MÉTODO DE DETECCIÓN DE LA SUSCEPTIBILIDAD A DESARROLLAR EFECTOS SECUNDARIOS ADVERSOS RELACIONADOS CON BIOIMPLANTES.

Método de detección de la susceptibilidad a desarrollar efectos secundarios adversos relacionados con bioimplantes.

Método in vitro para el análisis de la predisposición genética de un individuo a desarrollar efectos adversos relacionados con materiales no metálicos implantados en el cuerpo. El método comprende determinar si en una muestra biológica de un individuo está presente el antígeno HLA-DRB1*3 del complejo mayor de histocompatibilidad. También se describe el uso de un kit para llevar a cabo la determinación y el empleo del antígeno como marcador genético.

Método de detección de la susceptibilidad a desarrollar efectos secundarios adversos relacionados con bioimplantes.

La presente invención está relacionada con la medicina, más concretamente está relacionada con los efectos adversos derivados de los bioimplantes que son aplicados o insertados en el organismo principalmente por razones estéticas (cosméticaso terapéuticas) .Lainvenciónva dirigidaala preservacióndela saludyproporciona herramientaspara analizar el riesgo de efectos secundarios severos derivados de la aplicación de dichos bioimplantes.

Estado de la técnica anterior

Existecadavezunmayor númerode personasquebuscan soluciones médicasparalapielcon aparienciaenvejecidao bien con finalidades puramente estéticasycosméticas. Otras personas, debidoa situaciones patológicas, optan también por el empleo de bioimplantes. Un bioimplante se define como un material implantado quirúrgicamente en el cuerpodeunapersonapara reemplazaruntejido dañado.El término bioimplantedefineunaclasedeimplantequeestá generalmente asociado a un implante no metálico. Las áreas comunes de aplicación de dichos bioimplantes incluyen la cirugía ortopédica reconstructiva (en particular la maxilofacial) , las prótesis para aumento de mamas, las prótesis cardíacas (válvulas cardíacas artificiales como la válvula de corazón Chitra) , cutáneas y de la córnea. Una clase de bioimplantes ampliamente utilizados hoy en día son los implantes poliméricos o cerámicos, siendo un ejemplo de los mismos los implantesderellenoo microprótesis dérmicosysub-dérmicos.

Actualmente, losmédicos especialistas pueden utilizar diferentes tiposde implantesde relleno dérmicosysubdérmicos, incluyendo los materiales no permanentes, permanentes, reversibles o no reversibles. Los implantes de relleno dérmicos y sub-dérmicos son materiales que se inyectan para corregir las arrugas, líneas de expresión, lipodistrofia y otros rasgos que un individuo puede desear o necesitar corregir, principalmente a nivel facial. Estos compuestos se emplean para rellenar las cavidades o estrías en el tejido dérmico ocasionadas por múltiples diferentes causas. Se han propuesto diversas clasificaciones de implantes de relleno según su origenylongevidad (duración) . En la actualidad, la mayoría de implantes de relleno utilizados en todo el mundo son acrilamidas (compuestos de poliacrilamidaypolialquilimida) , compuestos del ácido hialurónico, ácido poliláctico, compuestos de polimetilmetacrilato, hidroxiapatita cálcicayaceite de silicona. Aunque losfabricantesylas diferentes publicaciones sostienen quelos implantesderellenonoson tóxicosy nosoninmunogénicos, yquelas complicacionesderivadasdesuuso no son muy comunes, en realidad se han detectado efectos secundarios indeseados con todos los compuestos utilizados. Algunos de estos efectos secundarios son efectos de aparición tardía, los cuales en muchos casos son difíciles de correlacionar con el empleo de dichos implantes de relleno o bioimplantes. Los efectos secundarios adversos asociadosalainyecciónde implantesde relleno dérmicoso sub-dérmicos pueden ser efectos secundariosseveros, que derivan hacia manifestaciones locales granulomatosas crónicasy, aunque raramente, a enfermedades autoinmunes. Así, se observa que en la clasificación habitual de los implantes de relleno utilizados, existe todavía la necesidad de definir otrosdos conceptos:laseguridadalargo plazoylareversibilidaddelos efectos secundarios derivados de los mismos.

Cuando un material de relleno dérmico es inyectado, tienen lugar las reacciones normales de tipo cuerpo extraño (los llamados “granulomas estables”) . Desafortunadamente, en algunas personas dichos granulomas estables se conviertenen granulomas nocivos inflamatoriosypersistentes, en trastornos granulomatososo, si bienen rarasocasiones, en enfermedades autoinmunes. Algunas veces los efectos secundarios indeseables derivados del material de relleno aparecen duranteun traumatismo menorodespuésde una infección. Existela hipótesisquelos antecedentes genéticos (propiosyespecíficos de cada individuo) deben jugar un papel importante en el desarrollo de estas reacciones adversas, pero aún se desconoce su origenexactoy no se pueden efectuar predicciones. Este hecho representa un verdadero problema si se considera el número creciente de personas que optan por el empleo de estas clases de bioimplantes.

Entre los pacientes que presentan efectos adversos inmediatos o tardíos relacionados con los implantes de relleno dérmicos, la mayoría de ellos presentan efectos secundarios locales o generales, principalmente relacionados con enfermedades del tejido conectivo. Cabe destacar que varios de los pacientes presentan trastornos inmunomediados sistémicos inflamatorios, tales como esclerodermiaosíndrome esclerodermiformes, polimiositis, síndromede Sjögren, sarcoidosis cutánea, trastornos granulomatosos, pneumonitisyenfermedad por adyuvante humana.

Una manera de detectar previamente si un individuo es susceptible a presentar efectos adversos inmediatos o tardíos (aparición tardía) relacionadoscon los implantesde rellenodérmicosysub-dérmicos, consiste eninyectar0.1 ml del implantede relleno intradérmicamente enladermis del antebrazoyvisualizarsiexiste reacción. Sin embargo, el tiempo que transcurre hasta la aparición de algunas reacciones es normalmente de 5-8 semanas. Además, en la biopsia (prueba) la dermis se lesiona. Por otra parte, las autoridades sanitarias discrepan de este procedimiento. Así, existe la necesidad de encontrar otras formas para detectar si un paciente reaccionará adversamente al implante de relleno colocado o inyectado.

El sistema de antígenos leucocitarios humanos (HLA) es el nombre del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) en humanos. Es un superlocus que contiene un gran número de genes relacionados con la función del sistema inmunológico en humanos.Todos estos genes están agrupados en un segmento de4Mb en el brazo cortodel cromosoma6en humanos.La región HLA comprende seis loci principales que codifican proteínas estructuralmente homologas, las cuales son clasificadas en la ClaseI HLA (HLA-A, B, Cw) yClase II (HLA-DR, DQ, DP) , que presentan antígenos a dos sub-conjuntos diferentes de células.

Las moléculasde ClaseIconsistenen dos cadenasde polipéptidos, α-yβ2-microglobulina. Las dos cadenas están unidas no covalentemente por medio de la interacción de la β2-microglobulinayel dominio α3. Solamente la cadena α espolimórficaycodificadaporelgenHLA, mientrasquelasubunidaddela β2-microglobulina no es polimórficayes codificada por el gen de la β2-microglobulina. El dominio α3se encuentra enel anclajedela membrana plasmáticae interacciona conel co-receptor transmembrana glucoproteínicoCD8delas célulasT.Los dominios α1yα2se pliegan para formar un surco para que los péptidos se unan. Las moléculasde ClaseIdel MHC se unena péptidos que tienen una longitud de 8-10 aminoácidos.

Enel casodel locus HLA-B, los polimorfismosse encuentranprincipalmentelocalizadosenlosexones2y3. Hasta la fecha, se conocen cientos de variantes alélicas de este locus, lo que significa que este locus es el más polimórfico de los loci HLA. Las variaciones alélicas del locus HLA-B son las más importantes en la selección de un posible transplante dentrodelas moléculasde ClaseI.Acada unadelasvariantes alélicasseledaun número particular (tal como HLA-B8) . Los alelos que están íntimamente relacionados se agrupan juntos; por ejemplo, existen por lo menos 54 alelos muy semejantesy que son subtipos de HLA-B8. Estos subtipos están designados como HLA-B*080101 a HLA-B*0854. El gen HLA-B comprende múltiples variaciones normales muy diferentes, lo que permite que el sistema inmmunológicodecada persona reaccionea una ampliagamadeinvasoresextraños.

Las moléculasdeClaseIIson glucoproteínas heterodiméricasquese componendeunacadenaalfano polimórfica yuna cadena beta polimórfica. Las moléculas de la ClaseII HLA (o MHC) seexpresanenla superficie celularde los macrófagos, célulasB, célulasTactivadas, yotros tiposde célulasinvolucradas enla presentaciónde antígenosa célulasTqueexpresanla glucoproteínaCD4enla superficiedela célula.Los genesDP, DQyDR están localizados en regiones separadas del MHC. En la región DR, un único locus DRA codifica la cadena DRalfa no polimórfica, pero nueve loci DRB diferentes, denominados DRB1 a DRB9, codifican la cadena polimórfica. Por otra parte, el número de alelos DRB identificados va aumentando continuamente.

En el caso del locus HLA-DRB1, diferentes alelos... [Seguir leyendo]

1. Método in vitro parael análisis de la predisposición genéticadeunindividuoa desarrollar efectosadversos relacionados con materiales no metálicos implantados en el cuerpo, que comprende determinar, en una muestra biológica de dicho individuo, la presencia del antígeno HLA-DRB1*3 del complejo mayor de histocompatibilidad;ydonde la presencia de dicho antígeno es indicativa de predisposición genética a desarrollar dichos efectos adversos.

2. Método según la reivindicación 1, donde la determinación de la presencia del antígeno HLA-DRB1*3 se lleva a cabo por genotipificación del alelo deHLA-DRB1*3;o cualquier alteración en desequilibriode enlace conel genque codifica dicho antígeno.

3. Métodosegúnlareivindicación2, dondeel alelodel antígeno HLA-DRB1*3seseleccionadel grupoque consiste en: HLA-DRB1*03010101, HLA-DRB1*03010102, HLA-DRB1*030102, HLA-DRB1*030103, HLADRB1*030104, HLA-DRB1*030105, HLA-DRB1*030106, HLA-DRB1*030107, HLA-DRB1*030108, HLADRB1*030201, HLA-DRB1*030202, HLA-DRB1*0303, HLA-DRB1*0304, HLA-DRB1*030501, HLADRB1*030502, HLA-DRB1*030503, HLA-DRB1*0306, HLA-DRB1*0307, HLA-DRB1*0308, HLA-DRB1*0309, HLA-DRB1*0310, HLA-DRB1*031101, HLA-DRB1*031102, HLA-DRB1*0312, HLA-DRB1*031301, HLADRB1*031302, HLA-DRB1*0314, HLA-DRB1*0315, HLA-DRB1*0316, HLA-DRB1*0317, HLADRB1*0318, HLA-DRB1*0319, HLA-DRB1*0320, HLA-DRB1*0321, HLA-DRB1*0322, HLA-DRB1*0323, HLA-DRB1*0324, HLA-DRB1*0325, HLA-DRB1*0326, HLA-DRB1*0327, HLA-DRB1*0328, HLADRB1*0329, HLA-DRB1*0330, HLA-DRB1*0331, HLA-DRB1*0332, HLA-DRB1*0333, HLA-DRB1*0334, HLA-DRB1*0335, HLA-DRB1*0336, HLA-DRB1*0337, HLA-DRB1*0338, HLA-DRB1*0339, HLADRB1*0340, HLA-DRB1*0341, HLA-DRB1*0342, HLA-DRB1*0343, HLA-DRB1*0344, HLA-DRB1*0345, HLA-DRB1*0346, HLA-DRB1*0347, HLA-DRB1*0348, HLA-DRB1*0349, HLA-DRB1*0350, HLADRB1*0351, yHLA-DRB1*0352.

4. Método según cualquiera de las reivindicaciones2-3, donde la genotipificación se efectúa por amplificación mediante PCR múltiple seguida de detección.

5. Método según cualquieradelas reivindicaciones 1-4, dondela muestra biológica es una muestrade sangre.

6. Método según cualquierade las reivindicaciones1-5, dondeel material no metálico implantado enel cuerpo es un material polimérico.

7. Métodosegúnlareivindicación6, dondeelmaterial poliméricose seleccionadel grupoque consisteen colágeno, ácidoL-poliláctico, poliacrilamida, polialquilimida, ácido hialurónico, politetrafluoroetileno, metacrilato, siliconay mezclas de los mismos.

8.Métodosegún cualquieradelasreivindicaciones1-7, dondelosefectosadversos relacionados conlos materiales no metálicos implantados en el cuerpo se seleccionan del grupo que consiste en rechazo al implante, lipoatrofia, trastornos granulomatosos, inflamación de nódulos, induración, angioedema, sarcoidosis, trastornos del sistema inmunemediado sistémico, sarcoidosis cutánea, pneumonitis, enfermedad por adyuvante humanaymás de uno de dichos efectos adversos.

9. Uso de un kit que comprende anticuerpos específicos para determinar la presencia delantígeno HLA-DRB1*3 delcomplejo mayorde histocompatibilidad, parael análisis de la predisposición genéticadeunindividuoa desarrollar efectos adversos relacionados con materiales no metálicos implantados en el cuerpo.

10. Uso de un kitque comprende sondas de oligonucleótidos con secuencia específica (SSOP) para efectuar la genotipificación del alelo de HLA-DRB1*3, o cualquier alteración en desequilibrio de enlace con el gen que codifica dicho antígeno, para el análisis de la predisposición genética de un individuo a desarrollar efectos adversos relacionados con materiales no metálicos implantados en el cuerpo.

11. Uso del antígeno HLA-DRB1*3, como marcador para el análisis de la predisposición genética de un individuo a desarrollar efectos adversos relacionados con materiales no metálicos implantados en el cuerpo.