MÉTODO PARA LA EVALUCIÓN DE LA ACTIVIDAD INHIBITORIA DE ANTICUERPOS CONTRA EL RECEPTOR DEL FACTOR DE CRECIMIENTO I DE TIPO INSULINA.

Método para la evaluación de la actividad inhibitoria de anticuerpos contra el receptor del factor de crecimiento I de tipo insulina. La presente invención se refiere a métodos para la evaluación de la actividad inhibitoria de anticuerpos contra el receptor de factor de crecimiento I de tipo insulina (IGF-1R), a métodos para la predicción de las propiedades farmacocinéticas y farmacodinámicas de dichos anticuerpos y a métodos para la predicción de un resultado clínico de un tratamiento en un paciente al que se administra dicho anticuerpo. El receptor del factor de crecimiento I de tipo insulina (antígeno IGF-1R, EC 2.7.112, CD 221) pertenece a la familia de las tirosina quinasas de la proteína de transmembrana (LeRoith, D., y otros, Endocrin. Rev. 16 (1995) 143-163; y Adams, T.E., y otros, Cell. Mol. Life Sci. 57 (2000) 1050-1093). El IGF-1R se une a IGF-1 con elevada afinidad e inicia la respuesta fisiológica a este ligando en vivo. El IGF-1R se une también a IGF-2, no obstante, con una afinidad ligeramente menor. La sobre-expresión de IGF-1R promociona la transformación neoplásica de células y existen pruebas de que el IGF-1R está involucrado en la transformación maligna de células y, por lo tanto, es un objetivo útil para el desarrollo de agentes terapéuticos para el tratamiento de cáncer (Adams, T.E., y otros, Cell. Mol. Life Sci. 57 (2000) 1050-1093). El factor de crecimiento I (IGF-I) de tipo insulina es un mitógeno importante para células de músculos lisos vasculares (VSMC). El receptor de IGF-I es un heterotetrámero compuesto de dos cadenas alpha extracelulares entrecruzadas y dos cadenas beta que abarcan la membrana, que contienen un dominio de tirosina-quinasa. Tiene un elevado grado de similitud de secuencia al receptor de insulina (IR) y el lugar de unión específico del ligando putativo ha sido localizado en una región rica en cisteína (CRR) de la cadena alpha (Adams, T. E., y otros, Cell. Mol. Life Sci 57 (2000) 1050-1093). Los anticuerpos contra IGF-1R son bien conocidos en el estado de la técnica y han sido investigados en cuanto a sus efectos antitumorales in vitro e in vivo (Benini, S., y otros, Clin. Cancer Res. 7 (2001) 1790-1797; Scotlandi, K., y otros, Cancer Gene Ther. 9 (2002) 296-307; Scotlandi, K., y otros, Int. J. Cancer 101 (2002) 11-16; Brunetti, A., y otros, Biochem. Biophys. Res. Commun. 165 (1989) 212-218; Prigent, S.A., y otros, J. Biol. Chem. 265 (1990) 9970- 9977; Li, S.L., y otros, Cancer Immunol. Immunother. 49 (2000) 243-252; Pessino, A., y otros, Biochem. Biophys. Res. Commun. 162 (1989) 1236-1243; Surinya, K.H., y otros, J. Biol. Chem. 277 (2002) 16718-16725; Soos, M.A., y otros, J. Biol. Chem., 267 (1992) 12955-12963; Soos, M.A., y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86 (1989) 5217-5221; OBrien, R.M., y otros, EMBO J. 6 (1987) 4003-4010; Taylor, R., y otros, Biochem. J. 242 (1987) 123-129; Soos, M.A., y otros, Biochem. J. 235 (1986) 199-208; Li, S.L., y otros, Biochem. Biophys. Res. Commun. 196 (1993) 92-98; Delafontaine, P., y otros, J. Mol. Cell. Cardiol. 26 (1994) 1659-1673; Kull, F.C. Jr., y otros, J. Biol. Chem. 258 (1983) 6561-6566; Morgan, D.O., y Roth, R.A., Biochemistry 25 (1986) 1364-1371; Forsayeth, J.R., y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84 (1987) 3448-3451; Schaefer, E.M., y otros, J. Biol. Chem. 265 (1990) 13248-13253; Gustafson, T.A., y Rutter, W.J., J. Biol. Chem. 265 (1990) 18663-18667; Hoyne, P.A., y otros, FEBS Lett. 469 (2000) 57-60; Tulloch, P.A., y otros, J. Struct. Biol. 125 (1999) 11-18; Rohlik, Q.T., y otros, Biochem. Biophys. Res. Comm. 149 (1987) 276-281; y Kalebic, T., y otros, Cancer Res. 54 (1994) 5531-5534; Adams, T. E., y otros, Cell. Mol. Life Sci. 57 (2000) 1050-1093; Dricu, A., y otros, Glycobiology 9 (1999) 571-579; Kanter-Lewensohn, L., y otros, Melanoma Res. 8 (1998) 389-397; Li, S.L., y otros, Cancer Immunol. Immunother. 49 (2000) 243-252). Los anticuerpos contra IGF-1R se describen también en muchas otras publicaciones, por ejemplo, Arteaga, C.L., y otros, Breast Cancer Res. Treatment 22 (1992) 101-106; y Hailey, J., y otros, Mol. Cancer Ther. 1 (2002) 1349-1353. En particular, el anticuerpo monoclonal contra IGF-1R llamado IR3 es ampliamente utilizado en la investigación de estudio de procesos mediados por IGF-1R y enfermedades mediadas por IGF-1 tales como cáncer. El anticuerpo alpha-IR-3 fue descrito por Kull, F.C., J. Biol. Chem. 258 (1983) 6561-6566. Mientras tanto, se han editado aproximadamente un centenar de publicaciones que tratan con la investigación y utilización terapéutica de IR3 con respecto a su efecto antitumoral, solo y junto con agentes citostáticos tales como doxorubicina y vincristina. El IR3 es un anticuerpo monoclonal murino que se sabe que inhibe IGF-1 que se une al receptor de IGF pero no a IGF-2 que se une a IGF-1R. El IR3 estimula a elevadas concentraciones la proliferación de células de tumor y la fosforilación de IGF-1R (Bergmann, U., y otros, Cancer Res. 55 (1995) 2007-2011; Kato, H., y otros, J. Biol. Chem. 268 (1993) 2655-2661). Existen otros anticuerpos (por ejemplo, 1H7, Li, S.L., y otros, Cancer Immunol. Immunother. 49 (2000) 243-252) que inhiben la unión de IGF-2 a IGF-1R de manera más potente que la unión de IGF-1. Un resumen del estado de la técnica de anticuerpo y sus propiedades y características se ha descrito por Adams, T.E., y otros, Cell. Mol. Life Sci. 57 (2000) 1050-1093. La mayor parte de los anticuerpos descritos en el estado de la técnica son de origen murino. Estos anticuerpos, tal como es bien conocido en el estado de la técnica, no son útiles para la terapia de pacientes humanos sin alteraciones adicionales, tales como quimerización o humanización. Basándose en estos inconvenientes, los anticuerpos humanos son claramente preferentes como agentes terapéuticos en el tratamiento de pacientes humanos. Los anticuerpos humanos son bien conocidos en el estado de la técnica (van Dijk, M.A., y van de Winkel, J.G., Curr. Opin. Pharmacol. 5 (2001) 368-374). Basándose en esta tecnología, se pueden producir anticuerpos humanos contra una gran variedad de objetivos. Se mencionan anticuerpos terapéuticos quiméricos, humanizados y humanos contra IGF-1R en los documentos WO 02/053596, WO 2004/071529, WO 2005/016967 WO 2006/008639, US 2005/0249730, US 2005/0084906, WO 2005/058967, WO 2006/013472, US 2003/0165502, WO 2005/082415, 2   WO 2005/016970, WO 03/106621, WO 04/083248, WO 2003/100008, WO 2004/087756, WO 2005/005635 y WO 2005/094376. Los inmunoensayos estándar de fase sólida con anticuerpos monoclonales comportan la formación de un complejo entre anticuerpo adsorbido en una fase sólida (anticuerpo captado), antígeno y anticuerpo a otro epítopo del antígeno conjugado con una enzima (anticuerpo trazador). De esta manera, se forma un sándwich: fase sólida - anticuerpo captado - antígeno - anticuerpo trazador. En la reacción catalizada por el sándwich, la actividad de la enzima conjugada al anticuerpo es proporcional a la concentración de antígeno en el medio de incubación. El método sándwich estándar se llama también inmunoensayo puente de antígeno doble porque los anticuerpos de captación y trazador se unen a diferentes epítopos del antígeno. La invención se refiere a métodos para la evaluación de la actividad inhibitoria de anticuerpos contra el receptor del factor de crecimiento (IGF-1R) de tipo insulina, a métodos para la predicción de las propiedades farmacocinéticas y farmacodinámicas de dichos anticuerpos y a métodos para la predicción de un resultado clínico de un tratamiento en un paciente, en el que se administra dicho anticuerpo. Los ensayos para la determinación de IGF-1R son bien conocidos en el estado de la técnica (por ejemplo, WO 02/053596, WO 2004/087756 y WO 2005/005635), no obstante se han utilizado como muestras células con sobre-expresión de IGF-1R (células 3T3) o se han llevado a cabo mediciones por citometría de flujo (Cohen, B.D., Clin. Cancer Res. 11 (2005) 2063-2073). Existe una necesidad de medición y control del resultado farmacocinético y farmacodinámico de un tratamiento de un paciente con un anticuerpo contra IGF-1R. Esta medición y control se pueden llevar a cabo, por ejemplo, por medición de los niveles de expresión de IGF-1R (Kornprat, P., J. Clin. Path. 59 (2006) 202-206) o el estado de fosforilación de IGF-1R (Chen, J.W., Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 284 (2003) e1149-e1155) en biopsias de tumores. También se ha sugerido medir el agotamiento de IGF-1R en pacientes (Cohen, B.D., Clin. Cancer Res. 11 (2005) 2063-2073). El tratamiento ex vivo de sangre con un anticuerpo contra IGF-1R ha resultado en la regulación descendente de IGF-IR en células mononucleares de sangre periférica humana, según el control por citometría de flujo. Resumen de la invención La invención comprende un método para la determinación de IGF-1R en una muestra de inmunoensayo en fase sólida,... [Seguir leyendo]

1. Método para la determinación de IGF-1R en una muestra por inmunoensayo en fase sólida, caracterizado porque dicha muestra es un preparado de linfocitos de sangre periférica de mamífero sometidos a lisis (muestra de PBL sometida a lisis). 2. Método, según la reivindicación 1, caracterizado porque el mamífero es un ser humano o un mono. 3. Método, según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque el nivel de proteína de IGF-1R es determinado como medición para la actividad in vivo de un anticuerpo contra IGF-1R administrado a dicho mamífero. 4. Método para la evaluación de la actividad in vivo de un anticuerpo contra IGF-1R en un mamífero tratado con dicho anticuerpo, caracterizado porque en una muestra de PBL sometida a lisis de dicho mamífero, el nivel de proteína de IGF-1R es determinado como medición para la actividad in vivo de dicho anticuerpo. 5. Método para la predicción de una característica farmacodinámica o farmacocinética de un anticuerpo contra IGF- 1R en un mamífero tratado con dicho anticuerpo, caracterizado porque en una muestra de PBL sometida a lisis de dicho mamífero, el nivel de proteína de IGF-1R es determinado como medición de dicha predicción. 6. Método para la predicción de los resultados clínicos o determinación de un curso de tratamiento en un paciente al que ha sido administrado un antídoto contra IGF-1R, caracterizado por comprender las etapas de determinar el nivel de proteína de IGF-1R en una muestra de PBL sometida a lisis de dicho paciente, una primera vez, comparar dicho nivel de proteína con dicho nivel determinado una segunda vez. 7. Método, según la reivindicación 6, caracterizado porque el tiempo para el muestreo es o bien antes, durante y/o después de la administración. 8. Método, según las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque el nivel de proteína de IGF-1R es medido por ELISA. 9. Método, según las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque el primer y segundo anticuerpos utilizados son dos anticuerpos monoclonales que se unen a diferentes epítopos de un anticuerpo monoclonal y un anticuerpo policlonal contra IGF-1R.   11   12