Moléculas de reconocimiento específicas de tumor.

Composición farmacéutica o diagnóstica que comprende una molécula de reconocimiento caracterizadapor que comprende una secuencia de aminoácidos que contiene

(i) una secuencia de aminoácidos que es al menos en un 80 % homóloga a la secuencia de aminoácidosmostrada en SEC ID Nº 1 y

(ii) una secuencia de aminoácidos que es al menos en un 80 % homóloga a la secuencia de aminoácidosmostrada en SEC ID Nº 2 ó 3 y

(iii) una secuencia de aminoácidos que es al menos en un 80 % homóloga a la secuencia de aminoácidosSEC ID Nº 4,

5 ó 6 y

que se une específicamente al antígeno Core-1, donde dicha composición farmacéutica comprende opcionalmenteun carrier y/o diluente farmaceuticamente aceptable.

Moléculas de reconocimiento específicas de tumor

[0001] La invención se refiere a composiciones farmacéuticas o diagnósticas que comprenden moléculas de reconocimiento dirigidas contra tumores y que se pueden usar para el diagnóstico y la terapia de enfermedades tumorales.

Las enfermedades tumorales o cancerosas son enfermedades de proliferación celular que describen un aumento circunscrito en el espacio del volumen tisular. En un sentido más amplio, cada hinchazón localizada por edemas, inflamaciones agudas y/o crónicas, una expansión aneurismática o incluso una hinchazón de órganos debido a inflamación es un tumor. En sentido más restringido se consideran enfermedades tumorales sobre todo neoformaciones tisulares como tumefacciones, blastomas y/o neoplasias en forma de un sobrecrecimiento espontáneo, desinhibido de diverso modo, autónomo e irreversible de tejido del propio cuerpo, que está asociado por norma a una pérdida de diferente modalidad de células específicas y funciones tisulares. Es posible sistematizar tumores de acuerdo con su comportamiento biológico, sin embargo, también de acuerdo con una sistemática histogenética o de acuerdo con hallazgos clínicos o anatomopatológicos.

Particularmente en el ámbito clínico puede ser necesario detectar los tumores lo más tempranamente posible e incluso de forma selectiva, ya que una detección temprana y el tratamiento o la retirada posterior garantiza que la proliferación se pueda tratar de forma exitosa sin que se deformen las estructuras orgánicas o los segmentos génicos afectados, pudiéndose evitar adicionalmente la conformación de metástasis. Incluso en las consultas de seguimiento después de un tratamiento de cáncer se tienen que detectar de forma temprana las metástasis más pequeñas para optimizar el tratamiento posterior adicional. Además, para ámbitos amplios de la medicina del trabajo es necesario determinar si un tejido o un órgano muestra una potencial susceptibilidad a cáncer sin que el propio órgano o el tejido ya haya degenerado o se haya transformado.

El método más antiguo y al mismo tiempo más sencillo y en parte incluso todavía usado actualmente con éxito para detectar un tumor es la palpación y la inspección visual. De este modo, por ejemplo, el carcinoma de mama o el carcinoma de próstata se pueden palpar como nódulos. Se pueden detectar ópticamente indicios de cáncer de piel por lunares evidentes por el médico o por el propio paciente. Otros procedimientos ópticos son, por ejemplo, los métodos de formación de imágenes. En este caso se toman con ayuda de aparatos imágenes del cuerpo, en las que se puede reconocer un tumor. A estos métodos pertenecen, por ejemplo, la radiografía así como la tomografía computerizada (CT) . En este procedimiento se examina el cuerpo con radiación de alta energía, donde las estructuras tisulares degeneradas, debido a la permeabilidad modificada para esta radiación se pueden detectar por comparación con el tejido sano. A menudo, en estos métodos se usan medios de contraste que se inyectan en regiones correspondientes y que aumentan la absorción. Además, el diagnóstico de cáncer es posible mediante ultrasonidos así como por el uso de anticuerpos marcados radiactivamente, donde los antígenos típicos de tumor se unen a los órganos que se tienen que examinar y de este modo hacen detectables los tumores dentro del procedimiento de formación de imágenes. Además de los métodos de formación de imágenes, las pruebas de laboratorio son un medio importante adicional para la detección temprana de cáncer. Se examinan muestras de orina, sangre o incluso muestras tisulares en relación a anormalidades. Esto puede ser, por ejemplo, una composición modificada de estas muestras, sin embargo, también la presencia de sustancias que normalmente no están presentes o solamente en cantidades reducidas. Estas sustancias se denominan generalmente marcadores tumorales. Se producen por el propio tejido tumoral o se forman como reacción del cuerpo frente al tumor. Se denominan marcadores tumorales, además de las sustancias, también modificaciones celulares, cuyo análisis cualitativo o cuantitativo posibilita una afirmación sobre la presencia, la evolución o un pronóstico de enfermedades malignas. Los marcadores tumorales son la mayoría de las veces sustancias presentes fisiológicamente o modificadas que, frente a condiciones fisiológicas o la expresión normal genotípica/fenotípica en orina, suero u otros líquidos corporales, se pueden detectar con concentración aumentada o reducida o en o sobre células tumorales, donde estas sustancias se sintetizan y/o secretan por el tejido tumoral y se liberan después por la lísis del tumor o se forman como reacción del organismo frente a un tumor. Se ha descrito una pluralidad de marcadores tumorales, cuya utilización se considera razonable particularmente en el cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de ovarios, cáncer de próstata y testículos y en el carcinoma de pulmón de células pequeñas. A estos marcadores de cáncer pertenecen, por ejemplo el CEA, CA 15-3, CA 125, alfafetoproteína, HCG, el antígeno específico de próstata, la enolasa especifica de neuronas, CA 19-9 y SCC.

Los marcadores mencionados muestran por un aumento en suero o en tejidos o por su presencia como proteínas, lípidos y/o carbohidratos modificados por un lado, por ejemplo (i) enfermedades inflamatorias, pólipos intestinales, inflamaciones virales, sin embargo, particularmente también (ii) cirrosis, degeneraciones, tumores y metástasis. Una gran parte de estos marcadores consiste en moléculas que comprenden estructuras tanto proteicas como de carbohidratos, en un caso dado, lípidos. Cuanto menor sea el componente proteico y, por lo tanto, cuanto mayor sea el componente de carbohidratos o lípidos de estos marcadores, más difíciles serán de detectar los mismos, por ejemplo, con moléculas de reconocimiento como, por ejemplo, anticuerpos. Hasta ahora, por la inmunización de ratones con ayuda de la tecnología de hibridoma se han producido diferentes anticuerpos contra estructuras de carbohidratos.

El diagnóstico de cáncer con moléculas de reconocimiento presenta varias desventajas. De este modo pueden presentarse determinados marcadores tumorales incluso en enfermedades no carcinógenas, por lo que las moléculas de reconocimiento utilizadas muestran una reacción positiva; además, una no interacción de las moléculas de reconocimiento no significa que no exista una enfermedad tumoral. Una desventaja adicional es que las sustancias de reconocimiento conocidas por norma son inespecíficas. Esto significa que una detección positiva solamente en pocos casos indica un tipo determinado de enfermedad tumoral. Una desventaja adicional muy decisiva de las moléculas de reconocimiento conocidas es, además, que solamente se pueden usar de forma limitada para el control de la evolución del desarrollo de tumores, por ejemplo, después de una cirugía. Esto quiere decir que los marcadores tumorales conocidos por norma no se pueden utilizar para la detección temprana o para el tratamiento posterior, particularmente para la profilaxis.

Además de estas desventajas generales, en moléculas de reconocimiento que se dirigen contra estructuras de carbohidratos se presentan desventajas especiales. La inmunización con antígenos de carbohidratos conduce la mayoría de las veces solamente a una respuesta de IgM primaria o la respuesta inmune no se produce en absoluto, ya que muchas estructuras de carbohidratos también son autoantígenos. Ya que los carbohidratos son antígenos independientes de células T que no son capaces de provocar un cambio de clase y la maduración asociada por mutaciones somáticas, la respuesta de anticuerpos queda limitada la mayoría de las veces a la clase de IgM. Debido a la interacción generalmente débil y la multivalencia necesaria es difícil, por lo tanto, producir anticuerpos con elevada afinidad. Un problema en anticuerpos contra estructuras de carbohidratos no es solamente la baja afinidad, sino también la especificidad. Es extremadamente difícil producir anticuerpos específicos particularmente contra estructuras de carbohidratos no cargados cortas, alcanzándose una determinada especificidad en muchos casos solamente si la estructura de carbohidratos se ubica sobre un soporte determinado. De este modo, Karsen et al. (1995) Hybridoma 14 (1) , 37-44, describen la especificidad de unión y de epítopo de un anticuerpo monoclonal que se une de forma específica al antígeno de Thomsen-Friedenreich (epítopo Gal11-3GaINAc) y, entre otras cosas, es adecuado para la inmunohistoquímica. Frente a esto, por ejemplo el anticuerpo... [Seguir leyendo]

1. Composición farmacéutica o diagnóstica que comprende una molécula de reconocimiento caracterizada por que comprende una secuencia de aminoácidos que contiene

(i) una secuencia de aminoácidos que es al menos en un 80 % homóloga a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID Nº 1 y

(ii) una secuencia de aminoácidos que es al menos en un 80 % homóloga a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID Nº 2 ó 3 y

(iii) una secuencia de aminoácidos que es al menos en un 80 % homóloga a la secuencia de aminoácidos SEC ID Nº 4, 5 ó 6 y

que se une específicamente al antígeno Core-1, donde dicha composición farmacéutica comprende opcionalmente un carrier y/o diluente farmaceuticamente aceptable.

2. Composición farmacéutica o diagnóstica de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizada por que la molécula de reconocimiento comprende adicionalmente una secuencia de aminoácidos que contiene

(i) una secuencia de aminoácidos que es al menos en un 80 % homóloga a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID Nº 7 u 8 ó 9 y

(ii) una secuencia de aminoácidos que es al menos en un 80 % homóloga a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID Nº 10 u 11 y

(iii) una secuencia de aminoácidos que es al menos en un 80 % homóloga a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID Nº 12 ó 13 y

que se une específicamente al antígeno Core-1.

3. Composición farmacéutica o diagnóstica de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, caracterizada porque en la molécula de reconocimiento al menos un aminoácido de al menos una de las secuencias de SEC ID Nº 1 a 13 es sustituido por un aminoácido con propiedades físico-químicas análogas.

4. Composición farmacéutica o diagnóstica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada porque en la molécula de reconocimiento la secuencia de SEC ID Nº 1 se sustituye por una estructura canónica equivalente de SEC ID Nº 14 a 17 y/o al menos una secuencia de las secuencias SEC ID Nº 2 ó 3 se sustituye por una estructura canónica equivalente de SEC ID Nº 18 a 27 y/o al menos una secuencia de SEC ID Nº 7 a 9 se sustituye por una estructura canónica equivalente de SEC ID Nº 28 a 45 y la molécula de reconocimiento se une específicamente al antígeno Core-1.

5. Composición farmacéutica o diagnóstica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque la cadena pesada variable VH y la cadena ligera variable VL de la molécula de reconocimiento están en cadenas polipeptídicas diferentes.

6. Composición farmacéutica o diagnóstica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque la cadena pesada variable VH y la cadena ligera variable VL de la molécula de reconocimiento están directamente unidas en una proteína de fusión.

7. Composición farmacéutica o diagnóstica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizada porque la molécula de reconocimiento es un anticuerpo de cadena única, un multicuerpo, un fragmento Fab, una proteína de fusión de un fragmento de anticuerpo con péptidos o proteínas y/o una inmunoglobulina de los isotipos IgG, IgM, IgA, IgE, IgD y/o subclases de los mismos.

8. Composición farmacéutica o diagnóstica que comprende una construcción que comprende una molécula de reconocimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizada porque las moléculas de reconocimiento se fusionan, acoplan químicamente, asocian covalentemente o no covalentemente con secuencias adicionales y/o estructuras.

9. Composición farmacéutica o diagnóstica de acuerdo con la reivindicación 8, caracterizada por que las moléculas de reconocimiento se fusionan, acoplan químicamente, asocian covalentemente o no covalentemente con

(i) dominios de inmunoglobulina de diferentes especies, (ii) moléculas enzimáticas, (iii) dominios de interacción (iv) dominios para la estabilización, (v) secuencias señal, (vi) colorantes fluorescentes, (vii) toxinas, (viii) anticuerpos catalíticos, (ix) uno o varios anticuerpos o fragmentos de anticuerpos con otra especificidad, (x) componentes citolíticos, (xi) imunomoduladores, (xii) inmunoefectores, (xiii) antígenos de MHC de clase I o clase II, (xiv) quelantes para el marcado radiactivo, (xv) radioisótopos, (xvi) liposomas, (xvii) dominios transmembrana, (xviii) virus y/o (xix) células.

10. Composición farmacéutica o diagnóstica que comprende una molécula de ácido nucleico que comprende secuencias de ácido nucleico que codifican secuencias de amino ácidos de al menos una molécula de reconocimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 o una construcción de las reivindicaciones 8

o 9.

11. Composición farmacéutica o diagnóstica de acuerdo con la reivindicación 10, donde un primer vector codifica la cadena pesada y un segundo vector codifica la cadena ligera de una molécula de reconocimiento acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 o una construcción de las reivindicaciones 8 o 9.

12. Composición farmacéutica o diagnóstica que comprende un casete de expresión o un vector que comprende una molécula de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 10 u 11 y un promotor que está unido operativamente al ácido nucleico.

13. Composición farmacéutica o diagnóstica que comprende una célula huésped que comprende al menos un vector o casete de expresión de acuerdo con la reivindicación 12.

14. Composición farmacéutica o diagnóstica que comprende

(i) al menos una molécula de reconocimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7;

(ii) al menos una construcción de acuerdo con las reivindicaciones 8 ó 9; y/o

(iii) al menos una molécula de ácido nucleico de acuerdo con las reivindicaciones 10 u 11.

15. Uso de una molécula de reconocimiento según se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a14 para la identificación y/o obtención de moléculas que contienen Core-1.

16. Uso de acuerdo con la reivindicación 15, donde las moléculas que contienen Core-1 contienen estructuras Core-1 y/o Core-2.

17. Uso de acuerdo con las reivindicaciones 15 o 16, donde las moléculas que contienen Core-1 son glicoproteínas, glicopéptidos o glicolípidos.

18. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 17, donde células, partes de células, virus

o bacterias contienen moléculas que contienen Core-1.

19. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 18, donde las moléculas que contienen Core-1 están enriquecidas o se aíslan de células, líneas celulares, sobrenadantes de cultivos, tejidos tumorales, células tumorales o fluidos corporales.

20. Molécula de ácido nucleico que comprende secuencias de ácido nucleico que codifican la secuencia de amino ácidos de al menos una molécula de reconocimiento según se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a

7.

21. Molécula de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 20, donde un primer vector codifica la cadena pesada y un segundo vector codifica la cadena ligera de una molécula de reconocimiento.

22. Casete de expresión o un vector que comprende la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 20 u 21 y un promotor que está unido operativamente al ácido nucleico.

23. Célula huésped que comprende al menos un vector o casete de expresión de acuerdo con la reivindicación

22.