Micropartículas derivadas de glóbulos rojos (MPGR) o variantes modificadas químicamente de las mismasproducidas mediante injerto o conjugación de moléculas de adhesión o factores de coagulación recombinantes en lasuperficie de las MPGR para su uso en un método de tratamiento de un estado de hemorragia excesiva en unmamífero aumentando la hemostasia.

Micropartículas derivadas de glóbulos rojos como agentes hemostáticos para el control de la hemorragia y para el tratamiento de trastornos hemorrágicos

Antecedentes de la invención

1. Campo de la invención

La invención se refiere al uso de micropartículas derivadas de glóbulos rojos que promueven la adhesión y agregación plaquetarias, la formación de coágulos sanguíneos en un método para tratar trastornos hemorrágicos, particularmente trastornos de la coagulación sanguínea, trastornos de la función plaquetaria en el caso de bajos recuentos de plaquetas. La invención también es útil en la minimización de la pérdida de sangre en un mamífero, en particular en pacientes con traumatismo, pacientes que se someten a procedimientos quirúrgicos o médicos invasivos en los que puede ser sustancial la pérdida de sangre.

2. Antecedentes

(A) Trastornos hemorrágicos clínicos

(B) Micropartículas derivadas de células (C-MP, cell-derived microparticles) .

2 (A) . Trastornos hemorrágicos clínicos

Varios trastornos médicos que se manifiestan con una hemorragia prolongada pueden clasificarse en (i) trastornos plaquetarios, (ii) trastornos de la coagulación y (iii) trastornos hemorrágicos indefinidos.

(i) Trastornos plaquetarios. Los pacientes con trastornos plaquetarios a menudo sangran de manera excesiva debido a que el número de plaquetas es insuficiente (trombocitopenia) o la función plaquetaria está alterada, aunque los recuentos de plaquetas son normales (disfunción plaquetaria) . Por ejemplo, los pacientes con púrpura trombocitopénica idiopática (PTI) tienen insuficientes plaquetas y padecen una fácil aparición de hematomas y hemorragia. La trombocitopenia (bajos recuentos de plaquetas) puede estar causada por medicamentos, especialmente tras regímenes intensos de quimioterapia. Muchos fármacos, por ejemplo la aspirina, alteran la función plaquetaria, conduciendo a una hemorragia excesiva aunque los recuentos de plaquetas de los pacientes pueden ser normales. Alguna enfermedad sistémica también puede causar una forma adquirida de trastornos plaquetarios. Las trombocitopenias o disfunciones plaquetarias pueden ser congénitas o adquiridas.

(ii) Trastornos de la coagulación. Un grupo de trastornos hemorrágicos genéticos, incluyendo la enfermedad de von Willebrand (EvW) y otros trastornos de la coagulación, se caracterizan por el aspecto común de hemorragia prolongada. En muchos de estos pacientes con trastornos de la coagulación, existe una insuficiencia en la cantidad y/o función de factores de coagulación tales como el factor ocho (FVIII) o el factor de von Willebrand (FvW) en la sangre u otros factores de coagulación. FvW promueve la adhesión y agregación plaquetarias y porta el factor de coagulación VIII (FVIII) . FVIII es esencial para la generación de trombina y la posterior coagulación sanguínea.

(iii) Existen muchos trastornos hemorrágicos indefinidos, algunos de los cuales implican la pared del vaso sanguíneo.

Aunque están disponibles diversos tratamientos para los trastornos hemorrágicos, existe una necesidad de métodos de tratamiento con una eficacia aumentada y/o efectos secundarios reducidos. Por ejemplo, actualmente, la transfusión de hemoderivados alogénicos (hemoderivados de donantes, no del paciente) tales como plaquetas y factores de coagulación es la piedra angular del tratamiento de trastornos hemorrágicos. Sin embargo, tales agentes conllevan un riesgo de transmisión de infecciones transmitidas por la sangre tales como hepatitis, virus VIH y pueden inducir reacciones transfusionales mediadas por el sistema inmunitario. Para soslayar estos problemas, se persigue activamente la producción de factores de coagulación recombinantes o pequeñas moléculas eficaces. Algunos de tales agentes están disponibles para uso clínico (Coagulin-A®, Kogenate®, por ejemplo) , sin embargo, éstos son todavía muy caros y no todos los pacientes responden a estos agentes. Otros tratamientos comprenden administrar FvW purificado humano o un crioprecipitado de plasma humano que contiene FvW. El FvW inyectado directamente tiene un tiempo de aclaramiento muy corto, complicando adicionalmente la terapia. Además, algunos pacientes rechazan las proteínas foráneas y no responden a estas terapias de sustitución. Otros agentes hemostáticos tales como desmopresina (DDAVP) se usan para tratar a algunos pacientes de hemofilia y EvW, pero muchos pacientes no responden a este tratamiento. Por tanto, sigue habiendo la necesidad de nuevos tratamientos para trastornos hemorrágicos en los que la hemorragia espontánea o inducida por traumatismos son complicaciones frecuentes, algunas veces potencialmente mortales.

La presente invención se ocupa de todos estos problemas mediante el desarrollo de un tratamiento eficaz y seguro que usa hemoderivados autólogos o hemoderivados heterólogos con capacidad reducida para la transmisión de patógenos transmitidos por la sangre y una capacidad reducida de inducción de respuestas inmunitarias. Este método mejorará la calidad de vida en pacientes con trastornos hemorrágicos y salvará muchas vidas y resolverá adicionalmente una grave escasez de suministro de sangre, un problema creciente en la medicina de transfusión.

2 (B) . Micropartículas (MP) derivadas de células

Se ha demostrado la liberación de micropartículas (MP) derivadas de membrana celular durante la apoptosis o activación celular. Se ha demostrado la liberación de MP desde plaquetas (MPP) , leucocitos (MPL) , glóbulos rojos (MPGR) y células endoteliales (MPE) (1-3) . La mayor parte de MP tienen expuestos fosfolípidos aniónicos procoagulantes tales como fosfatidilserina (PS) (4-7) , que tiene actividad de factor plaquetario 3 (FP3) (8) . Se cree que esta actividad es una función principal de las MP in vivo. Más recientemente, se ha identificado el factor tisular (FT) en MP de leucocitos (MPL) (9-11) , MP endoteliales (MPE) (11-14) y MP de plaquetas (MPP) (10, 15) lo que sugiere además papeles importantes en la hemostasia y la trombosis. Antes de esta descripción, no se ha localizado FT en MPGR.

Los presentes inventores han demostrado previamente que las MPP, MPL, MPE desempeñan papeles importantes en la hemostasia y la trombosis y la inflamación (1-3) . Notificaron que los antígenos de superficie en las MPE son distintivos pero que varían dependiendo del tipo de lesión de células endoteliales, por ejemplo apoptosis, activación (34) . Las MPE han mostrado que presentan actividad procoagulante y que están relacionadas con muchos estados trombóticos e inflamatorios, incluyendo lupus, EM y otros trastornos inflamatorios crónicos (2, 3, 10) . Se conoce además que la MPE porta el factor tisular (FT) . No obstante, no se ha dado a conocer un papel funcional de las MP en la mejora de enfermedades. La hipótesis de los presentes inventores era que dado que las MP son procoagulantes, podrían aprovecharse como agentes terapéuticos en trastornos hemorrágicos (3) .

Coller y colaboradores conjugaron RGD con glóbulos rojos para hacer que fuesen hemostáticamente activos y denominaron el producto tromboeritrocitos en 1992 [ (53) y patente estadounidense n.º 5.328.840) ]. Sin embargo, la invención de Coller no da a conocer ni anticipa los usos de las micropartículas de la presente invención. Se han notificado otras preparaciones de liposomas hemostáticos, incluyendo la conjugación de factores de coagulación tales como FVIII (54, 55) y fibrinógeno (56, 57) con los mismos o partículas de albúmina para producir vesículas hemostáticamente activas. Las modificaciones químicas de liposomas artificiales incluyen moléculas de adhesión específicas de plaquetas tales como GpIIb/IIIa y Ib/IX conjugadas con liposomas sintéticos o con albúmina para producir “plaquetas artificiales” (58-61) .

Existen desventajas en estos enfoques. Las micropartículas sintéticas pueden activar la cascada del complemento, creando complicaciones adversas y pueden inducir reacciones inmunitarias, lo que conduce a respuestas autoinmunitarias. Aún no ha surgido ningún método que use MP o células sanguíneas sintéticas que pueda ponerse en práctica clínicamente y existen pocos estudios clínicos de seguimiento. La presente invención emplea micropartículas (MP) novedosas, en particular micropartículas de glóbulos rojos (MPGR, red cell microparticles) , como agentes para este fin. En una realización, las micropartículas... [Seguir leyendo]

1. Micropartículas derivadas de glóbulos rojos (MPGR) o variantes modificadas químicamente de las mismas producidas mediante injerto o conjugación de moléculas de adhesión o factores de coagulación recombinantes en la superficie de las MPGR para su uso en un método de tratamiento de un estado de hemorragia excesiva en un mamífero aumentando la hemostasia.

2. Micropartículas derivadas de glóbulos rojos (MPGR) o variantes modificadas químicamente de las mismas para su uso según la reivindicación 1, en las que el mamífero es un ser humano.

3. Micropartículas derivadas de glóbulos rojos (MPGR) o variantes modificadas químicamente de las mismas para su uso según la reivindicación 1, en las que el estado de hemorragia excesiva está causado por un trastorno clínico.

4. Micropartículas derivadas de glóbulos rojos (MPGR) o variantes modificadas químicamente de las mismas para su uso según la reivindicación 2, en las que el ser humano padece un trastorno de la coagulación sanguínea.

5. Micropartículas derivadas de glóbulos rojos (MPGR) o variantes modificadas químicamente de las mismas para su uso según la reivindicación 2, en las que el ser humano padece una enfermedad o trastorno seleccionado del grupo que consiste en púrpura trombocitopénica idiopática o inmunitaria, trombocitopenia inducida por fármacos y quimioterapia, trombocitopenias de diferentes causas tanto congénitas como adquiridas y alteración de la función plaquetaria, tanto congénita como adquirida.

6. Micropartículas derivadas de glóbulos rojos (MPGR) o variantes modificadas químicamente de las mismas para su uso según la reivindicación 3, en las que la trombocitopenia está inducida por un agente quimiotóxico.

7. Micropartículas derivadas de glóbulos rojos (MPGR) o variantes modificadas químicamente de las mismas para su uso según la reivindicación 6, en las que el agente quimiotóxico se administra durante la quimioterapia.

8. Micropartículas derivadas de glóbulos rojos (MPGR) o variantes modificadas químicamente de las mismas para su uso según la reivindicación 1, en las que el estado de hemorragia excesiva está causado por una lesión traumática, intervenciones quirúrgicas o procedimientos terapéuticos o de diagnóstico invasivos, en los que pueden ser sustanciales la hemorragia y la pérdida de sangre.

9. Micropartículas derivadas de glóbulos rojos (MPGR) o variantes modificadas químicamente de las mismas para su uso según una de las reivindicaciones 1 a 8, en las que las MPGR se han derivado de los glóbulos rojos del individuo que va a tratarse.

10. Micropartículas derivadas de glóbulos rojos (MPGR) o variantes modificadas químicamente de las mismas para su uso según la reivindicación 1, promoviendo las micropartículas derivadas de glóbulos rojos (MPGR) la formación de coágulos sanguíneos y estimulando la adhesión y agregación plaquetarias.

11. Micropartículas derivadas de glóbulos rojos (MPGR) o variantes modificadas químicamente de las mismas para su uso según una de las reivindicaciones anteriores, siendo las micropartículas derivadas de glóbulos rojos (MPGR) o variantes modificadas químicamente de las mismas para la administración en una dosificación de micropartículas de entre 106 y 1012/kg.

12. Micropartículas derivadas de glóbulos rojos (MPGR) o variantes modificadas químicamente de las mismas para su uso según la reivindicación 11, siendo las micropartículas derivadas de glóbulos rojos (MPGR) o variantes modificadas químicamente de las mismas para la administración en una dosificación de entre 108 y 1010/kg.

13. Micropartículas derivadas de glóbulos rojos (MPGR) o variantes modificadas químicamente de las mismas para su uso según una de las reivindicaciones anteriores, siendo las micropartículas derivadas de glóbulos rojos (MPGR) o variantes modificadas químicamente de las mismas para la administración por vía intravenosa.

14. Micropartículas derivadas de glóbulos rojos (MPGR) o variantes modificadas químicamente de las mismas para su uso según una de las reivindicaciones anteriores, siendo las micropartículas derivadas de glóbulos rojos (MPGR) o variantes modificadas químicamente de las mismas para la administración local o tópicamente.