra TNF-alfa tiene las siguientes secuencias estructurales: FR1: SEQ ID NO: 130; FR2: SEQ ID NO: 196; FR3: SEQ ID NO: 266; y FR4: SEQ ID NO:

334.

26. El nanocuerpo de acuerdo con la reivindicación 25, que se dirige contra el mismo epitope de TNF como TNF1 (SEQ ID NO: 52) .

27. El nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-25, en el que el nanocuerpo se dirige contra el mismo epitope en el trímero de TNF-alfa como nanocuerpo TNF1 (SEQ ID NO: 52) .

28. El nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-25, en el que el nanocuerpo se dirige contra el mismo epitope de trímero de TNF-alfa como nanocuerpo TNF3 (SEQ ID NO: 60) .

29. El nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-28, en el que el nanocuerpo es una variante humanizada del nanocuerpo TNF1 (SEQ ID NO: 52) .

30. Un polipéptido que comprende al menos un nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-29.

31. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 30, en el que el polipéptido consiste esencialmente en un nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-29.

32. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 30, en el que el polipéptido comprende dos nanocuerpos de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-29.

33. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 32 que comprende dos nanocuerpos TNF30 (SEC) ID NO: 96) .

34. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 32 o 33, que después de la unión a un trímero de TNF, es capaz de inhibir o reducir el entrecruzamiento del receptor TNF que está mediado por dicho trímero TNF y/o la transducción de señales que está mediada por tal entrecruzamiento del receptor.

35. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 32 o 33, en el que el polipéptido es capaz de unirse en forma intramolecular a al menos dos sitios de unión del receptor TNF en un trímero TNF.

36. El polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicacione.

3. 35, en el que los dos nanocuerpos se unen directamente entre sí.

37. El polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicacione.

3. 35, en el que los dos nanocuerpos se unen directamente entre sí por medio de un ligador.

38. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 37, en el que el ligador es una secuencia de aminoácidos.

39. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 38, en el que el ligador es una secuencia de aminoácidos que comprende al menos 14 aminoácidos.

40. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 38, en el que el ligador es una secuencia de aminoácidos que comprende al menos 17 aminoácidos.

41. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 38, en el que el ligador es una secuencia de aminoácidos que comprende 20 a 40 aminoácidos.

42. El polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicacione.

3. 41, el que el ligador comprende residuos de glicina y serina.

43. El polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicacione.

3. 42, que comprende el polipéptido TNF 7 (SEQ ID NO: 73) , en que los nanocuerpos TNF 1 se han humanizado.

44. El polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicacione.

3. 43, que comprende el polipéptido TNF 55 (SEQ ID NC: 419) o TNF 56 (SEC ID NO: 420) .

45. El polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicacione.

3. 44, en el que el polipéptido está pegilado.

46. El polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicacione.

3. 43, que además comprende al menos un nanocuerpo dirigido contra albúmina sérica humana.

47. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 46, en el que el al menos un nanocuerpo dirigido contra albúmina sérica humana tiene las secuencias de CDR presentes en la ALB 8 (SEQ ID NO: 102) .

48. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 32, que comprende dos nanocuerpos de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-29 y que además comprende al menos un nanocuerpo dirigido contra la albúmina sérica humana.

49. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 48, en el que los dos nanocuerpos contra TNF se unen directamente al nanocuerpo dirigido contra albúmina sérica humana.

50. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 48, en el que los dos nanocuerpos contra TNF se unen al nanocuerpo dirigido contra la albúmina sérica humana por medio de un ligador.

51. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 50, en el que el ligador es una secuencia de aminoácidos.

52. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 50 o 51, en el que el ligador es una secuencia de aminoácidos que comprende 3 a 40 aminoácidos.

53. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 50 o 51, en el que el ligador es una secuencia de aminoácidos que comprende 5 a 15 aminoácidos.

54. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 50 o 51, en el que el ligador comprende residuos de glicina y serina.

55. El polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicacione.

4. 54, en el que al menos un nanocuerpo dirigido contra albúmina sérica humana tiene las secuencias de CDR presentes en la ALB 8 (SEQ iD NO: 102) .

56. El polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 48.55, en el que al menos un nanocuerpo dirigido contra albúmina sérica humana es un nanocuerpo humanizado.

57. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 56, en el que al menos un nanocuerpo dirigido contra albúmina sérica humana es una variante humanizada del nanocuerpo ALB 1 (SEQ ID NO: 63) .

58. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 56, en el que al menos un nanocuerpo dirigido contra albúmina sérica humana se elige del grupo que consiste en ALB 3 (SEQ ID NO: 87) , ALB 4 (SEQ ID NO: 88) , ALB 5 (SEQ ID NO: 89) , ALB 8 (SEQ ID NO: 100) , ALB 7 (SEQ ID NO: 101) , ALB 8 (SEQ ID NO: 102) , ALB 9 (SEQ ID NO: 103) , y ALB 10 (SEQ ID NO: 104) .

59. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 58, en el que al menos un nanocuerpo dirigido contra albúmina sérica humana es ALB 8 (SEQ ID NO: 102) .

60. El polipéptido de acuerdo con la reivindicació.

4. 58, que comprende dos nanocuerpos que son variantes humanizadas de un nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-29 y una variante humanizada del nanocuerpo ALB 1 (SEQ ID NO: 63) .

61. El polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicacione.

4. 60, en que ambos el nanocuerpo TNF1 (SEQ ID NO: 52) así como el nanocuerpo ALB I (SEQ ID NO: 63) se ha humanizado.

62. El polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicacione.

4. 61, que comprende dos nanocuerpos TNF 30 (SEQ ID NO: 96) y un Nanocuerpo ALB 8 (SEQ ID NO: 102) .

63, El polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicacione.

4. 62, que comprende el polipéptido TNF 60 (SEQ ID NO: 417) .

64. El polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicacione.

4. 62, que consiste en el polipéptido TNF 60 (SEQ ID NO: 417) .

65. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 30, en el que el polipéptido tiene al menos 80% de identidad de secuencia con el polipéptido TNF 60 (SEQ ID NO: 417) .

66. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 30, en el que el polipéptido tiene al menos 90% de identidad de secuencia con el polipéptido TNF 60 (SEQ ID NO: 417) .

67. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 30, en el que el polipéptido tiene al menos 95% de identidad de secuencia con el polipéptido TNF 60 (SEQ ID NO: 417) .

68. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 30, en el que el polipéptido tiene al menos 99% de identidad de secuencia con el polipéptido TNF 60 (SEQ ID NO: 417) .

69. Un ácido nucleico que comprende: (a) un ácido nucleico que codifica un nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-29; o (b) un ácido nucleico que codifica un polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicacione.

3. 68.

70. Una célula huésped que comprende un ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 69.

71. Una célula huésped que es capaz de expresar: (a) un nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-29; o (b) un polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicacione.

3. 68.

72. Un procedimiento para preparar un nanocuerpo, que comprende cultivar o mantenimiento de una célula huésped de acuerdo con la reivindicación 70 o 71 en condiciones tales que dicha célula huésped produce un nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-29; o en condiciones tales que dicha célula huésped produces un polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicacione.

3. 68.

73. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 72, que además comprende aislar el nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-29.

74. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 72, que además comprende aislar el polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicacione.

3. 68.

75. Una composición farmacéutica, que comprende (a) al menos un nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-29, y opcionalmente al menos un portador farmacéuticamente aceptable; o (b) al menos un polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicacione.

3. 68, y opcionalmente al menos un portador farmacéuticamente aceptable.

76. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 75, que comprende al menos un nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-29, y opcionalmente al menos un portador farmacéuticamente aceptable, para usar en el tratamiento de al menos una enfermedad seleccionada de inflamación, artritis reumatoide, COPD, asma, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, síndrome intestinal inflamatorio, esclerosis múltiple, enfermedad de Addison, hepatitis autoinmune, parotiditis autoinmune, Diabetes Tipo I, epididimitis, glomerulonefritis, enfermedad de Graves, síndrome de Guillain-Barre, enfermedad de Hashimoto, anemia hemolítica, Lupus eritematoso sistémico, Infertilidad masculina, esclerosis múltiple, miastenia gravis, pénfigo, psoriasis, fiebre reumática, artritis reumatoide, sarcoidosis, escleroderma, síndrome de Sjogren, espondiloartropatías, tiroiditis, y vasculitis.

77. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 75, que comprende al menos un polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicacione.

3. 68, y opcionalmente al menos un portador farmacéuticamente aceptable, para usar en el tratamiento de al menos una enfermedad seleccionada de inflamación, artritis reumatoide, COPD, asma, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, síndrome intestinal inflamatorio, esclerosis múltiple, enfermedad

de Addison, hepatitis autoinmune, parotiditis autoinmune, diabetes Type 1, epididimitis, glomerulonefritis, enfermedad de Graves, síndrome de Guillain-Barre, enfermedad de Hashimoto, anemia hemolítica, lupus eritematoso sistémico, fertilidad masculina, esclerosis múltiple, miastenia gravis, pénfigo, psoriasis, fiebre reumática, artritis reumatoide, sarcoidosis, escleroderma, síndrome de Sjogren, espondiloartropatías, tiroiditis, y vasculitis.

78. Uso de (a) un nanocuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-29; o (b) a polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicacione.

3. 68 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de al menos una enfermedad seleccionada de inflamación, artritis reumatoide, COPD, asma, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, síndrome intestinal inflamatorio, esclerosis múltiple, enfermedad de Addison, hepatitis autoinmune, parotiditis autoinmune, Diabetes Type 1, epididimitos, glomerulonefritis, enfermedad de Graves, síndrome de Guillain-Barre, enfermedad de Hashimoto, anemia hemolítica, Lupus eritematoso sistémico, infertilidad masculina, esclerosis múltiple, miastenia gravis, pénfigo, psoriasis, fiebre reumática, artritis reumatoide, sarcoidosis, escleroderma, síndrome de Sjogren. espondiloartropatías, tiroiditis, y vasculitis

Figura 2

Detección de nanocuerpos específicos de albúmina versus SA humano

Detección de nanocuerpos específicos de albúmina versus SA rhesus

Detección de nanocuerpos específicos de albúmina versus SA de monos

Figur.

2. continuación

1G5WT y versiones humanizadas versus TNF humana (datos normalizados)

6A6 WTy versiones humanizadas versus TNF humana (datos normalizados)

Figura 30

Figura 33

Figura 40

Figura 53

Figura 54

Figura 57

Figura 59